勞軍 王楠楠

作為一種常見的中草藥，黃芪（Astragalus membranaceus）是豆科屬多年生草本植物，其藥用部分為根部，含有多糖、皂苷及酚類等成分。其中，黃芪多糖可以用來抗氧化自由基、降低血糖和延緩衰老。黃芪中的多糖可以分為水溶性多糖和水不溶性多糖，本文通過水提醇沉法提取黃芪水溶性多糖，再通過DPPH法研究其抗氧化活性。

一、材料與方法

1.材料

（1）實驗用黃芪為市售，購自于吉林大藥房，烘干后研磨成粉。無水乙醇、 1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）均為國產(chǎn)分析純。

（2）實驗所用儀器主要有TU-1901型紫外可見分光光度計（北京普系統(tǒng)儀器有限公司）、電熱恒溫干燥箱（DHG-9245A）、離心機(jī)（PDZ5-WS）。

2.方法

（1）采用水提醇沉法提取黃芪水溶性多糖。稱取100g黃芪粉，加適量的水定容于900ml，水浴加熱至70℃。維持100min之后，加75%乙醇300ml沉淀多糖物質(zhì)，3000rpm，離心10min之后即為粗多糖。

（2）DPPH法對不同濃度黃芪多糖清除自由基能力的測定。將上述黃芪多糖配成10mg/ml、25mg/ ml、50mg/ml、75mg/ml、100mg/ml的溶液，對照組加入水50μL、DPPH溶液2ml和95%乙醇950μL；實驗組分別加入不同濃度的黃芪多糖溶液50μL、DPPH溶液2ml和95%乙醇950μL；混合后搖勻，靜置30min。在分光光度計517nm處測出每組的吸光度值。把吸光度代入如下公式，從而計算出DPPH自由基的清除率（A代表實驗組，A0代表對照組）。

（3）不同pH對黃芪多糖清除自由基能力的影響。把DPPH溶液2ml和95%乙醇950μL混合成反應(yīng)液，使用NaOH和HCl分別把反應(yīng)液調(diào)制成pH為2、3、4、5、6、7、8、9的系列溶液，然后再分別加入黃芪多糖溶液50μL，從而測定對DPPH自由基的清除率。

（4）不同溫度對黃芪多糖清除自由基能力的影響。把上述反應(yīng)液分別置于4℃、20℃、50℃、80℃中10min后，再分別加入黃芪多糖溶液50μL，靜置30min，然后測定對DPPH自由基的清除率。

二、結(jié)果分析

1.不同濃度黃芪多糖清除自由基的能力

如圖1所示，隨著黃芪多糖的濃度不斷增加，自由基的清除率也不斷增加，當(dāng)濃度達(dá)到50mg/ml時，清除率可達(dá)84%；然后隨著濃度增大，自由基清除率達(dá)到了一個平臺期，這可能是由于DPPH溶液中的自由基有限，在黃芪多糖濃度為50mg/ml已基本上把自由基清除干凈，因此以下系列實驗選擇在此濃度下進(jìn)行研究。

2.不同pH及反應(yīng)溫度對黃芪多糖清除自由基能力的影響

不同pH對黃芪多糖自由基清除率的影響如圖2A所示，當(dāng)pH小于5時，隨著pH的增大清除率升高；當(dāng)pH為5時，自由基的清除率最高為57.3%；當(dāng)pH大于5時，隨著pH的增大清除率不斷下降，這極有可能是黃芪多糖的穩(wěn)定性所導(dǎo)致。不同溫度對黃芪多糖自由基清除率的影響如圖2B所示，隨著溫度的升高，自由基清除率不斷下降，由4℃的71.9%降至80℃的62.3%，這極有可能是由于隨著溫度的不斷升高，黃芪多糖化學(xué)成分不穩(wěn)定或者DPPH在高溫釋放出更多的自由基所致。

三、結(jié)論

現(xiàn)有的研究已經(jīng)證明，黃芪多糖具有一定的抗氧化能力，在清除自由基方面高于公認(rèn)的維生素C。本文對黃芪多糖的抗氧化性及各種影響條件進(jìn)行研究探討，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖對自由基的清除最佳pH為5；隨著溫度的升高，對自由基的清除能力逐漸下降。

作者簡介：勞軍（1979-），男，山東東營，博士研究生，主要研究方向：生物學(xué)。