姜趙華 肖勇武

【摘要】目的：對(duì)比實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)TB-DNA與痰涂片在肺結(jié)核診斷中的應(yīng)用。方法：選擇我院2016年10月-2019年10月敦煌市醫(yī)院收治的6230例門(mén)診和住院擬行肺結(jié)核篩查的患者為研究對(duì)象，均采用TB-DNA與痰涂片兩種方式檢測(cè)，其中TB-DNA運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)，應(yīng)用金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)兩種檢查技術(shù)的準(zhǔn)確性加以評(píng)價(jià)。結(jié)果：納入本次研究的6230例肺結(jié)核篩查者采用金標(biāo)準(zhǔn)共檢出455例，占比7.30%，TB-DNA檢出437例，靈敏度為96.04%，特異度為99.68%;痰涂片檢出382例，靈敏度為83.95%，特異度為98.75%，TB-DNA檢出率、靈敏度、特異度均較痰涂片檢測(cè)顯著提高（P<0.05）。結(jié)論：肺結(jié)核采用TB-DNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)診斷具有較高的診斷準(zhǔn)確性，其敏感性較痰涂片方法顯著增加，有助于早期診斷肺結(jié)核，減少漏診率，值得推廣。

【關(guān)鍵詞】實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè);TB-DNA;痰涂片;肺結(jié)核

[中圖分類號(hào)]R521;R440 ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A ? [文章編號(hào)]2096-5249（2020）15-0-02

胸部X線、CT等影像學(xué)檢查為肺結(jié)核早期診斷最常見(jiàn)的檢查方式，但臨床進(jìn)一步確診還需結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果，并根據(jù)信息綜合評(píng)估[1]。以往臨床多采用痰液培養(yǎng)檢查，至痰抗酸桿菌或抗酸桿菌培養(yǎng)呈陽(yáng)性便可確診，但鑒于部分患者臨床癥狀不明顯，胸部影像學(xué)也不典型的特點(diǎn)，結(jié)核桿菌常發(fā)生某些生物學(xué)特性的變異，常規(guī)予以痰涂片檢查或痰液培養(yǎng)，結(jié)核桿菌往往不能完全檢出[2-3]。此外，痰液中含菌量較少時(shí)，或者肺部病灶呈局灶性改變等因素影響下，單獨(dú)痰液涂片病原菌的檢出率不高，臨床對(duì)高靈敏度檢測(cè)方式需求迫切。本文進(jìn)一步分析了TB-DNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)在肺結(jié)核疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值，以為臨床診斷肺結(jié)核提供更為可靠的參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇我院2016年10月～2019年10月敦煌市醫(yī)院收治的6230例門(mén)診和住院擬行肺結(jié)核篩查的患者為研究對(duì)象，其中男3120例，女3110，年齡28～64歲，平均年齡（47.64±2.51）歲，所有患者均應(yīng)用痰涂片與TB-DNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)兩種方式實(shí)施檢測(cè)，同時(shí)與檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比對(duì)，分析檢測(cè)一致性，同時(shí)探究?jī)煞N檢測(cè)方式的靈敏性以及特異性。

1.2儀器與方法 （1）儀器與試劑：本次研究所應(yīng)用儀器為全自動(dòng)醫(yī)用pcr分析儀（SLAN-96P），所應(yīng)用試劑為由圣湘生物公司提供的結(jié)核分枝桿菌核酸檢驗(yàn)試劑盒，采取的方法為pcr熒光探針?lè)?。?）TB-DNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法如下：采集患者清晨痰液，將5ul處理好的痰樣本、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、陽(yáng)性參考品和40ul的PCR-mix至PCR反應(yīng)管中，然后應(yīng)用SLAN-96P予以DNA擴(kuò)增。特異性與敏感性采用如下標(biāo)準(zhǔn)予以評(píng)價(jià)，總結(jié)熒光定量PCR擴(kuò)增后的曲線的規(guī)則性，如曲線呈對(duì)數(shù)方式增長(zhǎng)，Ct值≤39，且內(nèi)標(biāo)檢測(cè)為陽(yáng)性，結(jié)果判定為陽(yáng)性，Ct值>40或CT值無(wú)顯示，且內(nèi)標(biāo)檢測(cè)為陽(yáng)性，結(jié)果判定為陰性，此外，CT值介于39-40之間，且擴(kuò)增曲線以對(duì)數(shù)方式增長(zhǎng)，則需要對(duì)樣本進(jìn)行重復(fù)測(cè)定，如仍顯示Ct值介于39～40之間，則結(jié)果判定為陰性。（3）痰涂片檢測(cè)方法如下：指導(dǎo)患者收集清晨痰液，常規(guī)方法涂片后予以抗酸抗菌染色，并于顯微鏡高倍鏡下觀察菌落，100倍高倍鏡視野下發(fā)現(xiàn)菌落為3個(gè)或以上，則檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，否則為陰性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用（n，%）表示，χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

納入本次研究的6230例肺結(jié)核篩查者采用金標(biāo)準(zhǔn)共檢出455例，占比7.30%，TB-DNA檢出437例，靈敏度為96.04%，特異度為99.68%;痰涂片檢出382例，靈敏度為83.95%，特異度為98.75%，TB-DNA檢出率、靈敏度、特異度均較痰涂片檢測(cè)顯著提高（P<0.05）。見(jiàn)表1.

3 討論

肺結(jié)核在我國(guó)的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年增加態(tài)勢(shì)，早期診斷有助于盡早制定聯(lián)合用藥方案，對(duì)于改善肺結(jié)核患者預(yù)后具有一定價(jià)值[4]。目前臨床用于診斷肺結(jié)核的方法較為多樣，但早期篩查與診斷的精準(zhǔn)性仍是臨床關(guān)注的重要課題。以往臨床多采取痰涂片檢測(cè)法，在肺結(jié)核診斷中，發(fā)揮了一定的價(jià)值，具有操作簡(jiǎn)單，出具結(jié)果迅速等優(yōu)勢(shì)，但該檢測(cè)存在一定的主觀性，且對(duì)涂片、染色等步驟的要求較高，操作不規(guī)范，則會(huì)導(dǎo)致誤差出現(xiàn)，進(jìn)而影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性。培養(yǎng)皿為痰培養(yǎng)的主要培養(yǎng)器材，致病菌菌落的培養(yǎng)成為了臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但在實(shí)際運(yùn)用中發(fā)現(xiàn)，菌群培養(yǎng)的周期較長(zhǎng)，且對(duì)于肺部以外其他器官的檢測(cè)過(guò)程繁瑣[5-6]。通過(guò)實(shí)踐應(yīng)用發(fā)現(xiàn)，TB-DNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)在結(jié)核病的診斷中獲得了良好收效，通過(guò)熒光化學(xué)物質(zhì)對(duì)PCR循環(huán)產(chǎn)物的檢測(cè)，能夠有效定量分析樣品中某種特定DNA的序列，大大提高了PCR的敏感性與特異性。本次研究結(jié)果提示TB-DNA運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)的靈敏度與特異度均處于較高水平。值得注意的是，該方法雖然提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性，但仍有一定的漏診幾率，因此，尚不能將其作為肺結(jié)核明確診斷指標(biāo)，但該檢測(cè)手段對(duì)于早期篩查與預(yù)防指導(dǎo)，仍具有較高價(jià)值。

綜上，肺結(jié)核采用TB-DNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)診斷具有較高的診斷準(zhǔn)確性，其敏感性較痰涂片方法顯著增加，有助于早期診斷肺結(jié)核，減少漏診率，值得推廣。

參考文獻(xiàn)

[1] 張梅. 痰涂片和TB-DNA及血清抗PPD-IgG在肺結(jié)核感染診斷中的聯(lián)合應(yīng)用[J]. 國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志， 2016， 37（4）： 504-505

[2] 陳蕾， 王鳳平， 徐俊馳， 等. 非結(jié)核分枝桿菌病實(shí)驗(yàn)室診斷方法分析及臨床應(yīng)用[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)， 2019， 23（6）： 935-939.

[3] 李蘇梅， 包紫薇， 唐佩軍， 等. 熒光定量PCR對(duì)痰涂片陰性肺結(jié)核的臨床診斷價(jià)值[J]. 臨床肺科雜志， 2018， 23（6）： 977-979.

[4] 郭俊紅， 武春燕， 董正偉， 等. CT引導(dǎo)下肺穿刺活檢標(biāo)本行PCR檢測(cè)診斷肺結(jié)核的臨床價(jià)值[J]. 中國(guó)防癆雜志， 2018， 40（11）： 1159-1163.

[5] 寧?kù)o， 于莉， 陳軍. TB-IGRA定量試驗(yàn)診斷肺結(jié)核感染的臨床應(yīng)用分析[J]. 軍事醫(yī)學(xué)， 2017， 41（1）： 77-78.

[6] 高麗， 代佳偉， 謝祺， 等. 結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用評(píng)價(jià)[J]. 國(guó)際流行病學(xué)傳染病學(xué)雜志， 2018， 45（2）： 108-111.