張 威，張文中，郭 平*，胡重怡，呂小麗

（江西省食品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，江西 南昌 330001）

據(jù)聯(lián)合國糧食與農(nóng)業(yè)組織估計(jì)，全球的糧食作物及其產(chǎn)品中大約有1/4存在霉菌毒素污染[1-2]，給全球農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)帶來巨大損失[3]。這些毒素大部分具有肝臟毒性、腎臟毒性、致癌性、致畸性和致突變性等[4]。在所有霉菌毒素中，黃曲霉毒素（aflatoxin，AF）較為常見，而且毒性較強(qiáng)，據(jù)美國疾病控制中心報(bào)道，全球大約有45億 人面臨AF的暴露風(fēng)險(xiǎn)，主要集中在發(fā)展中國家[5]。AF是一大類結(jié)構(gòu)相似的化合物，屬于二氫呋喃香豆素的衍生物。其中，黃曲霉毒素B1（aflatoxin B1，AFB1）最為常見且毒素最強(qiáng)，其急性毒性是氰化鉀的10 倍、砒霜的68 倍，主要存在于花生、核桃、大豆、稻谷、玉米、小麥等農(nóng)作物及其油類副產(chǎn)品中，奶制品、調(diào)味品分布較少[6-9]。

我國GB 2761—2017《食品中真菌毒素限量》[10]規(guī)定花生油和玉米油中AFB1的限量值為20 μg/kg，其他植物油脂中AFB1的限量值為10 μg/kg。GB 5009.22—2016《食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定》[11]，包含同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、高效液相色譜-柱前衍生法、高效液相色譜-柱后衍生法等[12-14]。上述方法均為實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法，樣品前處理過程繁瑣、檢測(cè)時(shí)間長、成本高，難以滿足基層監(jiān)管過程中快速出檢測(cè)結(jié)果的需求[15]。當(dāng)前，國內(nèi)外市場(chǎng)上均有商品化的用于檢測(cè)食品中AF的膠體金免疫層析試紙條，該類檢測(cè)產(chǎn)品具有簡(jiǎn)便、快速、廉價(jià)、對(duì)操作人員要求較低、現(xiàn)場(chǎng)結(jié)果可視化等優(yōu)點(diǎn)，基本滿足基層監(jiān)管的需求，可配備于農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)快檢室、快檢車等，對(duì)農(nóng)產(chǎn)品及其制品中AF的監(jiān)管控制和風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警具有重要意義。到目前為止，國家食品安全監(jiān)管部門先后共發(fā)布了11 項(xiàng)食品快速檢測(cè)方法[16-18]，其中9 項(xiàng)是膠體金免疫層析法。由此可見，膠體金免疫層析法是目前食品快速檢測(cè)領(lǐng)域的主要方法。為規(guī)范快速檢測(cè)產(chǎn)品在食品監(jiān)管領(lǐng)域的應(yīng)用，有必要對(duì)該類產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，保證它們的可靠性。

在國內(nèi)，監(jiān)管部門對(duì)快速檢測(cè)試劑的管理還處于初步階段。國家各相關(guān)監(jiān)管部門先后發(fā)布了食品快速檢測(cè)試劑評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)或規(guī)范，以評(píng)價(jià)機(jī)制促使市場(chǎng)的優(yōu)勝劣汰，提高產(chǎn)品質(zhì)量，保證行業(yè)良性發(fā)展，使快速檢測(cè)在食品安全監(jiān)管中真正發(fā)揮到有效作用。2017年，原國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布食藥監(jiān)科[2017]49號(hào)《關(guān)于規(guī)范食品快速檢測(cè)方法使用管理的意見》[19]，第五條規(guī)定各?。▍^(qū)、市）、計(jì)劃單列市、副省級(jí)省會(huì)城市食品藥品監(jiān)管部門要按照食品藥品監(jiān)管總局制定發(fā)布的《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》[20]和相應(yīng)快速檢測(cè)方法等要求，通過盲樣測(cè)試、平行送實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)等方式對(duì)正在使用和擬采購的快速檢測(cè)產(chǎn)品進(jìn)行評(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)結(jié)果顯示不符合國家相應(yīng)要求的，要立即停止使用或者不得采購。同時(shí)，在通知中強(qiáng)調(diào)，在執(zhí)行上述規(guī)范時(shí)發(fā)現(xiàn)的問題，及時(shí)向總局科技標(biāo)準(zhǔn)司反饋?！妒称房焖贆z測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》作為食品快速檢測(cè)評(píng)價(jià)工作的綱領(lǐng)性文件，對(duì)食品快速檢測(cè)方法的目的、適用范圍、評(píng)價(jià)指標(biāo)、評(píng)價(jià)方法、評(píng)價(jià)步驟、評(píng)價(jià)結(jié)果及報(bào)告出具等列出了指導(dǎo)性要求。但是，在快速檢測(cè)試劑評(píng)價(jià)過程中的具體步驟未做說明，該規(guī)范有待逐步完善。例如，盲樣的制備方法、盲樣的均勻性和穩(wěn)定性確定方法、樣品添加量設(shè)置、樣品數(shù)量設(shè)置、檢測(cè)結(jié)果與參比方法的一致性判斷方法等。

本研究以AFB1膠體金免疫層析試紙條的評(píng)價(jià)為切入點(diǎn)，系統(tǒng)性地研究膠體金免疫層析類食品快速檢測(cè)產(chǎn)品評(píng)價(jià)過程中具體的操作問題，主要包括樣品制備（均勻性、穩(wěn)定性）、添加量設(shè)置、樣品量設(shè)置等。以期在國家規(guī)范內(nèi)，做好產(chǎn)品評(píng)價(jià)過程中的每一個(gè)細(xì)節(jié)，發(fā)現(xiàn)存在的問題并探討在實(shí)際工作中的解決方法。本研究旨在為各級(jí)監(jiān)管部門提供實(shí)踐依據(jù)，為快速檢測(cè)產(chǎn)品評(píng)價(jià)提供技術(shù)借鑒，有利于快速檢測(cè)市場(chǎng)的規(guī)范化。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

本次評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)使用的AFB1快速檢測(cè)試紙條/卡，采取網(wǎng)上咨詢，選擇3 家行業(yè)內(nèi)認(rèn)可度較高的公司的產(chǎn)品。為避免評(píng)價(jià)結(jié)果對(duì)生產(chǎn)廠家造成影響，對(duì)生產(chǎn)廠家進(jìn)行了編序（A、B、C公司）。

AFB1免疫親和柱 美國Romer公司；AFB1標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥98%） 國家糧食局科學(xué)研究院；甲醇（色譜純）西班牙Scharlab公司；乙醇（分析純） 西隴科學(xué)股份有限公司；NY針頭式過濾器 日本島津公司；磷酸緩沖液（10 mmol/L，pH 7.4） 美國Sigma公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Acquity UPLC H-class超高效液相色譜儀、Acquity UPLC BEH C18色譜柱 美國Waters公司；DHG-9420A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海一恒科學(xué)儀器有限公司；M i l l i-Q超純水處理系統(tǒng) 美國密理博公司；QUINTIX213-1CN電子天平 德國賽多利斯公司；MMV-1000W振蕩器 上海愛朗儀器有限公司；RCT basic磁力攪拌器 德國艾卡公司。

1.3 方法

1.3.1 添加回收實(shí)驗(yàn)

快速檢測(cè)產(chǎn)品評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)涉及到盲樣添加量實(shí)驗(yàn)室測(cè)定賦值、盲樣均勻性和穩(wěn)定性驗(yàn)證，為確保儀器檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性，在開展盲樣制備之前先開展食用油中AFB1添加回收實(shí)驗(yàn)。選取不含AFB1的花生油，添加AFB1標(biāo)準(zhǔn)品，然后用儀器分析，檢測(cè)其含量，并計(jì)算回收率。具體步驟如下：1）選取花生油樣本（AFB1含量低）；2）制備9 個(gè)樣品，平均分成3 組。每組樣品中添加不同水平的標(biāo)準(zhǔn)品，3 個(gè)添加量分別為10、16、20 μg/kg。3）以GB 5009.22—2016[11]的第三法：高效液相色譜-柱后衍生法（大流通池直接檢測(cè)），對(duì)上述樣品進(jìn)行檢測(cè)，并計(jì)算樣品的添加回收率。

1.3.2 盲樣制備

根據(jù)《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》[20]，制備盲樣的基質(zhì)應(yīng)與實(shí)際食品樣品所含物質(zhì)相似，本次評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)所用基質(zhì)為花生油。該規(guī)范同時(shí)對(duì)測(cè)試水平提出了要求，測(cè)試水平一般應(yīng)包括食品基質(zhì)空白樣品，標(biāo)準(zhǔn)方法檢出水平（或者標(biāo)準(zhǔn)限量值）的0.5、1、2 倍水平或者其他可檢測(cè)區(qū)分的水平（不少于3 個(gè)），方法標(biāo)稱檢測(cè)限0.5、1、2 倍水平或者其他可檢測(cè)區(qū)分的水平（不少于3 個(gè)）。按照規(guī)范[9]附表，將樣品按性質(zhì)分為陽性和陰性兩大類，則含量在20 μg/kg（限量值）以上的樣品為陽性樣品，其他含量的樣品為陰性樣品。本次評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)設(shè)置4 個(gè)測(cè)試水平，分別為空白樣品、10 μg/kg（陰性樣品1）、16 μg/kg（陰性樣品2）、20 μg/kg（陽性樣品1）。

從市場(chǎng)上購買多種花生油，經(jīng)儀器分析確證，AFB1都有檢出，最終選取AFB1含量低（0.65 μg/kg）的花生油作為空白樣品。向花生油中加入AFB1標(biāo)準(zhǔn)品，磁力攪拌器室溫條件攪拌12 h，制備成上述4 個(gè)水平的樣品，再用儀器檢測(cè)盲樣的均勻性和穩(wěn)定性。

1.3.3 盲樣的均勻性和穩(wěn)定性檢驗(yàn)

為保證快速檢測(cè)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和公正性，根據(jù)規(guī)范“盲樣必須進(jìn)行批內(nèi)均勻性檢查，對(duì)于一定時(shí)間范圍內(nèi)檢測(cè)的樣品，需要進(jìn)行穩(wěn)定性檢查，保證在評(píng)價(jià)期限內(nèi)樣品穩(wěn)定”。本實(shí)驗(yàn)參考CNAS-GL003∶2018《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》[21]，將1.3.2節(jié)制備的各添加量的盲樣進(jìn)行分裝（5 g/管），先用儀器進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè)樣品在重復(fù)條件下檢測(cè)3 次。采用單因素方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，使用的軟件為IBM SPSS Statistics 22，通過F檢驗(yàn)驗(yàn)證樣品的均勻性[21]。

將其余樣品置-20 ℃貯存，分別間隔1、2、3 周取出，每次取出3 個(gè)樣品，每個(gè)樣品重復(fù)檢測(cè)3 次。參考CNAS-GL003∶2018[21]的方法，將不同貯存時(shí)間的檢測(cè)平均值與初始檢測(cè)平均值進(jìn)行一致性比較，采用t檢驗(yàn)法考察樣品在評(píng)價(jià)期內(nèi)的穩(wěn)定性。

1.3.4 快速檢測(cè)產(chǎn)品評(píng)價(jià)與結(jié)果統(tǒng)計(jì)

挑選有長期快速檢測(cè)工作經(jīng)驗(yàn)的人員進(jìn)行評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)，每種快速檢測(cè)產(chǎn)品必需來源于同一個(gè)批次。在實(shí)驗(yàn)開展前對(duì)快速檢測(cè)產(chǎn)品進(jìn)行檢查，主要針對(duì)外包裝、試劑與輔助設(shè)備、產(chǎn)品說明書、產(chǎn)品基質(zhì)的適用范圍、標(biāo)示檢測(cè)限等。根據(jù)國家規(guī)范[22]中的指導(dǎo)性建議，每個(gè)測(cè)試添加量樣品的數(shù)量不少于50 例。因此，4 個(gè)添加量的盲樣共分裝出了250 例測(cè)試樣品，其中空白樣品、陰性樣品1、陰性樣品2均為50 例，陽性樣品1為100 例。按照AFB1的快速檢測(cè)方法[23]和各產(chǎn)品說明書的要求進(jìn)行樣品前處理、快速檢測(cè)測(cè)試、結(jié)果判讀，并詳細(xì)記錄測(cè)試環(huán)境和快速檢測(cè)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)過程中，用每批樣品測(cè)試快速檢測(cè)產(chǎn)品的同時(shí)進(jìn)行質(zhì)控實(shí)驗(yàn)，分別選取2 份空白樣品和2 份空白加標(biāo)樣品（20 μg/kg）與測(cè)試樣品同時(shí)進(jìn)行，確保評(píng)價(jià)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

按照國家規(guī)范[22]中“快速檢測(cè)方法性能指標(biāo)計(jì)算表”可計(jì)算出快速檢測(cè)產(chǎn)品的各項(xiàng)性能指標(biāo)。在評(píng)價(jià)測(cè)試的同時(shí)，對(duì)各快速檢測(cè)產(chǎn)品的檢測(cè)時(shí)間進(jìn)行考察。按照3 個(gè)廠家自帶的產(chǎn)品說明書進(jìn)行樣品前處理、快速檢測(cè)產(chǎn)品測(cè)試、結(jié)果判讀，記錄3 種快速檢測(cè)產(chǎn)品整個(gè)檢測(cè)過程所需時(shí)間。

2 結(jié)果與分析

2.1 添加回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

花生油中普遍可檢出AFB1，難以收集到不含該毒素的樣品，因此本實(shí)驗(yàn)采用AFB1含量低（0.65 μg/kg）的樣品作為空白樣品，以GB 5009.22—2016[11]的第三法進(jìn)行檢測(cè)。為保證儀器檢測(cè)盲樣均勻性和穩(wěn)定性結(jié)果的科學(xué)性，在開展評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)前，先驗(yàn)證花生油中AFB1的添加回收率，見表1。此添加回收實(shí)驗(yàn)的回收率范圍為89.52%～100.3%，符合GB/T 27417—2017《合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》[24]中“方法回收率偏差范圍”。

表1 花生油中AFB1回收率Table 1 Recoveries of AFB1 spiked in peanut oil

2.2 樣品的均勻性檢驗(yàn)結(jié)果

表2 3 種添加量樣品的均勻性檢測(cè)結(jié)果Table 2 Results for uniformity evaluation of samples spiked at three concentration levels

按照CNAS-GL003∶2018[21]對(duì)樣品的均勻性和穩(wěn)定性進(jìn)行驗(yàn)證。首先對(duì)各添加量的盲樣均勻性進(jìn)行檢測(cè)。然后，采用F檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，SPSS軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果的F值，均勻性檢測(cè)結(jié)果見表2、3。3 個(gè)添加量的F值均小于F臨界值[25]，P值均大于0.05，此結(jié)果表明在顯著水平α=0.05時(shí)，同一添加量的所有樣品間無顯著性差異，即制備的樣品均勻。

表3 測(cè)試樣品的均勻性分析Table 3 Uniformity analysis of tested samples

2.3 樣品的穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果

盲樣制備完成后置于-20 ℃條件保存，從中取出用于穩(wěn)定性檢測(cè)的樣品，每次取出3 個(gè)樣品，按GB 5009.22—2016[11]第三法進(jìn)行檢測(cè)，每隔1 周檢測(cè)1 次，每個(gè)樣品重復(fù)檢測(cè)3 次，檢測(cè)結(jié)果見表4。

表4 測(cè)試樣品的穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果Table 4 Results for stability evaluation of tested samples

表5 測(cè)試樣品的穩(wěn)定性分析Table 5 Stability analysis of tested samples

將不同貯存時(shí)間樣品的平均值與初始檢測(cè)平均值進(jìn)行一致性比較，按照CNAS-GL003∶2018[21]中穩(wěn)定性檢驗(yàn)的要求，計(jì)算t值，見表5。查GB/T 15000.5—1994的附錄F可知t0.05(37)=2.026[25]，t值均大于2.026，表明各貯存時(shí)間的檢測(cè)結(jié)果與初始檢測(cè)結(jié)果之間存在顯著性差異。但是從各時(shí)間段檢測(cè)結(jié)果的平均值表現(xiàn)出變異程度較小。快速檢測(cè)產(chǎn)品本身只是對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行初步篩查，對(duì)化合物的含量要求不需高度精確。因此，以本研究中的方法制備樣品，在短時(shí)間內(nèi)完成快速檢測(cè)產(chǎn)品的評(píng)價(jià)，對(duì)評(píng)價(jià)結(jié)果的影響會(huì)較小。

2.4 產(chǎn)品的外觀與適用性

實(shí)驗(yàn)前對(duì)3 個(gè)不同廠家的快速檢測(cè)產(chǎn)品的包裝、試劑和配件（滴管、96 孔架等）等進(jìn)行檢查。它們的外包裝都完整（無破損）、試劑齊全且密封完好、附帶說明書、基質(zhì)適用范圍合適、檢測(cè)限描述清楚，見表6。各廠家快速檢測(cè)產(chǎn)品的檢測(cè)限分別為5～50、10、20 μg/kg和8～20 μg/kg。不同檢測(cè)限所對(duì)應(yīng)的樣品前處理操作略有不同，開展實(shí)驗(yàn)前需要按照目標(biāo)檢測(cè)限對(duì)應(yīng)的方法進(jìn)行操作。GB 2761—2017[10]和AFB1快速檢測(cè)方法[23]要求花生油中的檢測(cè)限均為20 μg/kg，各廠家的快速檢測(cè)產(chǎn)品檢測(cè)限符合要求。

表6 快速檢測(cè)產(chǎn)品外觀檢查結(jié)果Table 6 Characteristics of rapid test products

在實(shí)際應(yīng)用中，快速檢測(cè)產(chǎn)品主要用于基層監(jiān)管人員在市場(chǎng)上進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢查，需要考察快速檢測(cè)產(chǎn)品在現(xiàn)場(chǎng)檢查中的適用性，例如，環(huán)境條件（溫度、濕度）、樣品前處理復(fù)雜程度、配套輔助設(shè)備（冰箱、離心機(jī)等）等。本研究從貯存條件、測(cè)試環(huán)境條件、提取液配制、樣品前處理步驟、配套輔助設(shè)備、檢測(cè)時(shí)間6 個(gè)方面對(duì)各廠家快速檢測(cè)產(chǎn)品的適用性進(jìn)行評(píng)價(jià)，見表7。3 種快速檢測(cè)產(chǎn)品都可在常溫下貯存，便于攜帶和使用；測(cè)試環(huán)境可全部在室溫下進(jìn)行，無特定條件；A、B、C廠家的提取溶液分別為70%甲醇（現(xiàn)配）、提取劑（自帶）、50%乙醇（現(xiàn)配）。3 種快速檢測(cè)產(chǎn)品對(duì)應(yīng)的樣品前處理方法簡(jiǎn)單、輔助儀器少，都需要移液槍。其中，A廠家的前處理中有稀釋步驟，B廠家的前處理中有稀釋和靜置分層過程，C廠家的前處理中有稀釋、混勻、溫育過程。由此可見，A廠家的樣品前處理最簡(jiǎn)單，檢測(cè)用時(shí)較少，C廠家的樣品前處理最復(fù)雜，用時(shí)稍長。綜上所述，3 種快速檢測(cè)產(chǎn)品在現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用中可較好地完成檢測(cè)任務(wù)，適用性良好。

表7 快速檢測(cè)產(chǎn)品的適用性評(píng)價(jià)Table 7 Applicability evaluation of rapid test products

2.5 產(chǎn)品測(cè)試結(jié)果

通過制備的樣品對(duì)各廠家的快速檢測(cè)產(chǎn)品進(jìn)行測(cè)試，按照“快速檢測(cè)方法性能指標(biāo)計(jì)算表”[20]對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，見表8。結(jié)果表明：添加量為1 倍限量值時(shí)，A、B、C廠家快速檢測(cè)產(chǎn)品的陽性檢測(cè)結(jié)果的概率分別為83%、100%、100%；添加量為0.8 倍限量值時(shí)，A、B、C廠家快速檢測(cè)產(chǎn)品的陽性檢測(cè)結(jié)果的概率分別為51%、96%、62%；添加量為0.5 倍限量值時(shí)，A、B、C廠家快速檢測(cè)產(chǎn)品的陽性檢測(cè)結(jié)果概率分別為12%、0%、0%。按照AFB1快速檢測(cè)方法（KJ 201708）[23]中的快速檢測(cè)產(chǎn)品性能指標(biāo)的要求（假陽性率≤10%、假陰性率≤1%、靈敏度≥99%、特異性應(yīng)≥90%），此3 種快速檢測(cè)產(chǎn)品性能均不達(dá)標(biāo)。

表8 AFB1快速檢測(cè)產(chǎn)品評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果Table 8 Statistical results for evaluation of rapid test products

膠體金免疫層析法原理是抗原-抗體特異性結(jié)合，具較高的靈敏度和特異性[26-27]。但是，它們不能進(jìn)行精確定量，對(duì)抗原濃度在小范圍波動(dòng)時(shí)難以準(zhǔn)確識(shí)別，添加量在限量值水平附近時(shí)，很有可能檢出為陽性結(jié)果。因此，本實(shí)驗(yàn)中0.8 倍限量值添加水平檢出陽性結(jié)果的概率在50%以上。

快速檢測(cè)方法性能指標(biāo)計(jì)算表[20]僅將樣品區(qū)分為“陽性”和“陰性”兩類。GB 2761—2017[10]規(guī)定AFB1在花生油中的限量為20 μg/kg，含量低于20 μg/kg，則為陰性樣品，高于20 μg/kg，則為陽性樣品。所以，本研究中添加量20 μg/kg的樣品為陽性樣品，其他均為陰性樣品。AFB1快速檢測(cè)方法（KJ 201708）[23]規(guī)定快速檢測(cè)產(chǎn)品的性能指標(biāo)須達(dá)到：假陰性率≤1%、假陽性率≤10%。如果膠體試紙條方法要保證樣品添加量大于20 μg/kg（陽性樣品）時(shí)檢出陽性結(jié)果概率大于99%，則無法做到樣品中其含量在0～20 μg/kg（陰性樣品）時(shí)檢出陽性結(jié)果概率小于10%。

本研究結(jié)果表明，樣品添加量的設(shè)置是決定評(píng)價(jià)結(jié)果的關(guān)鍵因素。如果不同機(jī)構(gòu)使用不同濃度樣品評(píng)價(jià)同一快速檢測(cè)產(chǎn)品，必然得出不同的性能指標(biāo)。如此，必然導(dǎo)致評(píng)價(jià)結(jié)果相互矛盾、評(píng)價(jià)系統(tǒng)混亂，評(píng)價(jià)機(jī)構(gòu)將喪失權(quán)威性，從上到下的快速檢測(cè)評(píng)價(jià)工作將難以進(jìn)行。例如，賈麗華等[28]僅設(shè)置3 個(gè)添加量（陰性、1 倍限量水平、2 倍限量水平）用于快速檢測(cè)產(chǎn)品評(píng)價(jià)，由于陰性樣品濃度約為0.5 倍限量值（濃度較低），而兩種陽性樣品的濃度較高。絕大部分快速檢測(cè)產(chǎn)品的假陰性率和假陽性率符合嘔吐毒素的快速檢測(cè)方法（KJ201702）[29]的要求。如果改變樣品濃度，則得出的性能指標(biāo)必然發(fā)生變化。因此，針對(duì)不同快速檢測(cè)產(chǎn)品制定科學(xué)合理的評(píng)價(jià)方法是推進(jìn)快速檢測(cè)評(píng)價(jià)工作的基礎(chǔ)。

對(duì)于膠體金免疫層析試紙條/卡的結(jié)果判定方法，有待進(jìn)一步標(biāo)準(zhǔn)化。AFB1快速檢測(cè)方法（KJ 201708）[23]分別對(duì)比色判定方法和消線判定方法作了說明，見圖1。比色判定方法：無效，C線不顯色；陽性，T線明顯淺于C線；陰性，T線比C線深或T線與C線相當(dāng)。消線判定方法：無效，C線不顯色；陽性，C線顯色，T線不顯色；陰性，C線顯色，T線顯色。除快速檢測(cè)方法對(duì)判定方法作了說明外，每個(gè)快速檢測(cè)產(chǎn)品都附帶了自身的判定方法說明，有的產(chǎn)品說明與快速檢測(cè)方法基本一致，有的有略微差別。

圖1 試紙條/檢測(cè)卡目視判定示意圖[23]Fig. 1 Schematic of visual judgment of test strip/detection card

C線和T線的顏色深淺與試紙條/卡生產(chǎn)過程中劃線抗原/抗體濃度有關(guān)，不同產(chǎn)品的劃線濃度不同，導(dǎo)致顏色深淺不同。T線顏色深淺不僅與劃線濃度有關(guān)，而且與待測(cè)液中目標(biāo)化合物濃度有關(guān)?；衔餄舛仍礁撸琓線顏色則越淺，反之，顏色則越深?？傊?，T線顏色的深淺呈現(xiàn)出連續(xù)變化的結(jié)果。在快速檢測(cè)結(jié)果判定中，無統(tǒng)一的量化標(biāo)準(zhǔn)，操作人員都只能按個(gè)人判斷判定結(jié)果，不同人員的判定結(jié)果必然存在差異。另外，人與人之間對(duì)顏色的敏感度差異也會(huì)進(jìn)一步增加結(jié)果的判定差異。只有標(biāo)準(zhǔn)化的判定方法才能解決上述問題。將T線與C線的顏色深淺用儀器讀取，以數(shù)字化的形式顯示，不僅可避免操作人員之間的差異，而且便于規(guī)范結(jié)果判定方法。

3 結(jié) 論

本研究采用花生油基質(zhì)加標(biāo)的方法制備4 種不同添加量的AFB1樣品，對(duì)3 個(gè)不同廠家的膠體金免疫層析試紙條/卡進(jìn)行評(píng)價(jià)測(cè)試。根據(jù)評(píng)價(jià)結(jié)果可知，制備的盲樣均勻性良好，快速檢測(cè)產(chǎn)品的包裝、說明書、試劑和配備器具等完好，檢測(cè)限符合標(biāo)準(zhǔn)要求，現(xiàn)場(chǎng)使用的適用性良好。各快速檢測(cè)產(chǎn)品的假陰性率和假陽性率不符合快速檢測(cè)方法的要求。另外，本研究發(fā)現(xiàn)樣品添加量設(shè)置是決定評(píng)價(jià)結(jié)果的關(guān)鍵因素，快速檢測(cè)產(chǎn)品評(píng)價(jià)亟需一套更加科學(xué)合理的評(píng)價(jià)方法。