佛山地區(qū)3193例高齡孕婦胎兒染色體核型分析

廣東省佛山市第一人民醫(yī)院（528000）禤潔甜 伍啟康

隨著社會上晚婚晚育的趨勢日趨明顯以及近年二胎政策的全面開放，年齡大于35歲的孕婦比例明顯增加，年齡因素對卵子的染色體有著明顯的負面影響，為了減少一些染色體異常的嬰兒出生，2010年我國衛(wèi)生部推出的《胎兒染色體異常的細胞遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷技術(shù)標準》中明確要求預(yù)產(chǎn)期年齡大于或等于35歲的孕婦應(yīng)進入產(chǎn)前診斷[1]。本文將來我院進行產(chǎn)前染色體核型分析的3193例高齡孕婦資料進行整理分析，了解高齡孕婦胎兒染色體異常的發(fā)生情況，為臨床遺傳咨詢提供參考數(shù)據(jù)，現(xiàn)將統(tǒng)計數(shù)據(jù)報道如下。

1 資料與方法

1.1 資料 2006年1月～2018年10月到廣東省佛山市第一人民醫(yī)院細胞遺傳室進行胎兒染色體檢查者，共3193人。進入產(chǎn)前診斷的原因首先是預(yù)產(chǎn)期年齡大于35歲，有個別孕婦合并有B超異常、唐篩高風(fēng)險、夫婦有一方染色體異常、無創(chuàng)DNA檢測提示異常、不良生育史、羊水過多過少等。

1.2 方法 孕婦在知情同意并簽署知情同意書后，行羊膜腔穿刺術(shù)，在超聲引導(dǎo)下，抽取20ml左右的羊水，分兩個無菌離心管裝，1500r/min離心8～10min，將沉淀的細胞分別接種于羊水培養(yǎng)基中，置于37攝氏度、5.5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)6天后開始觀察，當羊水細胞貼壁生長旺盛，倒置顯微鏡下見多個細胞克隆時，即可收獲細胞。按照ISCN1995標準，油鏡下計數(shù)20個細胞，分析5個以上核型，發(fā)現(xiàn)嵌合體時加大計數(shù)和分析100核型（若總的核型不足100個，則視可分析的核型數(shù)量而定）。

1.3 孕婦在知情同意并簽署知情同意書后，在超聲引導(dǎo)下，經(jīng)腹部抽取臍血1～2ml（以血紅蛋白電泳方法鑒別是否污染母親血），注入無菌肝素鋰抗凝管，分別接種在兩瓶外周血淋巴細胞完全培養(yǎng)液中，置于37攝氏度培養(yǎng)68～72小時后收獲，制片及核型分析過程同羊水。

1.4 孕婦在知情同意并簽署知情同意書后，在超聲引導(dǎo)下，經(jīng)腹部抽取絨毛組織1～2枝，無菌操作下剪碎絨毛組織，胰酶消化10～15分鐘，加入培養(yǎng)基培養(yǎng)5天后觀察，當絨毛細胞貼壁生長旺盛，倒置顯微鏡下見多個細胞克隆時，可加入秋水仙素2～4小時后收獲細胞，制片及核型分析過程同羊水。

1.5 隨訪 全部病例由專人跟蹤隨訪至產(chǎn)后6個月。

2 結(jié)果

3193例高齡孕婦染色體核型分析結(jié)果中，染色體異常99例，異常率3.1%，包括非整倍體83例（83.8%），其中21-三體60例（60.6%）、18-三體13例（13.1%）、1 3-三體5 例（5.0%），4 7,X.Y.例（4.0%），47,XYY 1例（1.0%）；結(jié)構(gòu)異常16例（16.2%），其中易位13例（13.1%），45,X[27]/46,X,i(X)(q10)[35]1例（1.0%），46,XN,tas(20;21)(pter;qter)1例（1.0%），46,XN,der(7)dup(p22.1pter)；der(9)del(9)(p22.3)1例（1.0%）。見附表。

3 討論

本研究數(shù)據(jù)顯示，3193例高齡孕婦胎兒染色體核型分析結(jié)果中異常染色體核型99例，異常率3.1%，略低于其他地區(qū)高齡孕婦胎兒染色體核型的異常率[2][3]。其中非整倍體83例，涉及的染色體包括13、18、21、X、和Y，占異常總數(shù)的83.8%，非整倍體中21-三體60例（60.6%），發(fā)生率最高；有文獻表明，絕大多數(shù)非整倍體是母源性的，發(fā)病率與孕婦高齡有關(guān)[4]，隨著女性生育年齡增大，胎兒染色體異常的發(fā)生率增加，而且以染色體非整倍體異常發(fā)生率較高[5][6]，與本研究中染色體非整倍體異常率較高一致。以上異常者均行詳細遺傳咨詢，性染色體異常者除了一例47,XYY綜合征選擇繼續(xù)妊娠外，非整倍體的胎兒全部選擇終止妊娠。

本研究組有15例結(jié)構(gòu)異常的病例，12例非同源染色體發(fā)生平衡易位，經(jīng)進一步驗證檢查，發(fā)現(xiàn)11例來源于父母，1例為新生易位；1例發(fā)生在20和21號染色體發(fā)生末端相接亦為新生結(jié)構(gòu)異常，上述兩例新生的染色體結(jié)構(gòu)異常病例胎兒宮內(nèi)發(fā)育正常，超生檢查正常，遺傳咨詢時已向孕婦詳細說明遺傳效應(yīng)及可能存在的風(fēng)險，孕婦知情后選擇繼續(xù)妊娠，出生后外觀表型正常，目前生長發(fā)育正常，并密切隨訪；有1例因有不良孕產(chǎn)史進入產(chǎn)前診斷的絨毛染色體核型為46,XX,t(7;9)(p15;p21)，同期超聲檢查未見異常，進一步檢查發(fā)現(xiàn)，母親核型為46,XX,t(7;9)(p15;p21)，7號與9號染色體平衡易位攜帶者，表型智力正常，已育有一正常九歲男孩，孕20周時進行羊水染色體核型分析并同時進行CMA的檢測，CMA檢測結(jié)果提示胎兒存在7號染色體部分重復(fù)以及9號染色體部分單體，同期B超檢查結(jié)果發(fā)現(xiàn)心臟、腎臟等多個臟器畸形，胎兒的染色體核型分析報告在結(jié)合超聲檢測報告及CMA的結(jié)果后發(fā)出的核型為46,XN,der(7)dup(p22.1pter),der(9)del(9)(p22.3)的報告，孕婦在接受遺傳咨詢被告知胎兒會出現(xiàn)多發(fā)畸形建議引產(chǎn)的情況下仍堅持選擇繼續(xù)妊娠。新生兒于2018年7月孕40周+5順產(chǎn)一女嬰，超聲提示左腎異?；芈?，考慮左腎多囊性發(fā)育不良；下肢X線檢測雙側(cè)扁平足改變、腦CT、肝膽脾超聲等未見異常；體格檢查發(fā)現(xiàn)硬腭、軟腭Ⅱ度裂，肛門息肉，肌張力稍低等，這病例還在密切跟蹤隨訪。染色體平衡易位攜帶者表型及智力發(fā)育一般正常，但在減數(shù)分裂時，因染色體的聯(lián)會與交換，會產(chǎn)生18種配子，與正常的配子受精后，會形成18種類型的合子，但只有1/18是正常，1/18為表型正常的平衡易位攜帶者，其他16種均不正常；羅氏易位攜帶者會產(chǎn)生6種配子，與正常的配子受精后，會形成6種類型的合子，但只有1/6是正常，1/6為表型正常的平衡易位攜帶者，其他4種均不正常，上述兩種染色體易位均會導(dǎo)致反復(fù)流產(chǎn)、死胎和胎兒多發(fā)畸形等[7]，因此對于夫婦其中一方為染色體結(jié)構(gòu)異常攜帶者的病例，在遺傳咨詢過程中須告知孕婦相關(guān)風(fēng)險，勸其積極進入介入性產(chǎn)前診斷。雖然傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)染色體核型分析技術(shù)至今仍然是診斷染色體畸形的金標準，但隨著分子遺傳學(xué)診斷技術(shù)的廣泛應(yīng)用，建議同時進行胎兒分子遺傳學(xué)檢測，兩種方法聯(lián)合診斷，排除胎兒染色體微缺失或微重復(fù)綜合征，并可提高診斷的準確率[8][9][10]。

附表 3193例高齡孕婦胎兒染色體異常核型

綜上所述，染色體非整倍體的發(fā)生在常見的5條染色體上，分別為13、18、21、X、和Y，其中以21-三體的發(fā)生率最高；染色體結(jié)構(gòu)異常主要源于父母，因此夫婦其中一方為染色體結(jié)構(gòu)異常攜帶者，建議直接進入產(chǎn)前診斷，有條件的地區(qū)應(yīng)同時送檢分子遺傳學(xué)的診斷，盡早發(fā)現(xiàn)染色體異常胎兒，及時終止妊娠，預(yù)防出生缺陷。