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      保健食品芪黃參葉片配方工藝的篩選

      2020-11-17 02:58:36溫富春王宏艷紀(jì)鳳蘭徐惠波
      吉林中醫(yī)藥 2020年7期
      關(guān)鍵詞:血糖值保健食品高血糖

      丁 濤 ,王 鑫,溫富春,崔 健,王宏艷,陳 新,紀(jì)鳳蘭,劉 博,徐惠波*

      (1.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院,長(zhǎng)春,130012;2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué),長(zhǎng)春,130117;3.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬傳統(tǒng)診療醫(yī)院,長(zhǎng)春 130022)

      保健食品是指聲稱具有保健功能或者以補(bǔ)充維生素、礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)為目的的食品。在《“健康中國(guó)2030”規(guī)劃綱要》和《國(guó)民營(yíng)養(yǎng)計(jì)劃(2017-2030年)》中指出,針對(duì)不同人群的健康需求,應(yīng)著力發(fā)展保健食品等新型營(yíng)養(yǎng)保健食品及發(fā)展健康與食品融合的健康服務(wù)新產(chǎn)業(yè)[1-2]。當(dāng)前,我國(guó)糖尿病患者已有1.1 億人,防控形勢(shì)嚴(yán)峻。中醫(yī)學(xué)從整體出發(fā),以氣血、陰陽(yáng)、臟腑、寒熱等進(jìn)行辨治,認(rèn)為糖尿?。ㄏ剩┎∫蛑饕獮樗伢w陰虛,飲食不節(jié),復(fù)因情志失調(diào),勞欲過(guò)度[3-4],氣虛和陰虛為始動(dòng)因素,導(dǎo)致燥熱、痰濕、瘀血等;病變臟腑在肺、脾、胃、腎,以腎為主[5-10]。依據(jù)預(yù)防糖尿病的“益氣活血、滋陰補(bǔ)腎、清熱解毒”的中醫(yī)治則,從《可用于保健食品的物品名單》中,選用了補(bǔ)氣固表的黃芪,清熱涼血的生地黃,生津潤(rùn)燥,益肺和肝;培補(bǔ)元?dú)獾娜藚⑷~,活血化瘀的三七,清暑滌熱,明目;以及解毒的蔬菜苦瓜為主要原料,佐以微量的具有降血糖作用的營(yíng)養(yǎng)素添加劑——吡啶甲酸鉻,組成了輔助降血糖的保健食品——芪黃參葉片。本文通過(guò)對(duì)芪黃參葉片配方工藝的篩選、以期明確芪黃參葉片輔助降血糖作用進(jìn)行保健食品開(kāi)發(fā)。

      1 材料與方法

      1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠,SPF 級(jí),26~28 g,雌雄均用,購(gòu)自長(zhǎng)春生物制品研究所,許可證號(hào):SCXK-(吉)2011-0003;購(gòu)自湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心,許可證號(hào):SCXK(鄂)2015-0018,ICR 小鼠,體質(zhì)量19~23 g,SPF 級(jí),雄性,購(gòu)自長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司,許可證號(hào):SCXK-(吉)2011-0004。

      1.2 試劑 四氧嘧啶,sigma 產(chǎn)品,Pcode:101083179。

      1.3 芪黃參葉片配方工藝的設(shè)定 芪黃參葉片的配方原料中三七屬于傳統(tǒng)細(xì)貴藥材,臨床上常研末吞服。本配方的劑型設(shè)計(jì)為片劑,而片劑的制備工藝過(guò)程中需要加入一定量的輔料,為了制劑成型、增加制劑的穩(wěn)定性及有效地降低服用量和產(chǎn)品成本,將三七藥材作為部分輔料添加;而配方中黃芪的粉性僅次于三七,因此也將預(yù)擬定處方中部分黃芪藥材制備成粉末代替部分輔料。配方中其余原料進(jìn)行水提或水提醇沉,加入不同劑量的營(yíng)養(yǎng)素吡啶甲酸鉻,由此設(shè)計(jì)了三個(gè)配方工藝,得到配方1、配方2 和配方3。配方1:水提液濃縮成稠膏后直接加入三七粉和黃芪細(xì)粉各45 g,混勻,干燥成細(xì)粉,加吡啶甲酸鉻10.8 mg 配研,混勻即得。配方2:水提醇沉后的上清液濃縮成稠膏后加入三七粉和黃芪細(xì)粉各45 g,干燥成細(xì)粉,加吡啶甲酸鉻10.8 mg 配研,混勻即得。配方3:水提液濃縮成稠膏后直接加入三七粉和黃芪細(xì)粉各45 g,混勻,干燥成細(xì)粉,加吡啶甲酸鉻2.7 mg配研,混勻即得。

      1.4 高血糖動(dòng)物模型的制備 取適量小鼠適應(yīng)1 d 后,隨機(jī)取15 只禁食5 h,測(cè)空腹血糖,作為該批次動(dòng)物基礎(chǔ)血糖值。小鼠禁食24 h 后,靜脈注射四氧嘧啶(用前新鮮配制)50 mg/kg 造模,制備四氧嘧啶高血糖模型,7 d 后測(cè)血糖,血糖值>10 mmol/L 為高血糖模型造模成功。

      1.5 試驗(yàn)方法

      1.5.1 篩選配方工藝的動(dòng)物試驗(yàn)方法 取高血糖模型小鼠100 只,按血糖水平隨機(jī)分組,分別為:模型組,配方1 高、中、低三個(gè)劑量組,配方2 高、中、低三個(gè)劑量組,配方3 高、中、低三個(gè)劑量組(各配方均以等同的原料處方量進(jìn)行試驗(yàn),即為15.71 g 藥材量/kg、7.86 g 藥材量/kg、3.93 g 藥材量/kg。)每日灌胃1 次,連續(xù)灌胃45 d 后,禁食5 h,眼眶采血,用半自動(dòng)生化儀測(cè)定空腹血糖,比較各組動(dòng)物的血糖值。

      1.5.2 初步驗(yàn)證篩選出的配方工藝的動(dòng)物試驗(yàn)方法 取高血糖模型小鼠52 只,按照血糖水平分組,分為模型組和配方1:高(5.5 g 藥材量/kg)、中(3.67 g藥材量/kg)、低(1.83 g 藥材量/kg )組,每日1 次,連續(xù)灌胃30 d,禁食5 h 測(cè)空腹血糖,比較各組動(dòng)物的血糖值及血糖下降率,計(jì)算公式為血糖下降率=(試驗(yàn)前血糖值-試驗(yàn)后血糖值)/試驗(yàn)前血糖值×100%。

      1.5.3 芪黃參葉片對(duì)高血糖動(dòng)物模型的影響(由湖北省保健食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)出具) 取雌性高血糖模型小鼠48 只,按血糖水平隨機(jī)分為模型組、芪黃參葉片高、中、低(2.25、1.50、0.75 g/kg)三個(gè)劑量組,每組12 只。每日1 次,連續(xù)灌胃30 d,禁食5 h,用血糖儀測(cè)空腹血糖值。在給予芪黃參葉片后15 min,給予2.0 g/kg 葡萄糖溶液,取尾血測(cè)定給葡萄糖后0、0.5、2 h 血糖值,計(jì)算血糖曲線下面積。血糖曲線下面積=0.25×(0 h 血糖值+0.5 h 血糖值)+0.75×(2 h 血糖值+0.5 h 血糖值)。

      1.5.4 芪黃參葉片對(duì)正常動(dòng)物血糖的影響(由湖北省保健食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)出具) 選用雌性小鼠24 只,禁食不禁水5 h,取尾血測(cè)定血糖值,按血糖水平隨機(jī)分為陰性對(duì)照組和1 個(gè)高劑量組,每組12 只。高劑量組給予2.25 g/kg 芪黃參葉片,陰性對(duì)照組給予純水,連續(xù)灌胃30 d 后,禁食不禁水5 h,測(cè)定空腹血糖值,觀察芪黃參葉片對(duì)正常動(dòng)物空腹血糖的影響。

      2 結(jié)果

      2.1 不同工藝配方對(duì)高血糖動(dòng)物模型血糖的影響 與模型組比較,各配方灌服45 d后,配方1高、中劑量組、配方3 高劑量組能明顯抑制血糖的升高(P<0.05 或P<0.01)。由此可見(jiàn),配方1 的作用效果強(qiáng)于配方2和配方3。見(jiàn)表1.

      表1 不同工藝配方對(duì)高血糖模型動(dòng)物血糖的影響() mmol/L

      表1 不同工藝配方對(duì)高血糖模型動(dòng)物血糖的影響() mmol/L

      注:與模型組比較,# P <0.05,## P <0.01

      2.2 初步驗(yàn)證配方1 工藝的試驗(yàn)結(jié)果 調(diào)整配方1 中的劑量,即使劑量降低,動(dòng)物服用的時(shí)間縮短,配方1 高、中劑量均能明顯降低四氧嘧啶致動(dòng)物升高的血糖及血糖下降百分率。提示:可以按照配方1 的工藝進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn),制備成芪黃參葉片,送檢湖北省保健食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu),進(jìn)行保健功能驗(yàn)證。見(jiàn)表2。

      2.3 芪黃參葉片對(duì)高血糖動(dòng)物模型血糖及糖耐量的影響(由湖北省保健食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)出具) 與模型組比較,芪黃參葉片高、中劑量組小鼠空腹血糖明顯降低(P<0.01),血糖曲線下面積明顯降低(P<0.01),可見(jiàn)芪黃參葉片具有提高高血糖小鼠糖耐量的功能。見(jiàn)表3。

      表2 配方1 對(duì)高血糖模型動(dòng)物血糖的影響(,n =13)

      表2 配方1 對(duì)高血糖模型動(dòng)物血糖的影響(,n =13)

      注:與模型組比較,## P <0.01

      表3 芪黃參葉片對(duì)高血糖動(dòng)物模型血糖及糖耐量的影響(,n =12)

      表3 芪黃參葉片對(duì)高血糖動(dòng)物模型血糖及糖耐量的影響(,n =12)

      注:與模型組比較,## P <0.01

      2.4 芪黃參葉片對(duì)正常小鼠血糖的影響(由湖北省保健食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)出具) 正常動(dòng)物高劑量組小鼠空腹血糖與陰性對(duì)照組比較,無(wú)明顯差異,表明芪黃參葉片對(duì)正常小鼠空腹血糖無(wú)影響。結(jié)果見(jiàn)表4。

      表4 芪黃參葉片對(duì)正常小鼠血糖的影響(,n =12)

      表4 芪黃參葉片對(duì)正常小鼠血糖的影響(,n =12)

      2.5 芪黃參葉片的最佳工藝路線 根據(jù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果,確定芪黃參葉片最佳工藝路線為:取三七45 g 和1/3 黃芪45 g,115 ℃濕熱滅菌,負(fù)壓干燥,分別粉碎成細(xì)粉,混勻,備用;剩余2/3 黃芪90 g,生地黃90 g,人參葉45 g,苦瓜180 g 等4 味原料,加水煎煮2 次,第1 次加水,浸泡1 h,煎煮1 h,濾過(guò),第二次加水,煎煮1 h,濾過(guò),合并濾液,負(fù)壓濃縮至相對(duì)密度為1.20~1.25 的稠膏,與備用的混合細(xì)粉混合,干燥,粉碎,得中藥混合細(xì)粉,再與吡啶甲酸鉻最細(xì)粉10.8 mg配研,混勻,以80%乙醇為潤(rùn)濕劑,制成顆粒,干燥,整粒,加硬脂酸鎂,混勻,壓片,包薄膜衣,即得。

      3 討論

      中國(guó)糖尿病的發(fā)病率高達(dá)9.75%[5]。中醫(yī)學(xué)對(duì)糖尿病的認(rèn)識(shí)和治療積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)。保健食品芪黃參葉片依據(jù)益氣活血、清熱解毒、滋陰補(bǔ)腎的中醫(yī)治療“消渴”的理念組成的。方中黃芪歸肺、脾經(jīng),具有補(bǔ)氣升陽(yáng),固表止汗,利水消腫,生津養(yǎng)血,行滯通痹,托毒排膿,斂瘡生肌之功;現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)了黃芪具有降血糖作用,其活性成分主要為黃芪多糖和皂苷,基于大數(shù)據(jù)的挖掘和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的用藥規(guī)律、作用機(jī)制分析,黃芪為治療糖尿病的高頻藥物,影響了淀粉和糖代謝、環(huán)鳥(niǎo)甘酸/蛋白激酶、端粒結(jié)合蛋白R(shí)ap1、神經(jīng)活性配體/受體相互作用、磷脂酰肌醇3 激酶/蛋白激酶B 等信號(hào)通路[11-14]。生地黃歸心、肝、腎經(jīng),具有清熱涼血,養(yǎng)陰生津之功;現(xiàn)代藥理學(xué)研究及臨床分析,表明生地黃在治療糖尿病處方中也屬于高頻率用藥,具有明顯的降血糖活性,參與了TGF-β/Smads 等多條信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)[13,15]。三七歸肝、胃經(jīng),具有散瘀止血,消腫定痛之功;現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明三七及其活性成分皂苷、多糖均有明顯的治療糖尿病的作用,從調(diào)節(jié)糖代謝、抗炎、抗纖維化、抗氧化應(yīng)激等途徑抑制糖尿病的并發(fā)癥對(duì)心、腎、視網(wǎng)膜的損傷[16-17]。人參葉歸肺、胃經(jīng),補(bǔ)氣,益肺,祛暑,生津之功;人參全草入藥,葉可以補(bǔ)肺氣,根莖可以補(bǔ)脾胃之氣,現(xiàn)代研究表明人參和人參葉有相似的化學(xué)成分和藥理活性,均具有調(diào)節(jié)血糖、提高免疫、保護(hù)心肺的作用[18-19]??喙蠚w心、脾、胃經(jīng),具有清暑滌熱,明目,解毒之功;苦瓜是日常食用的蔬菜,也有藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)其具有明顯的降血糖作用,其有效成分為皂苷、多糖、多肽[20-21]。組方中人參葉與三七合用,一補(bǔ)一散,相互制約,相互為用,能益氣定痛,扶元固脫,止血化瘀,奏益氣補(bǔ)血,化瘀止痛之功。人參葉與黃芪均能補(bǔ)氣,人參大補(bǔ)元?dú)?,黃芪益氣升陽(yáng),二藥相伍,補(bǔ)元?dú)?,生精血,化氣行水,淋病日久,氣血俱虛者用之,則小便利而淋證除。人參葉與生地黃配伍使用,提高養(yǎng)陰清熱生津之力。營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充劑吡啶甲酸鉻具有胰島素樣作用,可降低血糖,配黃芪、生地黃、人參葉、三七,共同起到輔助降血糖的作用。

      早期糖尿病主要是血糖調(diào)節(jié)失常,空腹血糖和糖耐量受損,此時(shí)適當(dāng)干預(yù),可以預(yù)防和延緩糖尿病的發(fā)生[22]。保健食品注冊(cè)檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了芪黃參葉片對(duì)正常小鼠空腹血糖沒(méi)有影響,對(duì)高血糖動(dòng)物模型有顯著降血糖作用,也能降低給予外源性葡萄糖后,高血糖動(dòng)物體內(nèi)血糖曲線下面積,增加糖耐量。

      綜上所述,本研究篩選出的芪黃參葉片配方,從中醫(yī)理論和實(shí)驗(yàn)研究角度,均能顯示其具有輔助降血糖功能的作用。

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