范軍軍

冷凍切片技術是由Pieterde Riemer首創(chuàng)，手術中的新鮮標本應在最短時間內(nèi)冷凍，組織變硬后進行切片處理。目前冷凍切片技術在臨床中運用廣泛，尤其是對于腫瘤患者，病理診斷結果直接影響治療方案[1-2]。為了做出全面完整的術中快速病理診斷，本實驗以200例患者為分析對象，探討病理診斷中快速冷凍切片的臨床應用價值，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集2017年12月～2018年12月我院存檔的200例組織標本，男性92例，女性108例，年齡22～66歲，平均(33.14±7.22)歲；組織標本包括50例肝脾腎結腸等內(nèi)臟組織、60例乳腺組織、20例卵巢組織、4例腦組織、56例甲狀腺組織、10例胃壁組織。所有組織標本均分別進行冷凍切片與常規(guī)石蠟切片病理診斷。本實驗經(jīng)中國科學院大學附屬腫瘤醫(yī)院倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。

1.2 方法組織標本取材以大小1.5 cm×1.5 cm×0.5 cm為宜，部分組織進行快速冷凍處理，按照組織類型的不同，冷凍的溫度也不同：腦組織為-16～-18 ℃，乳腺組織為-22～-30 ℃，胃壁與卵巢組織為-20～-22 ℃，甲狀腺組織為-18～20 ℃，冷凍時間為3～4 min，肝腎、淋巴結以及甲狀腺組織的冷凍時間約2 min。冷凍完成后進行切片處理，厚度為5～8 μm，將切片組織投入AF固定液約2 min后使用蘇木精染色[3]，水洗后運用鹽酸乙醇(1%)分化數(shù)秒之后再次水洗，水中返藍后加入水溶性伊紅(1%)約5 s，梯度乙醇脫水處理后中性樹脂封固。另外，部分組織按常規(guī)方法進行石蠟切片病理診斷。

2 結果

在200例組織標本中，冷凍切片診斷惡性腫瘤者81例，良性者119例；常規(guī)石蠟切片診斷惡性腫瘤者86例，良性者114例，術中冷凍切片與常規(guī)石蠟切片診斷一致者195例，符合率為97.50%，冷凍切片的漏診數(shù)為5例，誤診率為5.81%(5/86)?？焖倮鋬銮衅夹g染色，切片染色鮮艷、質(zhì)量佳，鏡下細胞形態(tài)清晰、組織結構明確，質(zhì)、核對比確切(圖1)。

ABCD

3 討論

冷凍切片要求在較短時間內(nèi)對病變做出精準的病理診斷，因此快速制作1張優(yōu)質(zhì)的冷凍切片具有重要意義。在臨床工作中冷凍切片機應保證24 h備用狀態(tài)，取材時若厚度超過5 mm時則需延長冷凍時間，若取材厚度低于2 mm，在切片時切片刀極易切到組織托頭，使切片刀損壞。因此，保證適當?shù)那衅穸确浅Ｖ匾猍4]。另一方面，全層凍硬的組織表層通常由于較硬且脆難以切片，操作時需于室溫下靜置20～30 s后再行切片處理。

人體組織內(nèi)的液體成分為無機物與有機物的混合成分，大多需要在-1～-5 ℃才能將約80%的水分凍結成冰，該溫度范圍被稱為“最大冰晶生成帶”[5]。細胞速凍時組織細胞內(nèi)外會形成較多晶核，呈現(xiàn)出細小針狀結晶體且均勻分布，組織內(nèi)冰層推進速度比水的移動速度快，不對細胞形成機械損傷的同時維持細胞原本的狀態(tài)結構。若凍結的速度較慢則會因較大的冰晶顆粒損傷細胞。因此，在操作時要確保組織的驟冷效果，使其在最短時間內(nèi)以最快的速度通過最大冰晶生成帶[6]。快速冷凍切片過程中所使用的刀片要保證其鋒利性，才能切出高質(zhì)量的片子；同時適宜的切片厚度可有助于獲得染色鮮明清晰的片子。組織切片貼附于載玻片上，可以沿同一方向輕輕外展，有助于防止出現(xiàn)褶皺。常規(guī)制作過程中，冷凍切片在完成脫水后需經(jīng)二甲苯處理以確保切片的透明度，然后使用中性樹膠進行封片處理，樹膠滴加時需注意適量，樹膠太濃稠容易溢出玻片，太稀則易出現(xiàn)空泡情況[7]。

冷凍切片的制冷方式分為二氧化碳法、氯乙烷法、半導體制冷法、恒冷箱式冷凍法等。二氧化碳法經(jīng)10%中性福爾馬林加熱煮沸的過程中組織細胞會收縮變形；氯乙烷法中將氯乙烷試劑于標本噴射過程凍結，由于此試劑已停止生產(chǎn)，因此該方式亦逐漸被淘汰。半導體制冷法是運用水循環(huán)將電偶發(fā)熱端熱量帶走后使組織標本冷凍制冷的方法，其制冷效果與機器所設計的電流大小有影響。恒冷箱式冷凍法是當前運用最廣泛的類型，冷凍速度迅速，提供的性能可以完全滿足各類室溫下的切片工作。與常規(guī)的石蠟切片相比，冷凍切片的新鮮標本盡管未被固定液完全固定，但通過物理降溫法可以確保組織標本的基本形態(tài)，經(jīng)福爾馬林、乙醇以及冰醋酸固定液的穿透作用，可以使細胞蛋白質(zhì)得以沉淀，從而有效預防標本組織出現(xiàn)過渡收縮。切片在固定時，雖然切片厚度較薄，但有玻片作為支撐依托，因此不易產(chǎn)生變形問題，有利于保證組織細胞在顯微鏡下呈現(xiàn)完整的結構關系，提高診斷的準確性。

本組結果顯示，術中冷凍切片與常規(guī)石蠟切片診斷一致者195例，符合率為97.50%?？焖倮鋬銮衅夹g染色的切片顏色鮮艷、質(zhì)量佳，鏡下細胞形態(tài)清晰、組織結構明確，核質(zhì)對比明確，值得臨床推廣使用。