汪丹，姚洪偉，周芳麗

1. 上海化工院檢測(cè)有限公司，上海 200062 2. 上?；ぱ芯吭河邢薰?，上海 200062

經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織(Organization for Economic Co-operation and Development, OECD)良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范(Good Laboratory Practice, GLP)原則中對(duì)GLP的定義為：“GLP是一種有關(guān)非臨床人類(lèi)健康和環(huán)境安全試驗(yàn)的設(shè)計(jì)、實(shí)施、查驗(yàn)、記錄、報(bào)告及歸檔等組織過(guò)程和條件的質(zhì)量體系”。其中，“設(shè)計(jì)”是GLP實(shí)驗(yàn)的前提和關(guān)鍵環(huán)節(jié)，任何GLP研究都必須在研究啟動(dòng)之前具備周詳和可操作的計(jì)劃，也就是研究計(jì)劃書(shū)。所以，研究計(jì)劃作為控制生態(tài)毒理研究實(shí)施的書(shū)面文件，無(wú)論從邏輯性還是科學(xué)性來(lái)說(shuō)，重要性不言而喻。

在OECD GLP法規(guī)中，將研究計(jì)劃定義為：“規(guī)定研究實(shí)施的目的和試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以及其修訂內(nèi)容的書(shū)面文件”。因此，研究計(jì)劃必須滿(mǎn)足2個(gè)要點(diǎn)，一是內(nèi)容必須清楚，二是必須為最新正式版。從內(nèi)容上來(lái)說(shuō)，計(jì)劃書(shū)需要符合5W1H原則(who(誰(shuí)去做)，why(為什么)，when(何時(shí)做)，where(何地做)，what(做什么)，how(怎么做))，具體為人員職責(zé)、測(cè)試場(chǎng)所、測(cè)試時(shí)間、測(cè)試對(duì)象、操作內(nèi)容和實(shí)施方式。從管理上來(lái)說(shuō)，最為重要的就是控制所有參與操作的人員都能獲取最新版的正式計(jì)劃書(shū)。這才能確保試驗(yàn)人員能夠了解試驗(yàn)內(nèi)容，提前準(zhǔn)備和安排生物、材料和儀器等，確保在試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)試驗(yàn)體系和設(shè)備等處于良好狀態(tài)。

在生態(tài)毒理研究中，每個(gè)研究都可能是由多個(gè)不同活動(dòng)組成的復(fù)雜過(guò)程，研究周期短則幾個(gè)小時(shí)，長(zhǎng)至幾年不等，整個(gè)過(guò)程需要多個(gè)操作人員和技術(shù)人員共同配合。因此，為了確保研究實(shí)施有序合理、人員配合默契以及資源使用高效，尤其對(duì)于那些時(shí)間周期長(zhǎng)、牽涉操作復(fù)雜的研究，計(jì)劃書(shū)的設(shè)計(jì)就成為研究成功與否的關(guān)鍵要素，而其中最為關(guān)鍵的要素就是時(shí)間的安排和規(guī)劃。

在實(shí)際工作中，GLP測(cè)試機(jī)構(gòu)在計(jì)劃書(shū)中的時(shí)間安排和日程管理方面，存在很多疑惑，有時(shí)難以在合規(guī)性和實(shí)踐性中間找到平衡點(diǎn)，比如，如何定義第一次采集數(shù)據(jù)的活動(dòng)和最后一次采集數(shù)據(jù)的日期？如果實(shí)際日期與預(yù)計(jì)日期不一致時(shí)，是否要進(jìn)行修訂或者開(kāi)展偏離流程？試驗(yàn)起始日期是否應(yīng)該與研究啟動(dòng)和結(jié)束日期存在邏輯關(guān)聯(lián)性？

所以，試驗(yàn)機(jī)構(gòu)希望能夠建立一種機(jī)制來(lái)合理地定義和設(shè)計(jì)計(jì)劃書(shū)中的試驗(yàn)日程，使其即能滿(mǎn)足GLP法規(guī)和監(jiān)管機(jī)構(gòu)要求，同時(shí)也能靈活應(yīng)對(duì)試驗(yàn)操作中的隨時(shí)可能發(fā)生的不確定性情況。因此，結(jié)合生態(tài)毒理研究的實(shí)際工作流程，從法規(guī)規(guī)定、檢查要求、研究屬性和科學(xué)管理等幾個(gè)方面出發(fā)，對(duì)該問(wèn)題進(jìn)行探討。

1 GLP法規(guī)對(duì)計(jì)劃時(shí)間的管理要求(Proposed date requirements of the GLP regulations)

在OECD、美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(United States Food and Drug Administration, US FDA)、美國(guó)環(huán)境保護(hù)局(United States Environmental Protection Agency, US EPA)，日本厚生省等發(fā)布的GLP法規(guī)中，以及瑞士的GLP法令(Ordinance on Good Laboratory Practice, OGLP)和歐盟的GLP法規(guī)中，均有對(duì)計(jì)劃書(shū)中試驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)的定義和規(guī)定，部分監(jiān)管機(jī)構(gòu)也發(fā)布了指南進(jìn)一步對(duì)計(jì)劃書(shū)時(shí)間點(diǎn)的要求進(jìn)行解釋?zhuān)@都為檢測(cè)機(jī)構(gòu)在實(shí)際管理中提供了指導(dǎo)和參考。

1.1 OECD GLP法規(guī)中的規(guī)定

OECD GLP法規(guī)[1]規(guī)定計(jì)劃書(shū)中至少應(yīng)該包括研究啟動(dòng)時(shí)間(項(xiàng)目負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)計(jì)劃書(shū)的簽名日期)、預(yù)計(jì)的試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)間和預(yù)計(jì)的試驗(yàn)完成時(shí)間，在研究報(bào)告中應(yīng)該包括試驗(yàn)開(kāi)始和試驗(yàn)完成日期。

OECD GLP法規(guī)給出了以下4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的定義：(1)研究啟動(dòng)時(shí)間：項(xiàng)目負(fù)責(zé)人簽署計(jì)劃書(shū)的日期；(2)試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)間：第一次采集研究相關(guān)數(shù)據(jù)的日期；(3)試驗(yàn)完成時(shí)間：最后一次采集研究相關(guān)數(shù)據(jù)的日期；(4)研究完成時(shí)間：是指項(xiàng)目負(fù)責(zé)人簽署最終報(bào)告的日期。

其中，研究開(kāi)始和研究完成日期定義很容易理解，并已經(jīng)在業(yè)內(nèi)形成共識(shí)。但是對(duì)于預(yù)計(jì)試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)間和預(yù)計(jì)試驗(yàn)完成時(shí)間的定義卻比較寬泛，也曾引起行業(yè)內(nèi)的廣泛討論。

1.2 US FDA的GLP法規(guī)中的規(guī)定

美國(guó)共有3部GLP法規(guī)，分別是US FDA管理的《非臨床研究的良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范》(21 CFR Part 58)(簡(jiǎn)稱(chēng)FDA GLP法規(guī))，US EPA管理的《聯(lián)邦殺蟲(chóng)劑、殺真菌劑和滅鼠劑條例》(FIFRA)的GLP法規(guī)(40CFR 160 GLP)(簡(jiǎn)稱(chēng)FIFRA GLP)和《有毒物質(zhì)控制法》(TSCA)的GLP法規(guī)(40 CFR 792)(簡(jiǎn)稱(chēng)TSCA GLP)，F(xiàn)IFRA GLP與TSCA GLP法規(guī)內(nèi)容基本一致。

FDA GLP法規(guī)在非臨床研究的良好實(shí)驗(yàn)室管理方面具有很高的權(quán)威性，自1979年開(kāi)始實(shí)施，適用范圍為食品、色素添加劑、動(dòng)物用藥、人用藥、生物產(chǎn)品、人類(lèi)醫(yī)用設(shè)備、診斷制劑及電子產(chǎn)品和動(dòng)物食品添加劑等。

1978年版的FDA GLP法規(guī)(§58.120(a)(4))[2]規(guī)定：“計(jì)劃書(shū)中需要列明試驗(yàn)預(yù)計(jì)開(kāi)始和結(jié)束日期”。但是實(shí)際上，由于不同測(cè)試領(lǐng)域的機(jī)構(gòu)對(duì)該條款的理解不同，最后實(shí)際的做法相去甚遠(yuǎn)，所以，US FDA在1981年發(fā)行的《GLP問(wèn)題與回復(fù)指南》[3]中特別對(duì)該規(guī)定進(jìn)行了解釋?zhuān)紫龋琔S FDA明確說(shuō)明項(xiàng)目負(fù)責(zé)人(SD)在編制計(jì)劃書(shū)時(shí)，應(yīng)該在計(jì)劃書(shū)中給出包括預(yù)計(jì)試驗(yàn)起始日期在內(nèi)的日程，而這個(gè)試驗(yàn)預(yù)計(jì)起始日期的設(shè)置允許一定的靈活性。其后，US FDA結(jié)合實(shí)際為測(cè)試機(jī)構(gòu)提供了具有參考價(jià)值的做法，具體如下：將預(yù)計(jì)的試驗(yàn)起始時(shí)間分別設(shè)置為第一次施藥日期和最后一次施藥的日期，或是試驗(yàn)體系開(kāi)始分配到研究的日期和解剖最后一只動(dòng)物的日期，或是接受試驗(yàn)體系的日期到最終病理學(xué)診斷的日期。

但是，US FDA在1984年發(fā)布的GLP法規(guī)修訂版[4]中，提議刪掉上述§58.120(a)(4)條款，理由是根據(jù)§58.120(b)條款(已批準(zhǔn)的計(jì)劃書(shū)發(fā)生的任何修改或者修訂，必須說(shuō)明理由，經(jīng)SD批準(zhǔn)簽字和簽署日期后與原計(jì)劃書(shū)一同保管)，計(jì)劃書(shū)批準(zhǔn)后試驗(yàn)日期發(fā)生改動(dòng)時(shí)，項(xiàng)目負(fù)責(zé)人必須對(duì)研究計(jì)劃進(jìn)行修訂。但是從另外一個(gè)角度來(lái)說(shuō)，US FDA認(rèn)為測(cè)試機(jī)構(gòu)在試驗(yàn)日程設(shè)計(jì)和安排方面具有自主決定權(quán)。所以為了避免因日程變化而修訂計(jì)劃書(shū)的情況，US FDA提議刪掉§58.120(a)(4)條款。隨后，在1987年發(fā)布的FDA GLP法規(guī)最終修訂版[5]中，原§58.120(a)(4)規(guī)定被刪除(表1)。自此，US FDA不再要求計(jì)劃書(shū)中必須包含預(yù)計(jì)的試驗(yàn)開(kāi)始和試驗(yàn)結(jié)束日期。自該版本后，后續(xù)所有US FDA發(fā)行的GLP法規(guī)都不再對(duì)計(jì)劃書(shū)的預(yù)計(jì)試驗(yàn)起始時(shí)間有強(qiáng)制規(guī)定。

同時(shí)，在與FDA GLP法規(guī)一脈相承的日本厚生省頒布的《藥物非臨床良好實(shí)驗(yàn)室管理法規(guī)》中，也沒(méi)有對(duì)計(jì)劃書(shū)的試驗(yàn)開(kāi)始和試驗(yàn)結(jié)束日期有任何規(guī)定。

1.3 US EPA的GLP法規(guī)中的規(guī)定

US EPA起草GLP法規(guī)時(shí)內(nèi)容基本引自US FDA，但是隨著雙方對(duì)法規(guī)的幾次修訂，現(xiàn)行的EPA GLP法規(guī)與FDA GLP法規(guī)存在幾點(diǎn)不同，比如在計(jì)劃書(shū)時(shí)間的管理上，US EPA沒(méi)有采納US FDA的管理理念。

因?yàn)閁S EPA同時(shí)監(jiān)管TSCA GLP和FIFRA GLP，2個(gè)法規(guī)內(nèi)容基本一致，所以下文以FIFRA GLP(40CFR 160)為代表進(jìn)行闡述。

在FIFRA GLP(§160.3)[6]中，給出了試驗(yàn)開(kāi)始和試驗(yàn)結(jié)束日期的定義：(1)試驗(yàn)開(kāi)始日期：試驗(yàn)樣品添加到試驗(yàn)體系的第一個(gè)日期；(2)試驗(yàn)結(jié)束日期：從研究中直接收集數(shù)據(jù)的最后一個(gè)日期。

表1 美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(US FDA)對(duì)計(jì)劃書(shū)中試驗(yàn)開(kāi)始和試驗(yàn)結(jié)束日期的歷史規(guī)定Table 1 The United States Food and Drug Administration (US FDA) historical rules about the proposed experiment beginning date and finishing date in protocol

40CFR(§160.120(4))中規(guī)定：“計(jì)劃書(shū)中應(yīng)該包括預(yù)計(jì)的試驗(yàn)開(kāi)始和試驗(yàn)結(jié)束日期”。

FIFRA GLP法規(guī)與FDA GLP在計(jì)劃書(shū)修改方面的規(guī)定是相同的，也就是“批準(zhǔn)后的計(jì)劃書(shū)的任何修改或者修訂需要說(shuō)明理由，并且經(jīng)SD簽字和注明日期，與計(jì)劃書(shū)一同保管”，所以，對(duì)于需要符合EPA GLP法規(guī)的研究來(lái)說(shuō)，計(jì)劃書(shū)發(fā)生的任何修改，比如時(shí)間修改等，都需要進(jìn)行研究計(jì)劃修訂的流程。

1.4 瑞士法規(guī)中的規(guī)定與解釋

瑞士實(shí)施的GLP法規(guī)是OGLP法令，該法令從2000年3月1日開(kāi)始實(shí)施，作為歐盟國(guó)家和OECD成員國(guó)，瑞士的OGLP法規(guī)與OECD GLP法規(guī)和符合性監(jiān)管內(nèi)容基本相同，包括對(duì)試驗(yàn)起始日期的定義和計(jì)劃書(shū)修訂的規(guī)定。

在瑞士官方發(fā)布的GLP法規(guī)解釋說(shuō)明文件[7]中，對(duì)如何定義試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束的日期給出了具體的解釋。根據(jù)瑞士OGLP法規(guī)，試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束的日期應(yīng)該是收集研究相關(guān)數(shù)據(jù)的開(kāi)始和結(jié)束日期。如果在試驗(yàn)之前有所謂的預(yù)實(shí)驗(yàn)，比如采集研究的基線(xiàn)值，那么試驗(yàn)開(kāi)始日期應(yīng)該是預(yù)實(shí)驗(yàn)的開(kāi)始日期。因?yàn)檫@2個(gè)日期的定義很寬泛，所以在制定計(jì)劃書(shū)時(shí)最好進(jìn)行解釋和說(shuō)明，建議可以采用以下2種做法：(1)在每個(gè)研究的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)中，描述試驗(yàn)開(kāi)始/結(jié)束日期對(duì)應(yīng)的具體操作或活動(dòng)。(2)研究計(jì)劃中給出預(yù)計(jì)的試驗(yàn)開(kāi)始日期和完成日期，同時(shí)說(shuō)明該日期對(duì)應(yīng)的具體操作。

1.5 德國(guó)聯(lián)邦風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究所(Bundesinstitut für Risikobewertung, BFR) GLP檢查手冊(cè)中的規(guī)定

作為歐盟國(guó)家和OECD成員國(guó)，德國(guó)GLP法規(guī)也是基于OECD的GLP法規(guī)，要求計(jì)劃書(shū)中需要列出預(yù)計(jì)的試驗(yàn)開(kāi)始日期和預(yù)計(jì)的試驗(yàn)結(jié)束日期。

在德國(guó)GLP檢查手冊(cè)[8]2.8.4.8條中明確規(guī)定，在進(jìn)行研究審計(jì)時(shí)，要核對(duì)研究計(jì)劃、原始數(shù)據(jù)和最終報(bào)告的一致性，其中明確說(shuō)明：“比較研究計(jì)劃、原始數(shù)據(jù)和最終報(bào)告之間試驗(yàn)開(kāi)始日期和完成日期的一致性”，由此可以了解到，德國(guó)檢查官會(huì)在GLP監(jiān)管檢查中，核查這些時(shí)間點(diǎn)是否一致。

1.6 日本環(huán)境省(MOE)GLP法規(guī)中的規(guī)定

雖然，日本厚生省發(fā)布的GLP法規(guī)不要求計(jì)劃書(shū)提供試驗(yàn)起始日期，但是日本環(huán)境省的化學(xué)品GLP法規(guī)[9]中的規(guī)定保持與OECD GLP中的規(guī)定一致，也就是要求在計(jì)劃書(shū)中給出試驗(yàn)起始日期，定義與OECD的規(guī)范相同。而為了幫助機(jī)構(gòu)理解，日本環(huán)境省發(fā)布的測(cè)試機(jī)構(gòu)自查手冊(cè)[10]給出了部分生態(tài)毒理測(cè)試的建議試驗(yàn)開(kāi)始日期和試驗(yàn)結(jié)束日期(表2)。將上文所述的所有GLP法規(guī)中對(duì)研究計(jì)劃中時(shí)間點(diǎn)的規(guī)定和要求總結(jié)于表3中。

表2 日本在化學(xué)品測(cè)試機(jī)構(gòu)自查手冊(cè)中的建議[10]Table 2 Recommendations in the Japan’s self-inspection manual for chemical testing organizations[10]

表3 各GLP法規(guī)中對(duì)研究計(jì)劃中時(shí)間點(diǎn)的規(guī)定和要求Table 3 Rules and requirements of each GLP regulation on protocol time points

2 GLP法規(guī)中時(shí)間定義的解讀與討論(Interpretation and discussion of date definition in GLP)

從上述的GLP法規(guī)和其解釋文件中了解到，不同國(guó)家和組織對(duì)于這2個(gè)時(shí)間點(diǎn)的設(shè)計(jì)和規(guī)定是不相同的，這表明，不同監(jiān)管機(jī)構(gòu)對(duì)這些時(shí)間點(diǎn)的定義也有著不同的意見(jiàn)，但是無(wú)論如何，遵從OECD GLP規(guī)范的測(cè)試機(jī)構(gòu)還是需要在試驗(yàn)計(jì)劃書(shū)中給出這些時(shí)間點(diǎn)。

在進(jìn)行時(shí)間點(diǎn)的設(shè)計(jì)時(shí)，不管出于任何目的，都不建議將法規(guī)的定義生搬硬套使用。對(duì)于那些會(huì)開(kāi)展多種類(lèi)型、多種試驗(yàn)體系的GLP機(jī)構(gòu)來(lái)說(shuō)，千萬(wàn)不要采用“一刀切”的方式，試圖為不同類(lèi)型的研究設(shè)計(jì)出一種通行的、萬(wàn)能的定義，因?yàn)槟切┛雌饋?lái)“一勞永逸”的定義，反而會(huì)給試驗(yàn)人員在實(shí)操中帶來(lái)困惑和不解，以及后期面對(duì)質(zhì)量保證(QA)人員和GLP檢察員詢(xún)問(wèn)時(shí)需不斷解釋和說(shuō)明。

從GLP規(guī)范給出的定義可以看出，時(shí)間安排的核心點(diǎn)有2點(diǎn)：其一是識(shí)別“活動(dòng)”，其二是定義“開(kāi)始”與“結(jié)束”。

對(duì)于前者，“活動(dòng)”應(yīng)該是“與研究有關(guān)的”相對(duì)應(yīng)的，那么何種活動(dòng)是“與研究有關(guān)的”呢？比如，動(dòng)物到達(dá)機(jī)構(gòu)時(shí)進(jìn)行健康檢查，設(shè)備校準(zhǔn)與計(jì)量，馴養(yǎng)期的生物環(huán)境參數(shù)測(cè)量以及培養(yǎng)基溶液配制，這些是否與研究相關(guān)？從廣義的角度來(lái)說(shuō)，這些數(shù)據(jù)都是與研究有關(guān)的，但是這些明顯不適合用于做為具體研究活動(dòng)的代表或者標(biāo)識(shí)。

比如，以魚(yú)類(lèi)的毒性研究為例，如果將魚(yú)類(lèi)馴養(yǎng)作為“與研究有關(guān)的”活動(dòng)，那么意味著計(jì)劃書(shū)中的試驗(yàn)開(kāi)始日期就是受試魚(yú)引進(jìn)的日期，但是事實(shí)上，受試魚(yú)在用于試驗(yàn)之前，將經(jīng)歷適應(yīng)期(至少7 d)、馴養(yǎng)期(至少14 d)，以及敏感性測(cè)試，所以基本上所有的受試魚(yú)在用于試驗(yàn)前都已經(jīng)在實(shí)驗(yàn)室生活了至少2個(gè)月時(shí)間，之后才能用于測(cè)試。而對(duì)于魚(yú)類(lèi)試驗(yàn)來(lái)說(shuō)，一般不會(huì)提前2個(gè)月啟動(dòng)研究計(jì)劃，因此，如果“研究啟動(dòng)日期”晚于“試驗(yàn)開(kāi)始日期”，時(shí)間邏輯上來(lái)說(shuō)不夠合理。另外，通常受試魚(yú)都是大批量地馴養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室，供應(yīng)于一定周期內(nèi)(比如1 a)的所有魚(yú)類(lèi)研究，也就是說(shuō)，同一批次的受試魚(yú)將用于多個(gè)研究，所以魚(yú)的馴養(yǎng)僅屬于“與研究有關(guān)的”通用性活動(dòng)，而非“與具體研究有關(guān)的”指代性活動(dòng)。同時(shí)在魚(yú)的馴養(yǎng)期間，所有相關(guān)的活動(dòng)，比如運(yùn)輸、引進(jìn)、適應(yīng)和馴養(yǎng)，都詳細(xì)記錄在生物檔案中，并通過(guò)設(shè)施檢查進(jìn)行核查。因此，從時(shí)間邏輯和質(zhì)量保證角度來(lái)說(shuō)，采用生物馴養(yǎng)作為“研究有關(guān)活動(dòng)”的標(biāo)志是不科學(xué)的。

對(duì)于第2個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)“開(kāi)始”與“結(jié)束”的定義，需要符合時(shí)間邏輯順序，OECD GLP法規(guī)沒(méi)有給出4個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間的邏輯性。根據(jù)GLP法規(guī)中的要求“在研究啟動(dòng)之前應(yīng)該有書(shū)面研究計(jì)劃”可知，研究啟動(dòng)也就是SD簽署計(jì)劃書(shū)時(shí)肯定有了書(shū)面計(jì)劃書(shū)。雖然，GLP法規(guī)中沒(méi)有規(guī)定試驗(yàn)開(kāi)始日期必須在研究啟動(dòng)日期之后，也就是沒(méi)有規(guī)定相關(guān)數(shù)據(jù)的收集必須在研究啟動(dòng)之后才能進(jìn)行；但是，從常識(shí)上來(lái)說(shuō)，正常的流程應(yīng)該是先有計(jì)劃書(shū)，然后開(kāi)展研究活動(dòng)，這樣才能確保研究有序執(zhí)行；所以從這種邏輯上來(lái)推斷，研究計(jì)劃中的試驗(yàn)預(yù)計(jì)開(kāi)始日期應(yīng)該在研究啟動(dòng)之后。[12]

3 生態(tài)毒理GLP研究活動(dòng)的屬性(Activities categorization and property in ecotoxicology GLP study)

研究計(jì)劃工作中最為困難的任務(wù)之一就是日程和進(jìn)度安排，項(xiàng)目負(fù)責(zé)人要把可用的資源、人員和活動(dòng)工作量協(xié)調(diào)好，考慮好各項(xiàng)活動(dòng)之間的相互依賴(lài)關(guān)系，預(yù)見(jiàn)可能出現(xiàn)的問(wèn)題或者不可預(yù)期的活動(dòng)時(shí)間，然后制定出計(jì)劃日程。為了清楚地說(shuō)明GLP研究中相關(guān)活動(dòng)的關(guān)鍵性和在研究中所起的作用，根據(jù)活動(dòng)產(chǎn)出結(jié)果的作用來(lái)劃分活動(dòng)的屬性，簡(jiǎn)單地將活動(dòng)分為生產(chǎn)活動(dòng)、支持活動(dòng)和管理活動(dòng)[13]，具體定義如下。

生產(chǎn)活動(dòng)：如果該活動(dòng)能夠得到可量化的實(shí)體結(jié)果，那么該過(guò)程就稱(chēng)為生產(chǎn)活動(dòng)；支持活動(dòng)：如果該活動(dòng)能夠?yàn)樯a(chǎn)活動(dòng)提供必要的無(wú)形實(shí)體支持，那么該活動(dòng)稱(chēng)為支持活動(dòng)；管理活動(dòng)：為機(jī)構(gòu)管理運(yùn)行提供支持的活動(dòng)稱(chēng)為管理活動(dòng)。圖1給出了3種活動(dòng)之間的關(guān)系，并給出了一些簡(jiǎn)單的活動(dòng)任務(wù)內(nèi)容。

圖1 GLP研究的活動(dòng)屬性圖示Fig. 1 Activity categorization illustration in GLP study

為了進(jìn)一步闡述不同活動(dòng)在研究中受關(guān)注的程度以及研究中各個(gè)環(huán)節(jié)的屬性，以常規(guī)的生態(tài)毒理研究流程為例，結(jié)合質(zhì)量保證部門(mén)所實(shí)施檢查活動(dòng)的性質(zhì)，對(duì)各個(gè)相關(guān)的活動(dòng)進(jìn)行歸類(lèi)(表4)。

如上所述，生產(chǎn)活動(dòng)作為產(chǎn)生最終數(shù)據(jù)和結(jié)果的過(guò)程，與管理活動(dòng)和支持性活動(dòng)共同組成了完整的研究，從研究實(shí)施的角度看，生產(chǎn)活動(dòng)的失敗或者失誤會(huì)直接導(dǎo)致數(shù)據(jù)缺失或者結(jié)果錯(cuò)誤，從而直接影響研究結(jié)果和結(jié)論。而可能導(dǎo)致生產(chǎn)活動(dòng)失敗的重要原因之一就在于研究計(jì)劃的日程不合理，比如，對(duì)活動(dòng)任務(wù)完成周期的錯(cuò)誤估計(jì)，對(duì)不同活動(dòng)關(guān)聯(lián)影響缺乏前瞻性，日程變化時(shí)通知試驗(yàn)人員存在滯后性等。

但是，要注意的是數(shù)據(jù)處理和分析這類(lèi)生產(chǎn)活動(dòng)，對(duì)于大多數(shù)研究來(lái)說(shuō)，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、處理和分析產(chǎn)生的數(shù)據(jù)屬于二次數(shù)據(jù)，它發(fā)生的時(shí)間是在所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)已經(jīng)采集之后，相對(duì)于其他生產(chǎn)活動(dòng)，它的發(fā)生比較獨(dú)立。更為重要的是，因?yàn)檎麄€(gè)統(tǒng)計(jì)和分析的過(guò)程易于采用直接方法重現(xiàn)和復(fù)核。所以數(shù)據(jù)處理和分析時(shí)間安排比較靈活和寬松，相關(guān)人員在時(shí)間安排上擁有較大的自主權(quán)。所以，為了確保研究計(jì)劃時(shí)間安排能夠?qū)ρ芯繉?shí)施進(jìn)行有效控制，不建議采用統(tǒng)計(jì)分析時(shí)間作為試驗(yàn)完成日期的節(jié)點(diǎn)。

4 生態(tài)毒理GLP研究日程安排要點(diǎn)(Key point of planning schedule for ecotoxicology GLP study filed)

對(duì)于不同類(lèi)型生態(tài)毒理GLP研究，生物毒性試驗(yàn)、試驗(yàn)樣品處理和生物毒性測(cè)試生產(chǎn)活動(dòng)的順序是不同的。

比如，對(duì)于按照OECD化學(xué)品測(cè)試方法301開(kāi)展的快速生物降解試驗(yàn)，試驗(yàn)順序?yàn)椋号渲剖┯眯问降臉悠贰囼?yàn)樣品開(kāi)始暴露(活性污泥接種物體系)—試驗(yàn)期間數(shù)據(jù)記錄—試驗(yàn)樣品停止暴露(活性污泥接種物體系)—試驗(yàn)結(jié)束—數(shù)據(jù)處理，按照活動(dòng)屬性來(lái)說(shuō)，對(duì)應(yīng)的活動(dòng)應(yīng)該是：試驗(yàn)樣品流程—生物毒性測(cè)試—數(shù)據(jù)管理(圖2)。

圖2 快速生物降解試驗(yàn)的生產(chǎn)活動(dòng)順序Fig. 2 Sequence of the production processes in ready biodegradation test

對(duì)于藻類(lèi)生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)來(lái)說(shuō)，活動(dòng)的順序是：定量分析方法驗(yàn)證—配制樣品溶液—樣品與生物體系作用—試驗(yàn)過(guò)程—停止樣品與生物體系作用—癥狀觀(guān)察—試驗(yàn)溶液濃度分析，也就是生物毒性測(cè)試外分析—試驗(yàn)樣品流程—生物毒性測(cè)試—生物毒性測(cè)試外分析(圖3)。

圖3 藻類(lèi)生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)的生產(chǎn)活動(dòng)順序Fig. 3 Sequence of the production processes in alga growth inhibition test

大多數(shù)情況下，生態(tài)毒理類(lèi)研究啟動(dòng)時(shí)的活動(dòng)節(jié)點(diǎn)是樣品流程或者是生物毒性測(cè)試外分析(例如化學(xué)分析)，而試驗(yàn)完成對(duì)應(yīng)的活動(dòng)節(jié)點(diǎn)是生物毒性測(cè)試或者是生物毒性測(cè)試外分析(可能是病理分析，也可能是化學(xué)分析)。

表4 生態(tài)毒理GLP研究過(guò)程活動(dòng)屬性分類(lèi)及對(duì)應(yīng)的質(zhì)量保證活動(dòng)Table 4 Categorization and property of processes in ecotoxicology GLP study and quality assurance actions

如果沒(méi)有生物毒性前/后分析(比如化學(xué)分析)的情況，可以將試驗(yàn)開(kāi)始日期定義為樣品配制日期，或者是樣品開(kāi)始暴露的日期，試驗(yàn)完成日期可以設(shè)置為生物體系與樣品結(jié)束相互作用的日期。

對(duì)于有生物毒性測(cè)試外分析的情況，可以采用多場(chǎng)所試驗(yàn)管理或者研究專(zhuān)題管理的方式進(jìn)行處理。

(1)多場(chǎng)所試驗(yàn)管理

將定量分析試驗(yàn)部分作為多場(chǎng)所研究的試驗(yàn)階段管理，其分析負(fù)責(zé)人作為該階段的負(fù)責(zé)人。主研究計(jì)劃中的試驗(yàn)開(kāi)始日期定為配制樣品的日期，試驗(yàn)完成日期定義為最終癥狀觀(guān)察的日期或者結(jié)束暴露的日期，主研究計(jì)劃中的階段研究計(jì)劃將開(kāi)始定量分析方法驗(yàn)證與溶液分析結(jié)束的日期作為試驗(yàn)階段開(kāi)始和結(jié)束的日期。

(2)研究專(zhuān)題管理

將定量分析方法驗(yàn)證的開(kāi)始日期作為試驗(yàn)開(kāi)始日期，將濃度分析結(jié)束的日期作為試驗(yàn)結(jié)束日期，因?yàn)槎糠治龇椒ǖ娜掌诳赡苁艿絻x器狀態(tài)、儀器安排等非預(yù)期因素的影響，所以時(shí)間安排上可以設(shè)置為時(shí)間段(比如2～3 d)，時(shí)間段必須合理，不能過(guò)于寬泛。

5 研究實(shí)施中計(jì)劃時(shí)間變化的處理(Handling the time change during implementation)

對(duì)于批準(zhǔn)后的計(jì)劃書(shū)中時(shí)間發(fā)生變化的情況，有些機(jī)構(gòu)認(rèn)為時(shí)間上的變化屬于管理性的內(nèi)容，無(wú)需進(jìn)行修訂或者開(kāi)展偏離流程，但是這可能違反GLP法規(guī)的規(guī)定。OECD GLP[1]規(guī)范中規(guī)定：“研究計(jì)劃的修訂是指試驗(yàn)項(xiàng)目啟動(dòng)以后對(duì)試驗(yàn)計(jì)劃進(jìn)行的有意修改。研究計(jì)劃中的修訂需要有明確的理由，并經(jīng)過(guò)項(xiàng)目負(fù)責(zé)人的同意，簽名并注明日期，與計(jì)劃書(shū)一同保存”。在OECD GLP NO.3文件“GLP管理機(jī)構(gòu)準(zhǔn)則試驗(yàn)機(jī)構(gòu)檢查與試驗(yàn)項(xiàng)目核查實(shí)施指南”[14]中的試驗(yàn)的實(shí)施中規(guī)定，試驗(yàn)計(jì)劃書(shū)的任何修改由項(xiàng)目負(fù)責(zé)人簽字并注明日期。

所以，如果計(jì)劃書(shū)中規(guī)定了預(yù)計(jì)的時(shí)間，那么該內(nèi)容就屬于計(jì)劃書(shū)的一部分，相關(guān)的改動(dòng)就應(yīng)該屬于研究計(jì)劃修訂，需要說(shuō)明理由，獲得SD的批準(zhǔn)，并且與原研究計(jì)劃一同保存。

從計(jì)劃角度，計(jì)劃書(shū)中時(shí)間安排的目的是協(xié)調(diào)各個(gè)試驗(yàn)人員之間的配合，確保各方能在試驗(yàn)前提前做好準(zhǔn)備，所以當(dāng)預(yù)計(jì)時(shí)間安排發(fā)生變化時(shí)，應(yīng)該通過(guò)一種合理和有效的方式及時(shí)告知相關(guān)人員，而研究計(jì)劃的修訂流程就是一種比較有效和合規(guī)的流程，并且確保試驗(yàn)人員能夠獲得最終版的計(jì)劃書(shū)及其修改。

雖然，GLP法規(guī)接受對(duì)計(jì)劃書(shū)進(jìn)行修訂，但是過(guò)于頻繁的修訂可能會(huì)讓監(jiān)管機(jī)構(gòu)懷疑測(cè)試機(jī)構(gòu)在項(xiàng)目管理能力上存在不足，從而使研究陷于風(fēng)險(xiǎn)度較高的境地，引起監(jiān)管部門(mén)對(duì)研究可靠性和可信性產(chǎn)生質(zhì)疑。

因此，如果計(jì)劃書(shū)中試驗(yàn)起始日期的活動(dòng)定義為隨機(jī)性較強(qiáng)的活動(dòng)，比如生物稱(chēng)重、設(shè)備開(kāi)機(jī)和稱(chēng)量等，那么實(shí)際操作中，這一類(lèi)的活動(dòng)的發(fā)生比較靈活，所以如果以這類(lèi)活動(dòng)為試驗(yàn)起始日期的節(jié)點(diǎn)，那么就比較容易產(chǎn)生因?yàn)闀r(shí)間修改導(dǎo)致的計(jì)劃偏離。

如果既想避免不斷修訂計(jì)劃書(shū)帶來(lái)的工作量，以及忘記修訂導(dǎo)致的計(jì)劃偏離，又想確保試驗(yàn)人員和QA人員及時(shí)跟進(jìn)最新計(jì)劃履行工作，那么首先應(yīng)該按照GLP的規(guī)定，在計(jì)劃書(shū)中給出預(yù)計(jì)的試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束日期以及對(duì)應(yīng)的活動(dòng)內(nèi)容，對(duì)于這些出現(xiàn)在最終計(jì)劃書(shū)中的活動(dòng)應(yīng)該是易于理解和界定的，并且是較為固定的活動(dòng)。其次，建立獨(dú)立文件或記錄作為日程安排表，即方便實(shí)驗(yàn)人員參照實(shí)驗(yàn)進(jìn)度表執(zhí)行試驗(yàn)計(jì)劃，且防止操作遺漏，但是，在使用獨(dú)立的日程安排表時(shí)，需要在項(xiàng)目負(fù)責(zé)人、試驗(yàn)人員和質(zhì)量保證人員之間建立合理的溝通機(jī)制，確保相關(guān)人員能及時(shí)了解日程的安排和變化。

獨(dú)立的日程表上一般會(huì)包括生物稱(chēng)量和分組、施藥日期、溶液更換日期、癥狀觀(guān)察日期、環(huán)境參數(shù)測(cè)定日期、采樣日期和化學(xué)分析日期等，同時(shí)還應(yīng)該包括計(jì)劃實(shí)施的日期、實(shí)際實(shí)施的日期和試驗(yàn)人員等信息。在設(shè)計(jì)日程表時(shí)，需要獲得所有可能會(huì)參加該研究的試驗(yàn)人員的同意。比如，在設(shè)計(jì)水生試驗(yàn)樣品定量分析日程時(shí)，關(guān)于采樣時(shí)間、分析樣本轉(zhuǎn)交時(shí)間和分析時(shí)間等，項(xiàng)目負(fù)責(zé)人需要先與分析人員和試驗(yàn)人員進(jìn)行溝通和協(xié)商。

6 總結(jié)與討論(Discussion and conclusion)

在GLP實(shí)驗(yàn)室中，研究計(jì)劃的日程設(shè)計(jì)非常關(guān)鍵，不僅涉及到數(shù)據(jù)采集、設(shè)備調(diào)配、場(chǎng)地安排、人員分配和QA檢查等多個(gè)方面，也會(huì)從側(cè)面反映實(shí)驗(yàn)室管理能力和技術(shù)實(shí)力。雖然，在US FDA的法規(guī)中，已經(jīng)不再需要對(duì)試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束日期進(jìn)行描述，但是OECD GLP法規(guī)、EPA GLP法規(guī)以及德國(guó)、瑞士和日本環(huán)境省的GLP監(jiān)管機(jī)構(gòu)始終都保持了對(duì)計(jì)劃書(shū)中預(yù)計(jì)試驗(yàn)開(kāi)始和試驗(yàn)完成日期的定義和規(guī)定。而在生態(tài)毒理領(lǐng)域的GLP實(shí)驗(yàn)室，基本是按照OECD GLP或者EPA GLP法規(guī)體系來(lái)管理的，所以相關(guān)的計(jì)劃書(shū)中必須體現(xiàn)試驗(yàn)起止日期。

為了更加合理地對(duì)研究日程進(jìn)行規(guī)劃，本文提出了按照活動(dòng)屬性分解研究活動(dòng)的方法，有利于了解各個(gè)活動(dòng)之間的影響程度和相互依賴(lài)性，并識(shí)別出研究中對(duì)結(jié)果具有直接影響的活動(dòng)，將這類(lèi)活動(dòng)稱(chēng)為生產(chǎn)性活動(dòng)，其發(fā)生和結(jié)束的時(shí)間可對(duì)應(yīng)到計(jì)劃書(shū)中試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束的日期。將該方法與具體研究類(lèi)型結(jié)合，按照研究中生產(chǎn)性活動(dòng)發(fā)生的先后順序，分別識(shí)別試驗(yàn)開(kāi)始和完成時(shí)對(duì)應(yīng)的活動(dòng)，從而確定研究計(jì)劃中最合理的時(shí)間設(shè)計(jì)。這既能滿(mǎn)足計(jì)劃書(shū)合理性要求也符合前瞻性的理念。

GLP法規(guī)的初衷是為了確保研究的質(zhì)量和重現(xiàn)性，而研究科學(xué)性更多要依賴(lài)于實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)能力和人員水平，所以，GLP規(guī)范和研究項(xiàng)目不可截然分開(kāi)，也就是管理和實(shí)踐必須結(jié)合。有時(shí)當(dāng)談到GLP規(guī)范時(shí)，人們會(huì)認(rèn)為這是對(duì)科學(xué)研究的一種束縛，因?yàn)镚LP規(guī)范確實(shí)給實(shí)驗(yàn)室增加了大量文檔性工作，但是當(dāng)我們對(duì)法規(guī)具備了足夠的了解，并且能夠結(jié)合科學(xué)管理觀(guān)做到統(tǒng)籌兼顧，將可能出現(xiàn)的問(wèn)題解決在前端，可以極大地避免重復(fù)性勞動(dòng)和無(wú)解的內(nèi)部爭(zhēng)議，提高工作效率，提升測(cè)試機(jī)構(gòu)的管理水平和測(cè)試效率，逐步地提升我國(guó)GLP測(cè)試機(jī)構(gòu)在國(guó)際上的認(rèn)可度。