丁婷 蘇雪松 付蒙

【摘 要】目的：探討囊胚發(fā)育速度對(duì)解凍移植周期妊娠結(jié)局的影響。方法：采用單因素logistic回歸分析評(píng)估230例囊胚解凍移植周期妊娠結(jié)局的影響因素。 結(jié)果：移植D5囊胚臨床妊娠的可能性顯著高于移植D6囊胚（OR： 0.560， P<0.05）。結(jié)論：囊胚發(fā)育速度可能對(duì)囊胚解凍移植周期的妊娠結(jié)局有一定的影響。

【關(guān)鍵詞】 玻璃化冷凍;囊胚發(fā)育速度;囊胚解凍移植;妊娠結(jié)局

【中圖分類號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)識(shí)別碼】B【文章編號(hào)】1002-8714（2020）09-0009-01

玻璃化冷凍是一種快速冷凍方法，采用高濃度冷凍保護(hù)劑，使胚胎保持在相對(duì)穩(wěn)定的玻璃樣狀態(tài)，減少冰晶對(duì)胚胎的機(jī)械性損傷。囊胚移植有助于選擇發(fā)育潛能更好的胚胎。玻璃化冷凍囊胚移植能夠改善囊胚存活率和妊娠結(jié)局。然而，囊胚發(fā)育速度對(duì)妊娠結(jié)局的影響目前尚無定論。本研究采用單因素logistic回歸分析評(píng)估囊胚發(fā)育速度對(duì)囊胚解凍移植周期妊娠結(jié)局的影響。

1 材料與方法

1.1研究對(duì)象

對(duì)2017年3月～2019年10月共230例囊胚解凍移植周期進(jìn)行單因素logistic回歸分析。排除同時(shí)移植D5及D6囊胚的解凍移植周期。

1.2 方法

1.2.1 胚胎繼續(xù)培養(yǎng)及囊胚評(píng)分

在取卵后第3天，挑選質(zhì)量較好的2～4枚胚胎進(jìn)行移植或冷凍，將剩余的胚胎繼續(xù)培養(yǎng)至D5或D6，根據(jù)Garnder囊胚分級(jí)法進(jìn)行囊胚評(píng)分。

1.2.2 囊胚玻璃化冷凍和解凍

冷凍標(biāo)準(zhǔn)為3～6期CB級(jí)以上的囊胚。冷凍前用激光系統(tǒng)（RI）對(duì)囊胚進(jìn)行人工皺縮，采用玻璃化冷凍和解凍試劑（Kitazato）進(jìn)行囊胚冷凍和解凍，解凍后進(jìn)行輔助孵化，轉(zhuǎn)移至G-2培養(yǎng)液（Vitrolife）液滴中，在6% CO2，5% O2和89% N2條件下培養(yǎng)2 h，細(xì)胞損傷<50%，囊胚腔擴(kuò)張，則進(jìn)行移植。

1.2.3 子宮內(nèi)膜準(zhǔn)備及胚胎移植

子宮內(nèi)膜準(zhǔn)備包括自然周期、人工周期或促排卵周期。在子宮內(nèi)膜達(dá)到合適的厚度或排卵后進(jìn)行黃體支持，6天后進(jìn)行囊胚移植，移植后繼續(xù)黃體支持至孕10～12周。移植后12天檢測(cè)血清HCG，血清HCG陽性后4周檢查超聲，超聲檢查可見宮內(nèi)孕囊為臨床妊娠。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用單因素logistic回歸分析評(píng)估囊胚解凍移植周期臨床妊娠的影響因素，因變量“臨床妊娠情況”編碼為0時(shí)代表未妊娠，1代表妊娠。P<0.05為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

囊胚冷凍天數(shù)對(duì)妊娠為負(fù)向影響，D6冷凍囊胚妊娠的可能性是D5冷凍囊胚的0.560倍，降低了44%，移植D5囊胚臨床妊娠的可能性顯著高于移植D6囊胚;子宮內(nèi)膜厚度及移植胚胎數(shù)對(duì)臨床妊娠為正向影響;年齡、不孕年限、不孕類型及受精方式對(duì)臨床妊娠的影響未達(dá)顯著（見表）。

3 討論

在Haas等[1]的研究中，與D5相比，D6進(jìn)行玻璃化冷凍的囊胚臨床妊娠的可能性顯著較低（OR： 0.54， P<0.05）。優(yōu)質(zhì)囊胚進(jìn)行單囊胚移植，D6的臨床妊娠率及繼續(xù)妊娠率（22%， 19% ）都顯著低于D5（42%， 40%）。Alice Tubbing等[2]的結(jié)果表明，D5冷凍是囊胚解凍移植臨床妊娠和活產(chǎn)的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)，在控制混雜因素后結(jié)果仍然是可靠的。

我們的研究結(jié)果顯示，與D5冷凍囊胚相比，D6冷凍囊胚妊娠的可能性降低了44%（OR： 0.560， P<0.05），移植D5囊胚臨床妊娠的可能性顯著高于移植D6囊胚。

盡管玻璃化冷凍已經(jīng)廣泛應(yīng)用于囊胚冷凍，玻璃化冷凍技術(shù)還遠(yuǎn)遠(yuǎn)沒有標(biāo)準(zhǔn)化。擴(kuò)張的囊胚腔中有較多的液體，在冷凍過程中容易受到損傷，人工皺縮能夠減少液體體積，縮短平衡時(shí)間，提高囊胚解凍后的存活率。

在囊胚解凍移植周期中，囊胚形成的速度可能對(duì)胚胎的發(fā)育潛能和妊娠結(jié)局有一定的影響，D6囊胚發(fā)育較慢及相對(duì)較差的妊娠結(jié)局可能與胚胎自身的因素、非整倍性發(fā)生率及體外培養(yǎng)環(huán)境有關(guān)。由于D5囊胚具有顯著較好的臨床結(jié)局，冷凍1枚D5囊胚或2枚D6囊胚可能能夠節(jié)省胚胎學(xué)家的時(shí)間及冷凍保存空間，并有利于降低多胎妊娠率。

參考文獻(xiàn)

[1] Haas J， Meriano J， Laskin C et al. Clinical pregnancy rate following frozen embryo transfer is higher with blastocysts vitrified on day 5 than on day 6[J]. Journal of assisted reproduction and genetics， 2016， 33 （12）： 1553-1557.

[2] Tubbing A， Shaw-Jackson C， Ameye L et al. Increased live births after day 5 versus day 6 transfers of vitrified-warmed blastocysts[J]. Journal of assisted reproduction and genetics， 2018， 35 （3）： 417-424.