弓銘 楊若聰 代耀蘭 吳傳鴻 陳煒璇 段飛鵬 趙慧輝 王佩佩 孫燕 成金樂(lè) 李韶菁

摘要?目的：考察魚(yú)腥草破壁飲片對(duì)內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱的解熱作用及血液中內(nèi)毒素含量，血清中炎性因子含量的影響。方法：采用家兔耳緣靜脈注射內(nèi)毒素制備家兔發(fā)熱模型，測(cè)量給藥前及給藥后4 h各組家兔體溫，觀察魚(yú)腥草破壁飲片對(duì)致熱家兔體溫的影響;4 h后，耳緣靜脈采血，檢測(cè)全血中白細(xì)胞數(shù)量，血漿中內(nèi)毒素含量，以及用ELISA法檢測(cè)血清中炎性反應(yīng)因子IL-6、IL-1β、TNF-α的含量。結(jié)果：與對(duì)照組比較，模型組體溫、全血中白細(xì)胞含量、血漿中內(nèi)毒素含量以及血清中IL-1β，IL-6、TNF-α的含量均顯著增高。與模型組比較，魚(yú)腥草破壁飲片高、中劑量組能顯著地降低致熱1 h后的家兔體溫;并且，其可顯著降低全血中白細(xì)胞含量、血漿中內(nèi)毒素含量。與魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片組比較，魚(yú)腥草破壁飲片可顯著降低致熱1 h后的家兔體溫、全血中白細(xì)胞含量以及血清中IL-6的含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。魚(yú)腥草破壁飲片和傳統(tǒng)飲片均可不同程度降低IL-1β、TNF-α含量。結(jié)論：魚(yú)腥草破壁飲片可顯著清除家兔體內(nèi)內(nèi)毒素，使其體溫下降，且在一定程度上優(yōu)于傳統(tǒng)飲片。

關(guān)鍵詞?魚(yú)腥草破壁飲片;家兔致熱模型;內(nèi)毒素;家兔;炎性因子;體溫;白細(xì)胞介素-1β;腫瘤壞死因子-α;白細(xì)胞介素-6

Abstract?Objective：To investigate the effect of ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb on endotoxin-induced fever in rabbits， the content of endotoxin in blood and the content of inflammatory factors in serum.Methods：A rabbit fever model was prepared by endotoxin injection into rabbit ear margin， and the body temperature of each group of rabbits was measured before and 4 hours after administration， and the effect of ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb on fevered rabbit temperature was observed; after 4 hours， blood was collected from the ear veins to detect the number of white blood cells in the whole blood， the content of endotoxin in the plasma， and the content of the inflammatory response factors IL-6， IL-1β and TNF-α in the serum were detected by ELISA.Results：Compared with the control group， the body temperature， leukocyte content in whole blood， plasma endotoxin content， and serum IL-1β， IL-6， TNF-α levels in the model group were significantly increased.Compared with the model group， the high-and medium-dose group of ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb can significantly reduce the rabbit′s body temperature after 1 hour of heating; moreover， it can significantly reduce the content of white blood cells in blood and endotoxin in plasma.Compared with heartleaf houttuynia pieces group， ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb can significantly reduce the rabbit′s body temperature， leukocyte content in whole blood and IL-6 content in serum after 1 hour of heating.The difference was statistically significant.Both heartleaf houttuynia pieces and ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb can reduce the content of IL-1β and TNF-α to varying degrees.Conclusion：Ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb can significantly remove endotoxins in rabbits and make their body temperature drop， and it is better than heartleaf houttuynia pieces to some extent.

Keywords?Ultrafine granular powder of heartleaf houttuynia herb; Rabbit fever model; Endotoxin; Rabbits; Inflammatory Cytokines; Body temperature;IL-1β; TNF-α; IL-6

中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.13.015

魚(yú)腥草為三白草科蕺菜屬植物Houttuynia cordata Thunb.的新鮮全草或干燥地上部分。性味辛、微寒，歸肺經(jīng)。中醫(yī)功效主要有清熱解毒、消癰排膿、利尿通淋等。主治肺癰吐膿、痰熱喘咳、熱淋、熱痢、癰腫瘡毒、咽喉腫痛等癥，是“治療肺癰之要藥”[1]?，F(xiàn)代藥理研究認(rèn)為魚(yú)腥草具有顯著的解熱、抗炎作用，魚(yú)腥草破壁飲片是傳統(tǒng)飲片經(jīng)過(guò)現(xiàn)代加工技術(shù)，保留藥物原有成分制備成的新型中藥飲片，具有服用方便、吸收率高等特點(diǎn)[2-3]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)復(fù)制內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱模型，觀察魚(yú)腥草破壁飲片對(duì)內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱后體溫的影響，同時(shí)測(cè)定全血中白細(xì)胞含量，血漿中內(nèi)毒素含量以及血清中炎性反應(yīng)因子IL-6、IL-1β、TNF-α的含量，考察其抗內(nèi)毒素作用，并比較魚(yú)腥草破壁飲片與傳統(tǒng)飲片的抗內(nèi)毒素方面存在的差異，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?動(dòng)物?普通級(jí)新西蘭家兔56只（動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（京）2017-0002，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：11400800012460），平均體質(zhì)量（2.0±0.2）kg。飼養(yǎng)于符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的北京中醫(yī)藥大學(xué)科研中心動(dòng)物室，室溫20～25 ℃，相對(duì)濕度50%，適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，普食飼養(yǎng)，自由飲水，定期進(jìn)行紫外消毒通風(fēng)。

1.1.2?藥物?魚(yú)腥草破壁飲片（中山市中智藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)：20160905）;魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片（中山市中智藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)：20160902）;鹽酸異丙嗪注射液（天津金耀藥業(yè)有限公司，批號(hào)：1701041）;內(nèi)毒素LPS（Sigma公司，美國(guó)，批號(hào)：076M4029V）。

1.1.3?試劑與儀器?動(dòng)態(tài)顯色法鱟試劑（湛江安度斯生物有限公司，中國(guó)，批號(hào)：1701050）;細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：150601-201782）;細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（湛江安度斯生物有限公司，批號(hào)：1702130）;Rabbit IL-6 ELISA試劑盒（北京海誠(chéng)遠(yuǎn)宏科技有限公司，批號(hào)：170720）;Rabbit IL-1βELISA試劑盒（北京海誠(chéng)遠(yuǎn)宏科技有限公司，批號(hào)：170721）;Rabbit TNF-αELISA試劑盒（北京海誠(chéng)遠(yuǎn)宏科技有限公司，批號(hào)：170722）;多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)分子儀器公司，美國(guó)，貨號(hào)：M5）;血細(xì)胞分析儀（江西特康三分群血細(xì)胞分析儀，貨號(hào)：TEK-IIMINI）。

1.2?方法

1.2.1?分組與模型制備?將56只新西蘭家兔按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分成7組，分別命名為對(duì)照組、模型組、非那根組、魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片組、魚(yú)腥草破壁飲片低劑量組、魚(yú)腥草破壁飲片中劑量組、魚(yú)腥草破壁飲片高劑量組，每組8只，雌雄各半。對(duì)照組給予常規(guī)飼養(yǎng)，其他各組家兔，在分別給予相應(yīng)組別的藥物半小時(shí)后，通過(guò)耳緣靜脈注射1 mL（4 ng/mL）（20 EU）內(nèi)毒素稀釋液，建立家兔發(fā)熱模型。

1.2.2?給藥方法?1）飲片儲(chǔ)液配制：以生藥量計(jì)算，進(jìn)行受試樣品魚(yú)腥草破壁飲片和魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片儲(chǔ)液的配制。魚(yú)腥草破壁飲片：分別稱(chēng)取48 g、24 g、12 g的破壁飲片作為魚(yú)腥草破壁飲片高、中、低劑量組，用研缽均勻研磨成細(xì)粉，加入生理鹽水200 mL，配置成混懸液，浸泡24 h，用時(shí)混懸后按照5 mL/kg灌胃給藥。魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片：稱(chēng)取24 g的傳統(tǒng)飲片，用打粉機(jī)磨成細(xì)粉，加入生理鹽水200 mL，配置成混懸液，浸泡24 h，用時(shí)混懸后按照5 mL/kg灌胃給藥。2）實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：實(shí)驗(yàn)前3天每天測(cè)定家兔肛溫2次使家兔適應(yīng)實(shí)驗(yàn)操作，選擇平均體溫在38.5～39.5 ℃且體溫波動(dòng)不超過(guò)0.3 ℃的家兔用于試驗(yàn);實(shí)驗(yàn)前1天禁食16 h;3）給藥劑量：實(shí)驗(yàn)當(dāng)天測(cè)定各組家兔的基礎(chǔ)體溫，各組灌胃給予相應(yīng)藥物，非那根組（0.025 g/kg）、魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片組（0.6 g/kg）、魚(yú)腥草破壁飲片低劑量組（0.3 g/kg）、魚(yú)腥草破壁飲片中劑量組（0.6 g/kg）、魚(yú)腥草破壁飲片高劑量組（1.2 g/kg），空白對(duì)照組和模型組灌胃給予等體積純水;給藥后半小時(shí)，每組家兔耳緣靜脈注射1 mL（4 ng/mL）（20 EU）內(nèi)毒素稀釋液;分別測(cè)定注射內(nèi)毒素后1、2、3、4 h家兔體溫，并于造模4 h后耳緣靜脈取血4 mL。

1.2.3?檢測(cè)指標(biāo)與方法?內(nèi)毒素致熱4 h后，耳緣靜脈采血，對(duì)全血進(jìn)行血常規(guī)檢測(cè)，測(cè)定全血中白細(xì)胞的含量;用動(dòng)態(tài)顯色法鱟試劑檢測(cè)血漿進(jìn)行內(nèi)毒素含量;酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清中炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α的含量。

1.3?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法?采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用配對(duì)t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用百分比/率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1?魚(yú)腥草破壁飲片對(duì)內(nèi)毒素致熱家兔體溫的影響?家兔給予內(nèi)毒素后，于內(nèi)毒素給與后1 h，2 h，3 h和4 h進(jìn)行家兔體溫的檢測(cè)。內(nèi)毒素給予1 h后，與對(duì)照組比較，模型組體溫顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;與模型組比較，魚(yú)腥草高劑量組和中劑量組可顯著降低家兔體溫，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;內(nèi)毒素給予1 h后，魚(yú)腥草破壁飲片高劑量組和中劑量組與魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片組比較，對(duì)家兔的體溫有顯著降低作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;對(duì)于其他時(shí)間點(diǎn)，魚(yú)腥草破壁飲片及傳統(tǒng)飲片對(duì)家兔體溫有降低的改善作用趨勢(shì)，但不明顯。見(jiàn)表1。

2.2?魚(yú)腥草破壁飲片對(duì)內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱后全血中白細(xì)胞數(shù)含量的影響?內(nèi)毒素致熱4 h后，耳緣靜脈采血，對(duì)全血進(jìn)行血常規(guī)檢測(cè)，測(cè)定全血中白細(xì)胞的含量。模型組全血中白細(xì)胞含量顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與模型組比較，魚(yú)腥草破壁飲片高劑量組可顯著降低全血中白細(xì)胞含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。非那根組，魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片組，魚(yú)腥草破壁飲片低劑量組、中劑量組全血中白細(xì)胞含量與模型組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表2。

2.3?魚(yú)腥草破壁飲片對(duì)內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱后血漿中內(nèi)毒素含量的影響?內(nèi)毒素致熱4 h后，耳緣靜脈采血，用鱟試劑對(duì)血漿進(jìn)行內(nèi)毒素含量的檢測(cè)。模型組血漿中內(nèi)毒素含量顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。魚(yú)腥草破壁飲片高劑量組可顯著降低血漿中內(nèi)毒素含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。非那根組，魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片組，魚(yú)腥草低劑量組、中劑量組血漿中內(nèi)毒素含量與模型組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。魚(yú)腥草破壁飲片高劑量組與魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片組比較，可顯著降低血漿中內(nèi)毒素的含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.4?魚(yú)腥草破壁飲片對(duì)內(nèi)毒素致熱家兔血清中炎性因子含量的影響?內(nèi)毒素致熱4 h后，耳緣靜脈采血，對(duì)血清中細(xì)胞因子IL-6含量的檢測(cè)。模型組血清中細(xì)胞因子IL-6含量顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;魚(yú)腥草破壁飲片中劑量組，高劑量組及非那根組均可不同程度降低血清中細(xì)胞因子IL-6含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片組、魚(yú)腥草破壁飲片低劑量組血漿中內(nèi)毒素含量與模型組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。魚(yú)腥草破壁飲片高劑量組與魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片組比較，在降低家兔血清中炎性因子IL-6的含量方面上，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。模型組血清中細(xì)胞因子IL-1β含量高于對(duì)照組。魚(yú)腥草破壁飲片，魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片組及非那根組可不同程度降低血清中細(xì)胞因子IL-1β含量，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。魚(yú)腥草破壁飲片不同劑量組與魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;模型組血清中細(xì)胞因子TNF-α含量顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。魚(yú)腥草破壁飲片高劑量組及非那根組均可不同程度降低血清中細(xì)胞因子TNF-α含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。魚(yú)腥草破壁飲片不同劑量組與魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表3。

3?討論

魚(yú)腥草為三白草科蕺菜屬植物，始載于《名醫(yī)別錄》，性味辛、微寒，歸肺經(jīng)。中醫(yī)功效主要有清熱解毒、消癰排膿、利尿通淋等。主治肺癰吐膿、痰熱喘咳、熱淋、熱痢、癰腫、瘡毒、咽喉腫痛等癥，是“治療肺癰之要藥”。目前對(duì)魚(yú)腥草的研究認(rèn)為，其含有揮發(fā)油、黃酮類(lèi)、有機(jī)酸、生物堿及維生素等活性成分，主要發(fā)揮作用的成分是揮發(fā)油和黃酮類(lèi)化合物。魚(yú)腥草現(xiàn)代的藥理作用包含解熱、抗炎、抗病毒、抗菌以及調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能[4]。除了以上主要功能外，魚(yú)腥草還具有抗過(guò)敏、鎮(zhèn)咳、抗抑郁、降糖等藥效，被譽(yù)為“中藥廣譜抗生素”[5-6]。

本研究目的是探討魚(yú)腥草破壁飲片的抗內(nèi)毒素作用，并且與魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片的效果進(jìn)行比較。

內(nèi)毒素是重要的外源性致熱源，通過(guò)刺激體內(nèi)的單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生并釋放內(nèi)生致熱原引起發(fā)熱反應(yīng)[7]。炎性反應(yīng)細(xì)胞因子是主要的內(nèi)生致熱源，包括IL-6、IL-1、干擾素、TNF、巨噬細(xì)胞炎性反應(yīng)蛋白-1等[8]。這些炎性反應(yīng)細(xì)胞因子作為發(fā)熱信號(hào)可直接或者間接作用體溫調(diào)節(jié)中樞，導(dǎo)致下丘腦的發(fā)熱遞質(zhì)cAMP含量增高使體溫調(diào)節(jié)點(diǎn)上移，產(chǎn)熱增加，散熱減少[9]。下丘腦是主要的體溫調(diào)節(jié)中樞，非那根可抑制下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞，解除機(jī)體保溫作用，從而具有降低體溫的作用，故在家兔致熱實(shí)驗(yàn)中用作陽(yáng)性藥[10-11]。

IL-1是重要的致熱性細(xì)胞因子，由于基因編碼的不同分為IL-1α和IL-1β，而IL-1β具有明顯的致熱性[12]。TNF由TNF-α和TNF-β 2種蛋白質(zhì)形式存在，作為發(fā)熱調(diào)節(jié)因子主要是TNF-β[13-14]。在內(nèi)毒素引起的家兔發(fā)熱模型中，血漿和腦脊液中IL-6、TNF-β、IL-1β的含量顯著增高[15]。本研究結(jié)果顯示，魚(yú)腥草破壁飲片高劑量組可顯著降低血中白細(xì)胞、內(nèi)毒素、血清中炎性因子IL-6及TNF-α的含量，效果優(yōu)于魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片。

綜上所述，從內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)動(dòng)物在體層面，發(fā)現(xiàn)魚(yú)腥草破壁飲片具有良好的抗內(nèi)毒素作用，且在一定程度上優(yōu)于魚(yú)腥草傳統(tǒng)飲片。

參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草·蒙藥卷[M].3版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2009：75-76.

[2]杜向群，陳敏燕，許穎.魚(yú)腥草成分、藥理的研究進(jìn)展[J].江西中醫(yī)藥，2012，43（2）：66-68.

[3]成金樂(lè)，賴智填，彭麗華.中藥破壁飲片研究[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2014，（2）：254-262.

[4]彭成，彭代銀.中藥藥理學(xué)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2014：94-96.

[5]龔乃超，陳箐筠，劉棗，等.魚(yú)腥草黃酮抗抑郁活性的研究[J].化學(xué)與生物工程，2009，26（3）：41-44.

[6]王海穎，修彥鳳.魚(yú)腥草改善糖尿病模型大鼠尿白蛋白與胰島素抵抗的實(shí)驗(yàn)研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2008，19（1）：12-14.

[7]Blatteis C，Sehic E.Fever：How May Circulating Pyrogens Signal the Brain？[J].Physiology，1997，12（1）：1-9.

[8]蔣玉鳳，張丹卉，黃啟福，等.清開(kāi)靈對(duì)內(nèi)毒素性發(fā)熱家兔的解熱機(jī)制研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，26（5）：53-55.

[9]Dinarello CA，Cannon JG，Wolff SM.New concepts on the pathogenesis of fever[J].Rev Infect Dis，1988，10（1）：168-89.

[10]Shibata M，Blatteis CM.Differential effects of cytokines on thermosensitive neurons in guinea pig preoptic area slices[J].Am J Physiol，1991，261（5 Pt 2）：R1096-1103.

[11]楊寶峰.藥理學(xué)[M].8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：88-90.

[12]Kozak W，Kluger MJ，Soszynski D，et al.IL-6 and IL-1 beta in fever.Studies using cytokine-deficient（knockout）mice[J].Ann N Y Acad Sci，1998，856：33-47.

[13]徐志勇.穿心蓮軟膠囊部分毒理、藥效學(xué)研究及解熱機(jī)制初探[D].廣東：廣州中醫(yī)藥大學(xué)，2005.

[14]Kozak W，Conn CA，Klir JJ，et al.TNF soluble receptor and antiserum against TNF enhance lipopolysaccharide fever in mice[J].Am J Physiol，1995，269（1 Pt 2）：R23-29.

[15]周彥希，彭成，萬(wàn)峰，等.廣藿香油對(duì)家兔內(nèi)毒素性發(fā)熱的作用[J].中國(guó)病理生理雜志，2014，30（10）：1883-1886.

（2018-08-07收稿?責(zé)任編輯：王明）