觀察P16蛋白和TCT及HPV基因分型聯(lián)合檢測在宮頸病變篩查中的應用效果

趙曉芳 王麗麗 楊梅

【摘要】 目的 觀察P16蛋白和液基薄層細胞學檢測（TCT）及人乳頭瘤病毒（HPV）基因分型或高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）聯(lián)合檢測在宮頸病變篩查中的應用效果。方法 559例宮頸病變患者， 均應用病毒學聯(lián)合細胞學進行檢查。對比其診斷效果， 選出最有意義的方式。結果 患者經(jīng)檢查后可知， HPV分型陽性+TCT異常、HR-HPV陽性+TCT異常、HPV分型陽性+P16TCT異常、HR-HPV陽性+P16TCT異常為宮頸病變的好發(fā)人群， 應用P16TCT+HPV分型對高度宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）的檢出率更高（48.33%）。結論 宮頸疾病人群中， HPV感染率較高， 且以高危型、單一和二重感染居多;隨著宮頸病變程度的加重， HPV的感染率和P16蛋白陽性表達率逐漸升高。采用P16TCT+HPV分型在宮頸病變篩查中的篩查效果略優(yōu)于其他方式。

【關鍵詞】 P16蛋白;液基薄層細胞學檢測;人乳頭瘤病毒基因分型;聯(lián)合檢測;宮頸病變;篩查

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.21.090

宮頸病變是臨床婦科科室中經(jīng)常遇到的疾病， 其中像慢性宮頸炎等都有可能導致宮頸病變的發(fā)生。其中最值得警惕的情況便是宮頸上皮內(nèi)病變， 該癥狀與宮頸癌存在直接聯(lián)系， 即為宮頸癌的癌前病變， 若不盡早對宮頸上皮內(nèi)病變進行確診并治療， 則可能會發(fā)展為宮頸癌， 對患者的生命安全造成重大威脅[1]。有關患者宮頸病變的檢查， 現(xiàn)今主要采用病毒學和細胞學聯(lián)合檢查， 其中病毒學包括HPV分型檢查與HR-HPV檢查， 細胞學則包括普通TCT與P16蛋白表達-TCT（P16TCT）聯(lián)合檢查， 以上診斷方式雖能夠起到較好的檢出作用， 但也存在一定差異[2]。本研究對4種不同的檢測方式進行分析和對比， 以選出最具有價值的檢測方式， 研究流程及結果如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取559例本院于2018年1月～2020年1月收治的宮頸病變患者， 為其提供4種聯(lián)合檢測方式， 以上患者中選擇TCT+HPV分型的有331例、TCT+HR-HPV的有156例、P16TCT+HPV分型的有60例、 P16TCT+HR-HPV的有19例， 其中7例患者同時選擇TCT+HPV分型、TCT+HR-HPV檢查?；颊吣挲g25～77歲， 平均年齡（48.31±9.72）歲。納入患者經(jīng)TCT診斷后病癥分級均為意義不明的不典型鱗狀細胞（ASC-US） 及以上。該研究已通過醫(yī)院倫理委員會批準、所有患者均已簽署知情同意書。

1. 2 方法

1. 2. 1 儀器及試劑 美國ABI-2720 PCR儀及系統(tǒng)、潮州凱普生物化學有限公司HBHM-9000A組合型分子雜交儀， 廣州江元醫(yī)療科技有限公司全自動細胞免疫標記染色系統(tǒng)（ICC）JY-6000;HPV基因分型試劑由凱普生物提供， P16蛋白試劑、TCT試劑由江元醫(yī)療提供。

1. 2. 2 TCT檢查 患者入院后立即應用宮頸刷插入其宮頸管中大概1 cm位置處， 繞順時針的方向旋轉大概5～6圈， 對宮頸外口和宮頸管處被刷下來的脫落細胞進行收集， 并將細胞置入保存液當中， 應用TCT制片機制片， 并用濃度為95%酒精進行固定， 完成染色。

1. 2. 3 P16蛋白表達檢測 采用JY-6000系統(tǒng)制作液基薄片， 95%酒精溫室固定72 h， 晾干。將每張液基薄片劃分為兩半， 一半做P16蛋白表達檢測， 另一半作陰性對照。采用免疫組化 Elivision法檢測P16蛋白的表達， 并按照試劑盒說明書進行相關操作。

1. 2. 4 HPV基因分型檢測 同1.2.2采集樣本完畢立即放入保存液中， 裂解后提取DNA， 試劑盒購自潮州凱普生物化學有限公司， 采用ABI-2720 PCR儀， 以細胞內(nèi)基準物質β-globin DNA為對照， 在4種熒光檢測通道下， 同步進行聚合酶鏈反應（PCR）擴增與導流雜交基因分型檢測， 根據(jù)系統(tǒng)自帶軟件對結果進行分析。操作及結果判讀參考試劑盒說明書。

本次研究為其提供4種聯(lián)合檢測方式， 分別為TCT+HPV分型、TCT+HR-HPV、P16TCT+HPV分型、P16TCT+HR-HPV， 患者按照自己意愿自行選擇檢測方式， 并對聯(lián)合檢測方式進行分析。

1. 3 判定標準 根據(jù)國際癌癥協(xié)會2006年制定的TBS分級系統(tǒng)對TCT異?；颊哌M行分級， 分級標準按照從輕至重的順序分為正常范圍（WNL）， ASC-US， 低級別鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）， 不典型鱗狀細胞、不除外高級別鱗狀上皮內(nèi)病變（ASC-H）， 高級別鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）以及宮頸癌（SCC）;P16TCT結果判定方式：P16蛋白表達陽性（細胞核或細胞質內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒， 每一玻片隨機觀察10個視野， 陰性細胞（-）未被著色或著色不明顯;陽性細胞（+）著色較深， 多以黃棕色為主）或TCT異常定義為P16TCT異常。

1. 4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2. 1 4種檢測方案CIN敏感度對比 納入患者采用TCT+HPV分型檢測的共有331例， 其中檢測出高度CIN的患者有142例， 占總監(jiān)測患者數(shù)的42.90%;采用TCT+ HR-HPV檢測的共有156例， 其中檢測出高度CIN的患者有63例， 占總監(jiān)測患者數(shù)的40.38%;采用P16TCT+HPV分型檢測的共有60例， 其中檢測出高度CIN的患者有29例， 占總監(jiān)測患者數(shù)的48.33%;采用P16TCT+ HR-HPV檢測的共有19例， 其中檢測出高度CIN的患者有9例， 占總監(jiān)測患者數(shù)的47.37%。4種檢測中P16TCT+HPV分型檢測的高度CIN檢出率最高， 4種檢出率對比， 差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。