蔣天媛，張秋云，劉紹能，張榮，王東方，張易從，劉瑞華，周文強(qiáng)

論著·臨床研究

健脾理肺通便方治療功能性便秘療效及對(duì)腸道菌群的影響

蔣天媛1，張秋云1，劉紹能2，張榮2，王東方2，張易從2，劉瑞華2，周文強(qiáng)2

1.首都醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，北京 100069；2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院，北京 100053

觀察健脾理肺通便方治療功能性便秘（FC）脾肺氣虛、胃腸氣滯證的療效，以及對(duì)患者腸道菌群的影響。選取2019年4－12月中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院脾胃病科門(mén)診FC脾肺氣虛、胃腸氣滯證患者20例，口服健脾理肺通便方4周。記錄治療前后患者便秘癥狀分級(jí)、中醫(yī)癥狀評(píng)分；留取治療前后新鮮糞便樣本，基于16S rRNA細(xì)菌檢測(cè)技術(shù)鑒定腸道菌群，采用生物信息學(xué)分析方法對(duì)患者治療前后糞便樣本進(jìn)行測(cè)序評(píng)估與物種注釋分析、群落組成分析、組間差異性檢驗(yàn)及LEfSe多級(jí)物種差異判別分析。通便療效臨床痊愈率為50.00%（10/20），中醫(yī)療效臨床痊愈率為45.00%（9/20）。與治療前比較，患者各項(xiàng)中醫(yī)癥狀評(píng)分下降（＜0.05）。測(cè)序后獲得1 687 426條有效序列，經(jīng)聚類(lèi)分析，治療前后分別有76、119個(gè)特征OTUs；治療前特征性物種在科水平為T(mén)annerellaceae和氣球菌科Aerococcaceae，在屬水平為志賀菌屬Escherichia-Shigella、副擬桿菌屬Parabacteroides、Odoribacter、Lachnospiraceae_FCS020_group、Eubacterium_brachy_group（LDA＞2），其中LDA分值最高的物種為志賀菌屬Escherichia-Shigella（LDA＝4.25）。治療后的特征性物種，在目水平為雙歧桿菌目Bifidobacteriales，在科水平為雙歧桿菌科Bifidobacteriaceae、紅蝽?xiàng)U菌科Coriobacteriaceae、腸球菌科Enterococcaceae，在屬水平有雙歧桿菌屬Bifidobacterium、柯林斯菌屬Collinsella、Fusicatenibacter、腸球菌屬Enterococcus、鏈球菌屬Streptococcus（LDA＞2），其中LDA分值最高的物種為雙歧桿菌屬Bifidobacterium（LDA＝4.17）。健脾理肺通便方可明顯改善FC脾肺氣虛、胃腸氣滯證患者便秘情況，并可調(diào)節(jié)腸道菌群，治療后志賀菌屬Escherichia-Shigella豐度降低，雙歧桿菌屬Bifidobacterium豐度升高。

健脾理肺通便方；功能性便秘；脾肺氣虛；胃腸氣滯；腸道菌群；臨床研究

功能性便秘（functional constipation，F(xiàn)C）臨床以排便間隔延長(zhǎng)、排便費(fèi)力、便質(zhì)干硬、大便黏滯等為主要表現(xiàn)，且無(wú)器質(zhì)性病變，可見(jiàn)于各個(gè)年齡段[1]。長(zhǎng)期便秘可導(dǎo)致口臭、痔瘡、肛裂，甚至增加結(jié)直腸惡性病變幾率[2]，引發(fā)心血管事件[3]，嚴(yán)重?fù)p害患者生存和生活質(zhì)量。有研究顯示，腸道菌群失調(diào)可能是多種慢性胃腸道疾病的發(fā)病原因，F(xiàn)C患者腸道菌群結(jié)構(gòu)與健康群體存在明顯差異[4]，且腸道菌群功能與腸道動(dòng)力關(guān)系密切[5]。中醫(yī)藥治療FC具有療效明顯、不良反應(yīng)少、停藥不易反彈、費(fèi)用低等優(yōu)勢(shì)。筆者張秋云根據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)制定健脾理肺通便方治療FC脾肺氣虛、胃腸氣滯證取得較好療效[6]。本研究通過(guò)便秘癥狀分級(jí)和中醫(yī)癥狀評(píng)分評(píng)價(jià)健脾理肺通便方對(duì)FC患者的通便療效和中醫(yī)療效，并通過(guò)16S rRNA細(xì)菌檢測(cè)技術(shù)及生物信息學(xué)方法，分析治療前后患者腸道菌群情況，探討健脾理肺通便方對(duì)腸道菌群的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年4－12月中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院脾胃病科門(mén)診FC脾肺氣虛、胃腸氣滯證患者20例。其中男6例，女14例；年齡32～75歲，平均年齡（53.70±14.51）歲；病程最短6個(gè)月，最長(zhǎng)20年，平均病程（6.43±5.39）年；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）19.53～25.28 kg/m2，平均（22.08±1.76）kg/m2。本研究經(jīng)中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)（2019-084-KY）。

1.2 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)

參照羅馬Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)[7]。排除腸道及全身器質(zhì)性因素、藥物及其他原因?qū)е碌谋忝夭⒎弦韵聵?biāo)準(zhǔn)：（1）必須符合下列至少2個(gè)癥狀：①至少25%的時(shí)間排便感到費(fèi)力；②至少25%的時(shí)間排便為塊狀便或硬便（布里斯托糞便性狀量表1型、2型）；③至少25%的時(shí)間排便有不盡感；④至少25%的時(shí)間排便有肛門(mén)直腸梗阻或阻塞感；⑤至少25%的時(shí)間排便需要手法輔助（如用手指協(xié)助排便、盆底支持）；⑥每周自發(fā)性排便少于3次。（2）不使用瀉藥時(shí)很少出現(xiàn)稀便。（3）不符合便秘型腸易激綜合征的診斷標(biāo)準(zhǔn)。診斷之前癥狀出現(xiàn)至少6個(gè)月，且近3個(gè)月癥狀符合以上診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)

參照《功能性便秘中西醫(yī)結(jié)合診療共識(shí)意見(jiàn)（2017年）》[1]及《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則（試行）》[8]制定脾肺氣虛、胃腸氣滯證中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)。主癥：排便間隔延長(zhǎng)，排便費(fèi)力，大便干硬或大便黏滯；次癥：疲憊乏力，納呆少食，神疲懶言，腹脹；舌脈：舌淡苔薄白，脈沉細(xì)或脈細(xì)弱。具備主癥1項(xiàng)，次癥2項(xiàng)，參考舌脈即可辨證。

1.4 納入標(biāo)準(zhǔn)

①符合上述西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)及中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)；②年齡18～75歲；③近1個(gè)月未使用抗生素、益生菌類(lèi)藥物；④近6個(gè)月經(jīng)結(jié)腸鏡檢查排除腸道器質(zhì)性病變；⑤患者對(duì)本研究知情并簽署知情同意書(shū)。

1.5 排除標(biāo)準(zhǔn)

①有胃腸道手術(shù)史者；②合并心血管疾病、糖尿病、腫瘤、神經(jīng)系統(tǒng)疾病者；③妊娠或哺乳期婦女；④BMI＜16.0 kg/m2或＞30.0 kg/m2；⑤預(yù)計(jì)試驗(yàn)期間有外出計(jì)劃。

1.6 治療方法

予健脾理肺通便方（黃芪15 g，白術(shù)30 g，枳實(shí)10 g，厚樸10 g，瓜蔞30 g，虎杖10 g，當(dāng)歸10 g，苦杏仁6 g。中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院中藥房采購(gòu)飲片），水煎服，每日1劑，每次200 mL，早晚餐后30 min口服。療程4周。

1.7 觀察指標(biāo)

1.7.1 便秘癥狀分級(jí)

參考相關(guān)文獻(xiàn)[7-9]及課題組專(zhuān)家意見(jiàn)，進(jìn)行便秘分級(jí)。①排便間隔延長(zhǎng)：＜3 d排便1次為無(wú)，3～4 d排便1次為輕度，5～6 d排便1次為中度，≥7 d排便1次為重度。②排便費(fèi)力：排便正常為無(wú)，排便稍覺(jué)費(fèi)力為輕度，須努掙才能排出大便為中度，臨廁努掙仍不能排大便（須使用其他排便輔助方法）為重度。③大便干硬：便質(zhì)正常為無(wú)，大便稍干、條狀為輕度，大便干燥成塊為中度，大便干結(jié)如羊糞狀為重度。④大便黏滯：大便通暢無(wú)黏滯為無(wú)，大便稍黏滯但每次能排凈為輕度，大便黏滯且每次排便不凈為中度，大便嚴(yán)重黏滯且反復(fù)如廁為重度。

1.7.2 中醫(yī)癥狀評(píng)分

參考相關(guān)文獻(xiàn)[1，8]及課題組專(zhuān)家意見(jiàn)確定中醫(yī)癥狀評(píng)分。主癥：排便間隔延長(zhǎng)、排便費(fèi)力、大便干硬、大便黏滯，按癥狀無(wú)、輕、中、重分別計(jì)0、2、4、6分；次癥：疲憊乏力（癥狀無(wú)或消失為無(wú)，肢體稍倦可堅(jiān)持輕體力工作為輕度，四肢乏力勉強(qiáng)進(jìn)行日常工作活動(dòng)為中度，全身無(wú)力終日不愿活動(dòng)為重度）、納呆少食（癥狀無(wú)或消失為無(wú)，食欲差飯量減少1/3以?xún)?nèi)為輕度，食欲差飯量減少1/3～1/2為中度，食欲差飯量減少1/2以上為重度）、神疲懶言（癥狀無(wú)或消失為無(wú)，精神略差為輕度，精神疲倦不欲言語(yǔ)為中度，精神疲倦懶于言語(yǔ)為重度）、腹脹（癥狀無(wú)或消失為無(wú)，腹脹偶爾出現(xiàn)為輕度，腹脹經(jīng)常出現(xiàn)為中度，腹脹總出現(xiàn)為重度），按癥狀無(wú)、輕、中、重分別計(jì)0、1、2、3分。各項(xiàng)癥狀評(píng)分之和為中醫(yī)癥狀積分。

1.7.3 菌群檢測(cè)及分析

收集患者治療前后新鮮糞便樣本，取中段糞便于滅菌滅酶凍存管（Corning/康寧，規(guī)格2.0 mL），1 h內(nèi)置于-80 ℃冰箱保存待檢測(cè)。糞便樣本采用16 S rRNA細(xì)菌檢測(cè)技術(shù)鑒定腸道菌群，分析治療前后菌群結(jié)構(gòu)和差異性。

16 S rRNA細(xì)菌檢測(cè)：首先使用E.Z.N.A.?soil試劑盒（Omega Bio-tek，Norcross，GA，U.S.）對(duì)樣本進(jìn)行基因組DNA抽提，DNA濃度和純度利用NanoDrop2000進(jìn)行檢測(cè)，利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA提取質(zhì)量。用338F（5’-ACTCCTACGGGA GGCAGCAG-3’）和806R（5’-GGACTACHVGGG TWTCTAAT-3’）引物對(duì)V3-V4可變區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增（PCR儀：ABI GeneAmp?9700型）。擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性3 min，27個(gè)循環(huán)（95 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s），最后72 ℃延伸10 min。擴(kuò)增體系為20 μL，4 μL 5*FastPfu 緩沖液，2 μL 2.5 mmol/L dNTPs，0.8 μL引物（5 μmol/L），0.4 μL FastPfu聚合酶；10 ng DNA模板。使用2%瓊脂糖凝膠回收PCR產(chǎn)物，利用AxyPrep DNA Gel Extraction Kit （Axygen Biosciences，Union City，CA，USA）進(jìn)行純化，Tris-HCl洗脫，2%瓊脂糖電泳檢測(cè)。利用QuantiFluor?-ST（Promega，USA）檢測(cè)定量。根據(jù)Illumina MiSeq平臺(tái)（Illumina，San Diego，USA）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程將純化后的擴(kuò)增片段構(gòu)建PE 2*300的文庫(kù)。

生物信息學(xué)分析：先對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行過(guò)濾處理并得到優(yōu)化序列；在去除嵌合體序列后，進(jìn)行OTU聚類(lèi)分析并對(duì)OTU的代表序列作分類(lèi)學(xué)分析。基于OTU聚類(lèi)分析結(jié)果及分類(lèi)學(xué)信息，對(duì)各分類(lèi)水平上的群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析?；诿兰镌破脚_(tái)（https://cloud.majorbio.com/）分別進(jìn)行物種注釋與評(píng)估、物種組成分析、組間差異性檢驗(yàn)、LEfSe多級(jí)物種差異判別分析。

1.8 療效標(biāo)準(zhǔn)

1.8.1 通便療效標(biāo)準(zhǔn)

參考相關(guān)文獻(xiàn)[8-9]及課題組專(zhuān)家意見(jiàn)制定通便療效標(biāo)準(zhǔn)。臨床痊愈：排便時(shí)間恢復(fù)正常且排便感及便質(zhì)無(wú)異常；顯效：至少1個(gè)便秘癥狀減輕2個(gè)級(jí)度以上或至少1個(gè)恢復(fù)正常，排便間隔時(shí)間72 h內(nèi)；有效：至少1個(gè)便秘癥狀減輕1個(gè)級(jí)度以上，即由重度降為中度，或由中度降為輕度；無(wú)效：排便情況無(wú)改善。

1.8.2 中醫(yī)療效標(biāo)準(zhǔn)

參考相關(guān)文獻(xiàn)[8]及課題組專(zhuān)家意見(jiàn)制定中醫(yī)療效標(biāo)準(zhǔn)。療效指數(shù)（N）＝（治療前積分－治療后積分）÷治療前積分×100%。臨床痊愈：主癥、次癥消失或基本消失，N≥95%；顯效：70%≤N＜95%；有效：30%≤N＜70%；無(wú)效：N＜30%。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 通便療效及中醫(yī)療效

通便療效臨床痊愈率為50.00%（10/20），中醫(yī)療效臨床痊愈率為45.00%（9/20），見(jiàn)表1。

表1 FC患者通便療效及中醫(yī)療效（例）

項(xiàng)目例數(shù)臨床痊愈顯效有效無(wú)效 通便療效2010820 中醫(yī)療效20 9650

2.2 中醫(yī)癥狀評(píng)分比較

與治療前比較，治療后中醫(yī)癥狀評(píng)分降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 FC患者治療前后中醫(yī)癥狀評(píng)分比較（±s，分）

2.3 測(cè)序質(zhì)量評(píng)估及物種注釋分析

測(cè)序數(shù)據(jù)經(jīng)優(yōu)化后，共獲得1 687 426條有效序列，有效序列范圍為26 836～54 155條，平均42 186條。由OUT水平和屬水平上的Shannon指數(shù)可看出，樣本腸道菌群多樣性指數(shù)均大于2.23，實(shí)際OTUs數(shù)目均大于300，且稀釋曲線(xiàn)趨于平緩，表明測(cè)序結(jié)果可反映當(dāng)前樣本所包含的多樣性，繼續(xù)增加測(cè)序深度已無(wú)法檢測(cè)到尚未發(fā)現(xiàn)的新OTUs。見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 各樣本OTU水平Shannon稀釋性曲線(xiàn)

圖2 各樣本屬水平Shannon稀釋性曲線(xiàn)

基于物種組成分析，對(duì)2組樣本進(jìn)行聚類(lèi)，得到OTUs水平和屬水平差異韋恩圖。在OTUs水平2組樣本共有621個(gè)相同OTUs，治療前有76個(gè)特征OTUs，治療后有119個(gè)特征OTUs。在屬水平，共有225個(gè)相同菌屬，治療前有30個(gè)特征菌屬，治療后有19個(gè)特征菌屬。

2.4 腸道菌群組成結(jié)構(gòu)分析

統(tǒng)計(jì)2組樣本在門(mén)水平、屬水平豐度＞1.00%的物種，并繪制柱狀圖。在門(mén)水平，2組樣本的優(yōu)勢(shì)菌門(mén)均為厚壁菌門(mén)Firmicutes、擬桿菌門(mén)Bacteroidetes、變形菌門(mén)Proteobacteria、放線(xiàn)菌門(mén)Actinobacteria，其中厚壁菌門(mén)占比最高，治療前后分別為59.00%、61.23%，見(jiàn)圖3。在屬水平，菌落結(jié)構(gòu)依次為擬桿菌屬Bacteroides、糞桿菌屬Faecalibacterium、Agathobacter、Blautia、志賀菌屬Escherichia- Shigella、[Eubacterium]_hallii_ group、Subdoligranulum、普雷沃菌屬Prevotella_9、羅斯菌屬Roseburia、雙歧桿菌屬Bifidobacterium等，見(jiàn)圖4。

圖3 基于門(mén)水平2組樣本腸道微生物群落結(jié)構(gòu)

圖4 基于屬水平2組樣本腸道微生物群落結(jié)構(gòu)

在屬分類(lèi)水平上，對(duì)前20位的物種進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用群落熱圖展示治療前后不同菌屬的豐度變化。治療后，豐度相對(duì)升高的菌屬有Faecalibacterium、普雷沃菌屬Prevotella_9、雙歧桿菌屬Bifidobacterium等；相對(duì)降低的菌屬有Lachnoclostridium、瘤胃球菌屬[Ruminococcus]_torques_group、志賀菌屬Escherichia-Shigella等。見(jiàn)圖5。

圖5 基于屬水平2組樣本腸道微生物群落熱圖

2.5 物種差異性分析

采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，對(duì)2組樣本屬水平物種進(jìn)行差異性分析，結(jié)果提示，治療后雙歧桿菌屬Bifidobacterium豐度升高，志賀菌屬Escherichia-Shigella豐度降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。見(jiàn)圖6。

圖6 基于屬水平2組樣本腸道微生物物種豐度比較

采用LEfSe多級(jí)物種差異判別分析尋找治療前后的特征性物種（LDA＞2表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[10]），LDA分值越大，代表物種豐度對(duì)差異效果影響越大。結(jié)果顯示，治療前的特征性物種，在科水平為T(mén)annerellaceae和氣球菌科Aerococcaceae，在屬水平為志賀菌屬Escherichia-Shigella、副擬桿菌屬Parabacteroides、Odoribacter、Lachnospiraceae_ FCS020_group、Eubacterium_brachy_group，其中LDA分值最高的物種為志賀菌屬Escherichia-Shigella（LDA＝4.25）。治療后的特征性物種，在目水平為雙歧桿菌目Bifidobacteriales，在科水平為雙歧桿菌科Bifidobacteriaceae、紅蝽?xiàng)U菌科Coriobacteriaceae、腸球菌科Enterococcaceae，在屬水平有雙歧桿菌屬Bifidobacterium、柯林斯菌屬Collinsella、Fusicatenibacter、腸球菌屬Enterococcus、鏈球菌屬Streptococcus，其中LDA分值最高的物種為雙歧桿菌屬Bifidobacterium（LDA＝4.17）。見(jiàn)圖7。

圖7 LEfSe分析LDA柱形圖

3 討論

FC的病理機(jī)制復(fù)雜多樣，主要包括遺傳學(xué)特征（飲食、腸道微生態(tài)等）、動(dòng)力/腸道傳輸異常、內(nèi)臟敏感性降低、腸神經(jīng)系統(tǒng)紊亂等[11]。有研究顯示，F(xiàn)C多伴有腸道菌群結(jié)構(gòu)和豐度改變。較早有學(xué)者發(fā)現(xiàn)FC患者糞便中雙歧桿菌屬和乳酸桿菌屬含量顯著降低，潛在致病菌和/或真菌增多[12]。2017年一項(xiàng)大樣本研究顯示，F(xiàn)C患者腸道菌群以擬桿菌屬、羅斯菌屬、糞球菌屬含量相對(duì)減少，普拉梭菌屬含量相對(duì)增多為特點(diǎn)[13]。

健脾理肺通便方中黃芪、白術(shù)為君，健脾肺之氣、推動(dòng)氣機(jī)升降；枳實(shí)、厚樸、虎杖為臣，通降腸腑，助運(yùn)大腸，其中虎杖既能泄?jié)嵬ń?，又無(wú)澀腸之弊；當(dāng)歸、瓜蔞、苦杏仁為佐藥，當(dāng)歸合黃芪、白術(shù)，取“血能生氣”，補(bǔ)血以助補(bǔ)氣之用，且有潤(rùn)腸通便之能，杏仁苦溫宣肺，梳理肺腸氣機(jī)，助大腸傳導(dǎo)，合瓜蔞潤(rùn)腸以增通便之效。全方通補(bǔ)兼顧，祛邪而不傷正，共奏補(bǔ)氣、泄?jié)帷⑼ū阒?。用藥劑量大體遵循《中華人民共和國(guó)藥典》[14]要求，大劑量使用白術(shù)可達(dá)補(bǔ)氣健脾通便之用[15]。有研究發(fā)現(xiàn)，高劑量白術(shù)配方顆?？娠@著升高小鼠腸道菌群中雙歧桿菌豐度，降低致病菌含量[16]。體外研究表明，黃芪水提液可有效提高雙歧桿菌含量[17]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，納米級(jí)中藥黃芪可促進(jìn)大鼠腸道內(nèi)雙歧桿菌﹑乳酸桿菌含量上升，并降低腸球菌﹑腸桿菌含量，使大鼠腸道菌群比例恢復(fù)正常[18]。臨床研究顯示，枳術(shù)黃芪湯可增加腸道厭氧菌（雙歧桿菌、乳酸）數(shù)量，降低需氧菌（腸桿菌、腸球菌）數(shù)量，進(jìn)而改善氣虛便秘患者的癥狀[19]。本研究顯示，該方對(duì)FC脾肺氣虛、胃腸氣滯證患者便秘情況具有改善作用；與治療前比較，患者治療后排便間隔縮短，排便費(fèi)力程度、大便干硬、大便黏滯程度減輕，疲憊乏力、納呆少食、神疲懶言、腹脹等癥狀改善。

治療前后門(mén)水平上組間物種差異性分析提示，擬桿菌門(mén)Bacteroidetes、厚壁菌門(mén)Firmicutes、變形菌門(mén)Proteobacteria構(gòu)成比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05）。在屬水平，熱圖提示治療后Faecalibacterium、雙歧桿菌屬Bifidobacterium、普雷沃菌屬Prevotella_9豐度上升，與既往文獻(xiàn)[20]相符。通過(guò)LEfSe多級(jí)物種差異判別分析發(fā)現(xiàn)，志賀菌屬Escherichia-Shigella是治療前的特征性菌屬，雙歧桿菌屬Bifidobacterium為治療后的特征性菌屬，提示二者可能對(duì)治療有重要意義。

雙歧桿菌是現(xiàn)已認(rèn)識(shí)到的人體重要的益生菌之一，也是人體腸道正常菌群中的優(yōu)勢(shì)菌種，粘附和定植于腸道黏膜上皮細(xì)胞后，發(fā)揮營(yíng)養(yǎng)、抗感染、免疫調(diào)節(jié)等多種作用，也對(duì)排便活動(dòng)正常進(jìn)行有重要意義。有研究通過(guò)檢測(cè)大鼠小腸肌電活動(dòng)發(fā)現(xiàn)了特定菌群與腸道動(dòng)力間的關(guān)系，Bifidobacterium bifidum可縮短遷移性肌電復(fù)合體周期[21]，促進(jìn)腸道蠕動(dòng)，推進(jìn)排便活動(dòng)。Bifidobacterium lactis HN019可增強(qiáng)腸道推進(jìn)性收縮的振幅，抑制非推進(jìn)性收縮，調(diào)節(jié)結(jié)腸運(yùn)動(dòng)模式[22]，促進(jìn)排便活動(dòng)。結(jié)腸??黏蛋白（層）被覆于腸上皮表面，是腸屏障重要組成部分，可作為潤(rùn)滑劑協(xié)助糞團(tuán)通過(guò)，而黏蛋白減少、黏液層厚度降低可見(jiàn)于便秘患者或模型動(dòng)物[5]，研究發(fā)現(xiàn)，含有Bifidobacteria的VSL#3益生菌配方可以促進(jìn)大鼠結(jié)腸??黏蛋白2??基因??表達(dá)，促進(jìn)黏蛋白??分泌[23]，推進(jìn)糞便排出。另外，雙歧桿菌的代謝產(chǎn)物中含有多種有機(jī)酸[24]，主要為乙酸、乳酸和甲酸，可刺激人體腸道壁，促進(jìn)腸道蠕動(dòng)，利于排便。同時(shí)有機(jī)酸含量升高可增加腸道內(nèi)滲透壓，利于水分由低滲透壓處進(jìn)入腸道內(nèi)高滲透壓處，產(chǎn)生通便效果[25]。

志賀菌屬Escherichia-Shigella作為治療前的特征性菌群，屬條件致病菌，主要來(lái)源于胃腸道。有研究表明，F(xiàn)C患者經(jīng)合生元治療后，屬水平上，F(xiàn)aecalibacterium、Prevotella_9豐度增加，Escherichia- Shigella豐度降低，與患者便秘癥狀改善結(jié)果一致[26]。有研究通過(guò)檢測(cè)小腸肌電活動(dòng)發(fā)現(xiàn)，該菌屬可延長(zhǎng)MMC周期，對(duì)腸道蠕動(dòng)產(chǎn)生明顯抑制作用，可導(dǎo)致排便異常[20]。

綜上，健脾理肺通便方對(duì)改善FC脾肺氣虛、胃腸氣滯證患者便秘癥狀和其他伴隨癥狀有較好效果，并對(duì)患者腸道菌群有一定調(diào)節(jié)作用，可使雙歧桿菌屬Bifidobacterium豐度升高、志賀菌屬Escherichia- Shigella豐度降低。本研究初步探索了健脾理肺通便方治療FC脾肺氣虛、胃腸氣滯證的療效及治療前后的特征性菌屬，但存在一定局限性，如樣本量過(guò)少、研究中心少，今后應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，增加研究中心，以期得出更可靠的研究結(jié)果。

[1] 李軍祥,陳誩,柯曉.功能性便秘中西醫(yī)結(jié)合診療共識(shí)意見(jiàn)(2017年)[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志,2018,26(1)：18-26.

[2] GUéRIN A, MODY R, FOK B, et al. Risk of developing colorectal cancer and benign colorectal neoplasm in patients with chronic constipation[J]. Aliment Pharmacol Ther,2014,40(1)：83-92.

[3] BASSOTTI G. Being constipated：a bad omen for your cardiovascular system?[J]. Atherosclerosis,2016,245：240-241.

[4] ZHU L, LIU W, ALKHOURI R, et al. Structural changes in the gut microbiome of constipated patients[J]. Physiol Genomics,2014, 46(18)：679-686.

[5] DIMIDI E, CHRISTODOULIDES S, SCOTT S M, et al. Mechanisms of action of probiotics and the gastrointestinal microbiota on gut motility and constipation[J]. Adv Nutr,2017,8(3)：484-494.

[6] 蔣天媛,張秋云.張秋云用健脾理肺法治療功能性便秘經(jīng)驗(yàn)[J].北京中醫(yī)藥,2019,38(10)：1015-1017.

[7] 柯美云,方秀才,侯曉華.羅馬Ⅳ功能性胃腸病——腸-腦互動(dòng)異常[M].北京：科學(xué)出版社,2017：643-644.

[8] 鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則(試行)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2002：29-31.

[9] 劉紹能,劉慧敏,李游,等.益氣潤(rùn)腸方治療功能性便秘的臨床療效觀察[J].北京中醫(yī)藥,2013,32(4)：287-289.

[10] 王海瑜,錢(qián)唐亮,康天倫,等.腸道菌群與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎寒熱證型的相關(guān)性研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2020,27(6)：44-49.

[11] LANGILLE M G, ZANEVELD J, CAPORASO J G, et al. Predictive functional profiling of microbial communities using 16S rRNA marker gene sequences[J]. Nat Biotechnol,2013,31(9)：814-821.

[12] KHALIF I L, QUIGLEY E M, KONOVITCH E A, et al. Alterations in the colonic flora and intestinal permeability and evidence of immune activation in chronic constipation[J]. Dig Liver Dis,2005, 37(11)：838-849.

[13] MANCABELLI L, MILANI C, LUGLI G A, et al. Unveiling the gut microbiota composition and functionality associated with constipation through metagenomic analyses[J]. Sci Rep,2017,7(1)：9879.

[14] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015.

[15] 章慧.生白術(shù)與枳實(shí)配伍治療慢傳輸型便秘的臨床研究[D].南京：南京中醫(yī)藥大學(xué),2017.

[16] 鄢偉倫,王帥帥,任霞.白術(shù)對(duì)小鼠腸道菌群調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].山東中醫(yī)雜志,2011,30(6)：417-419.

[17] 戴宇青,蔣月,張燕,等.黃芪對(duì)雙歧桿菌生長(zhǎng)的影響及其抗黑色素瘤作用研究[J].藥物生物技術(shù),2017,24(3)：200-205.

[18] 孫立群,梁金花,高月娟.探討納米級(jí)中藥黃芪對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸道菌群失調(diào)的調(diào)整作用[J].中國(guó)中醫(yī)急癥,2012,21(8)：1263-1265.

[19] 李巧霞.枳術(shù)黃芪湯對(duì)消渴病便秘(氣虛證)患者腸道菌群的影響[J].湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2018,35(4)：86-88.

[20] 黃林生,祝琦,高仁元,等.合生元治療慢性功能性便秘的療效及對(duì)腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué),2018,21(8)：908-913.

[21] HUSEBYE E, HELLSTR?M P M, SUNDLER F, et al. Influence of microbial species on small intestinal myoelectric activity and transit in germ-free rats[J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2001,280(3)：G368-380.

[22] DALZIEL J E, ANDERSON R C, PETERS J S, et al. Promotility action of the probiotic bifidobacterium lactis HN019 extract compared with prucalopride in isolated rat large intestine[J]. Front Neurosci,2017,11：20.

[23] CABALLERO-FRANCO C, KELLER K, DE SIMONE C, et al. The VSL#3 probiotic formula induces mucin gene expression and secretion in colonic epithelial cells[J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2007,292(1)：G315-322.

[24] SCOTT K P, MARTIN J C, DUNCAN S H, et al. Prebiotic stimulation of human colonic butyrate-producing bacteria and bifidobacteria, in vitro[J]. FEMS Microbiol Ecol,2014,87(1)：30-40.

[25] VAN DER WERF M J, VENEMA K. Bifidobacteria：genetic modification and the study of their role in the colon[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry,2001,49(1)：378-383.

[26] HUANG L S, KONG C, GAO R Y, et al. Analysis of fecal microbiota in patients with functional constipation undergoing treatment with synbiotics[J]. Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37(3)：555-563.

Efficacy ofPrescription for Functional Constipation and Effects on Intestinal Flora

JIANG Tianyuan1, ZHANG Qiuyun1, LIU Shaoneng2, ZHANG Rong2, WANG Dongfang2,ZHANG Yicong2, LIU Ruihua2, ZHOU Wenqiang2

To investigate the clinical efficacy ofPrescription in the treatment of functional constipation with TCM syndrome differentiation of spleen-lung qi deficiency and stomach-bowel qi stagnation, and effects on intestinal flora.Totally 20 patients diagnosed as FC with spleen-lung qi deficiency and stomach-bowel qi stagnation who admitted to Guang’anmen Hospital from April 2019 to December 2019 were selected as study subjects. All patients were treated withPrescription for 4 weeks. Constipation symptoms degrees and TCM syndrome scores were recorded before and after treatment. Biological analysis methods were used to carry out sequencing evaluation and species annotation analysis, community composition analysis, group difference test, LEfSe multi-level species difference discriminant analysis before and after treatment.The clinical cure rate of laxative effect was 50.00% (10/20), and the clinical cure rate of TCM was 45.00% (9/20). Compared with before treatment, TCM symptom scores were significantly reduced (<0.05). After sequencing, 1 687 426 effective sequences were obtained. After cluster analysis, there were 76 and 119 characteristic OTUs before and after treatment respectively. The characteristic species before treatment were Tannerellaceae and Aerococcaceae at the family level, and Escherichia-Shigella, Parabacteroides, Odoribacter, Lachnospiraceae_FCS020_group, Eubacterium_brachy_group at the genus level (LDA>2). Among them, the species with the highest LDA score was Escherichia-Shigella (LDA=4.25). The characteristic species after treatment were Bifidobacteriales at the order level, Bifidobacteriaceae, Coriobacteriaceae, and Enterococcaceae at the family level, and Bifidobacterium, Collinsella, Fusicatenibacter, Enterococcus, and Streptococcus at the genus level (LDA>2), among which the species with the highest LDA score was Bifidobacterium (LDA=4.17).Prescription can significantly relieve constipation in patients of FC with spleen-lung qi deficiency and stomach-bowel qi stagnation and regulate intestinal flora. The abundance of Escherichia-Shigella has decreased and the abundance of Bifidobacterium has increased after treatment, which may play an important role in the treatment.

Prescription; functional constipation; spleen-lung qi deficiency; stomach-bowel qi stagnation; intestinal flora; clinical study

R259.74

A

1005-5304(2020)09-0028-07

10.3969/j.issn.1005-5304.202001328

張秋云，E-mail：zhangqiuyun8202@aliyun.com

（2020-01-27）

（2020-03-19；編輯：季巍?。?/p>