羅 焱，劉 丹

（1.三峽大學(xué)附屬仁和醫(yī)院藥學(xué)部，湖北 宜昌 443001；2.湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，武漢 430061）

高良姜素（Galangin，3,5,7-三羥基黃酮），是一種天然來(lái)源的黃酮醇類化合物，主要分布于中藥高良姜Alpinia officinarum Hance的干燥根莖中，高良姜味辛，性熱，因此有學(xué)者將高良姜用于細(xì)胞造熱證模型[1]。高良姜素藥理作用廣泛，具有清除自由基，抗氧化功能[2]，抑制P450 酶系[3]，抗致畸突變作用[4-5]，抗微生物活性[6]，抗病毒作用[7]，心肌細(xì)胞保護(hù)作用[8]?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，高良姜素具有顯著的抗腫瘤活性。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞株 人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、人肺癌細(xì)胞株A549、人胃癌細(xì)胞株MGC-803、人前列腺癌細(xì)胞PC-3、人黑色素瘤細(xì)胞株A875、人宮頸癌細(xì)胞株Hela、人肝癌細(xì)胞株HepG-2，購(gòu)于武漢大學(xué)典型培養(yǎng)物保藏中心，保存于湖北中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源與中藥化學(xué)湖北省級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

1.2 藥物與試劑 高良姜素（實(shí)驗(yàn)室自制，經(jīng)液相檢測(cè)純度＞98%），DMEM 培養(yǎng)液（美國(guó)Gibco 公司，批號(hào)：8416246），胎牛血清（FBS，美國(guó)Gibco 公司，批號(hào)：1715752），胰酶（含0.25%EDTA，上海源培生物科技有限公司，批號(hào)：G40308），DMSO（細(xì)胞級(jí)，美國(guó)Gibco 公司，批號(hào)：RNBC9664），PBS（美國(guó)Gibco 公司，批號(hào)：NAF1410），MTT（美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：2128），其他試劑未經(jīng)說(shuō)明均為分析純，試驗(yàn)時(shí)直接使用。

1.3 儀器 超凈臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司），XDS-1B 倒置顯微鏡（重慶光電儀器公司），HH-CP-01 型CO2培養(yǎng)箱（上海百典儀器有限公司），Model680 型全自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó)BIO-RAD），十萬(wàn)分之一分析天平（BP-211D，德國(guó)Sartorius 公司），超聲波清洗儀（KQ3200DE，昆山市超聲儀器有限公司），恒溫水浴鍋（金壇市易晨?jī)x器制造有限公司），離心機(jī)（大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司），高壓滅菌鍋（上海申安醫(yī)療器械廠）。

2 方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 分別取凍存好的腫瘤細(xì)胞復(fù)蘇以后，在含有10% FBS 的DMEM 培養(yǎng)液的培養(yǎng)基，37℃，5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2 d 換1 次培養(yǎng)基，細(xì)胞長(zhǎng)滿即可傳代培養(yǎng)。

2.2 MTT 法檢測(cè)高良姜素對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用 分別取生長(zhǎng)狀態(tài)良好處于對(duì)數(shù)期的細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)板將細(xì)胞密度調(diào)整為60 000/mL，接種在96 孔板，每孔100 μL。每孔加入10 μL 藥液，藥液分為6 個(gè)濃度，最終濃度為5、10、20、40、80、160 μmol/L，每個(gè)濃度設(shè)置3 個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置細(xì)胞對(duì)照組，空白調(diào)零組。在培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)24 h、48 h 后，每孔加入10 μL MTT，在培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育3～ 4 h 后在490 nm 處測(cè)定吸光度，測(cè)定前吸走舊培養(yǎng)基，然后每孔加入100 μL DMSO，試驗(yàn)重復(fù)3 次。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間比較采用單因素方差分析，以P＜ 0.05 認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

經(jīng)高良姜素處理A549、A875、HepG-2、Hela、MCF-7、PC-3 和MGC-803 共7 種腫瘤細(xì)胞，均表現(xiàn)出不同程度的增殖抑制作用。分別作用24 h、48 h 后，腫瘤細(xì)胞對(duì)高良姜素均表現(xiàn)出了不同的敏感度，腫瘤細(xì)胞顯示出了一定的體外抑制活性，并且隨著藥物濃度增加，細(xì)胞增殖抑制率隨之增加，表現(xiàn)出了濃度依賴性。對(duì)比24 h 與48 h 抑制效果，48 h 抑制效果優(yōu)于24 h，呈現(xiàn)出了時(shí)間依賴性。高良姜素對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用結(jié)果，見(jiàn)表1～表2，IC50見(jiàn)表3。

表1 高良姜素對(duì)不同腫瘤細(xì)胞作用24 h 抑制率（，n =3） %

表1 高良姜素對(duì)不同腫瘤細(xì)胞作用24 h 抑制率（，n =3） %

注：與細(xì)胞對(duì)照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

表2 高良姜素對(duì)不同腫瘤細(xì)胞作用48 h 抑制率（，n =3） %

表2 高良姜素對(duì)不同腫瘤細(xì)胞作用48 h 抑制率（，n =3） %

注：與細(xì)胞對(duì)照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

表3 高良姜素對(duì)不同腫瘤細(xì)胞作用IC50 μmol/L

4 討論

高良姜素對(duì)這7 類腫瘤細(xì)胞抑制作用中，最敏感的腫瘤細(xì)胞為MCF-7，其次為HepG-2、MGC-803、A549、Hela、PC-3，敏感度較差的為A875。結(jié)果表明：高良姜素是一個(gè)具有廣譜抗腫瘤作用的黃酮醇類化合物，不少黃酮類化合物均表現(xiàn)出了一定的抗腫瘤活性[9]，并且高良姜素對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用呈現(xiàn)出了濃度與時(shí)間依賴性。有關(guān)高良姜素抗腫瘤作用近年來(lái)研究比較廣泛，高良姜素可以通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[10-11]、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞自噬[12]、抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移[13]以及周期阻滯[14]等途徑發(fā)揮抗腫瘤作用[15]。此外，還有學(xué)者研究了高良姜素對(duì)宮頸癌細(xì)胞[16]、人胃癌細(xì)胞[17]、人肝癌細(xì)胞[18]、口腔癌細(xì)胞[19]、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤[20]的抑制作用及其作用機(jī)制，高良姜素對(duì)同一腫瘤細(xì)胞不同亞型作用效果也不盡相同。高良姜素是通過(guò)哪些途徑或者哪種作用機(jī)制對(duì)上述的腫瘤細(xì)胞發(fā)揮抑制作用需要進(jìn)一步驗(yàn)證。