馬明茹

山東省棗莊市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所 山東棗莊 277100

在《檢驗檢測機構(gòu)通用要求》標準中在對檢測方法的控制要求中提出 “方法驗證” 的概念，檢驗方法驗證這一程序在實驗室體系建設(shè)中非常重要，在檢驗機構(gòu)化學檢測領(lǐng)域?qū)嶒炇抑校瑢τ谝恍┓椒?，檢測人員很難做到很好的理解，同時也很難取進行驗證，以致于在掌握檢測標準的技術(shù)能力方面存在很大的不確定度，本文從方法驗證的不同視角分析闡述，以達到保證檢測結(jié)果準確、有效的目的。

1 方法驗證是檢驗實驗的基礎(chǔ)

方法驗證是實驗室通過核查，提供客觀有效證據(jù)證明滿足檢測方法規(guī)定的要求。在ISO/IEC 17025《檢測和校準實驗室能力通用要求》條款中規(guī)定 “在引入檢測或校準之前，實驗室應(yīng)證實能夠正確地運用這些標準方法”。通用要求中條款的規(guī)定就意味著實驗室在使用標準方法之前，應(yīng)經(jīng)過方法驗證或證實，并且根據(jù)實驗室的使用標準，在按照該方法檢測之前要對其實際的使用標準方法的水平進行測試，來驗證其是否達到了標準方法所需要的技術(shù)能力和水平。實驗室將這一過程程序化是保障方法能夠科學合理進行選擇的重要路徑，并確保組織實施驗證可以有序進行。

2 明確方法驗證的重要部分

根據(jù)相關(guān)標準要求規(guī)定，檢驗檢測機構(gòu)在新檢測標準投入使用前要進行方法驗證，驗證時首先需要評估實驗室所擁有的人員、設(shè)備、方法、試劑材料和檢測環(huán)境等資源條件是否滿足檢測標準要求，可以稱為環(huán)境資源驗證。其后還需要驗證實驗室是否已經(jīng)具備準確執(zhí)行該檢測標準的技術(shù)能力，可以稱為技術(shù)能力驗證。我們將環(huán)境資源驗證和技術(shù)能力驗證并列為方法驗證的左膀右臂。

對化學檢測實驗室而言技術(shù)能力驗證，而技術(shù)能力驗證首先需要完成技術(shù)實驗，并且借助技術(shù)實驗才能證實相關(guān)檢測人員完成方法的各項指標是否達標，而這些指標包括方法標準曲線、檢出限、回收率和精密度等。

而一旦實際使用當中的檢測標準改變，那么檢測人員的首要任務(wù)就是對其進行針對性的評估，隨后尋找其中具體發(fā)生改動的地方，如果整體的標準技術(shù)路線沒有發(fā)生變化，而僅是名稱、年號等發(fā)生變化，那么不需要進行其他評判就可以直接通過技術(shù)評審，投入使用，隨后只需要在第一時間向?qū)嶒炇姨峤簧暾?，隨后實驗室決定是否認可標準的改變，而如果發(fā)生新標準路線改變的情況下，那則需要對實驗室的評審人員，以及其內(nèi)部設(shè)備，檢測方法以及環(huán)境，和試劑材料重新審核，并且重新借助試驗相關(guān)技術(shù)參數(shù)來研究實驗室是否仍然具備準確執(zhí)行該新的檢測標準的技術(shù)能力。

其中定量分析方法是測定被分析物的質(zhì)量或質(zhì)量分數(shù)的分析方法，可用適當?shù)膯挝粩?shù)值表示。定性分析方法是根據(jù)物質(zhì)的化學、生物或物理性質(zhì)對其進行鑒定的分析方法。

3 方法驗證中的技術(shù)參數(shù)

實驗室化學檢測的對象按性質(zhì)可分為不得檢出的物質(zhì) ( 禁用物質(zhì)) 、無限制使用物質(zhì)、限制使用的物質(zhì) ( 已制定最高允許殘留限量物質(zhì)) 三類。最終分析實驗方案以及結(jié)果的時候，也需要針對三類物質(zhì)其自身的特性來執(zhí)行，而國際部分的組織在執(zhí)行這方面的驗證工作的時候都對其有著較高的技術(shù)要求或可參考的技術(shù)參數(shù)。

如果從論證的有效性看，或者說從方法驗證參數(shù)的科學程度來看，化學檢測的方法以及技術(shù)指標都可以分為多種，其中包括從校準曲線、回收率、精密度、準確度 ( 正確度) 試驗等。

在檢測中如對不同的樣品基質(zhì)，兩個重復樣品在三個含量水平上加以分析。建議的含量水平為空白（無分析物）、低濃度（接近方法的最低適用濃度）和高濃度（接近方法的最高適用濃度），可用標準加入法得到適當?shù)纳疃?，可理解為按照同一個方法實施檢測時，將測試樣品分成兩個或更多部分。一部分進行常規(guī)分析，其他部分在分析前加入已知量的標準分析物。而這些標準分析物的量也應(yīng)該有著一定的范圍，一般為樣品中分析物大致含量的兩倍到五倍，當然也可以按照既定方法定量限，或是容許限等等均可以來以此計算標準分析物的量。而如果想要衡量方法的回收率，那么可以采用標準添加法，不過這可以受限于樣品內(nèi)部的基質(zhì)以及分析物的實際含量，當然這種方法也可以用于其他方面的評估，例如在定量限、容許限等水平上的正確度。

（1）方法的校準曲線。實驗室首先要找準檢測方法校準曲線的數(shù)學方程，并且劃分好校準曲線的工作范圍，這樣才能使得其濃度有一個合適的范圍，使得濃度在一個數(shù)量級內(nèi)，至少作5 個點 ( 不包括空白)。對于篩選方法 ( 即指定性方法或半定量方法)，方法線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0．98，對于確證方法( 即能準確定量的方法)，方法線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0．99。測試溶液中被測組分濃度必須在校準曲線的線性范圍內(nèi)。

（2）方法的回收率。被測物的濃度水平實際上是會影響到回收率的實驗結(jié)果的，有可能會導致結(jié)果偏高，或是偏低，這就要求在實際的方法回收驗證實驗時，一些禁用的物質(zhì)，以及回收率的方法測定應(yīng)當分三水平，分別是低限 (LOD)、兩倍方法測定低限和十倍方法測定；而后針對已制定最高殘留限量MRL 的最大化學殘留量，回收率應(yīng)在方法LOD、MRL、選一合適點進行三水平試驗；對于未制定MRL 的，回收率應(yīng)在方法LOD、常見限量指標、選一合適點進行三水平試驗。每一水平做雙平行。

（3）方法的精密度。方法的精密度于測試人員的穩(wěn)定水平相掛鉤，這也是其在實際測試過程當中所能獲得測試結(jié)果的一種體現(xiàn)，在實際的測試以及驗證過程當中，對于禁用物質(zhì)，精密度試驗也應(yīng)該分為三個量級，分別是LOD、兩倍LOD 和十倍LOD；對于已制定MRL 的，精密度試驗的范圍為LOD、MRL，還有選一適合的點進行測試，而針對部分沒有制定MRL 的，精密度試驗發(fā)范圍應(yīng)該為LOD、常見限量指標、選一合適點三個水平進行。每一濃度水平的重復測定次數(shù)＞6。精密度測試的結(jié)果可通過實驗室內(nèi)的變異系數(shù)（CV= 標準偏差/ 平均值）來表達，標準偏差s 可通過貝塞爾Bessel 公式計算得到，并可參考實驗室內(nèi)變異系數(shù)表給出的數(shù)據(jù)進行精密度結(jié)果的評價。

（4）方法的準確度。方這個準確度同時也叫做準確度，其代表的是對于視線樣品進行重復的分析研究，來測定其含量，并且最終借助校正來得出測定值于實際值之間的差距。