基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討行氣活血通絡(luò)方治療神經(jīng)根型頸椎病的作用機制

賀 豐，朱立國*，趙 赫，付玲玲，李學(xué)朋

（1.中國中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院，北京 100102；2.清華大學(xué)材料學(xué)院，北京 100084；3.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院，北京 100700）

神經(jīng)根型頸椎病是一種較為常見的神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙性疾病,常由頸部脊髓神經(jīng)根受到機械壓迫或因神經(jīng)根周圍組織受損釋放炎性因子刺激導(dǎo)致,如間盤退變椎間孔變窄、椎間關(guān)節(jié)活動度減小、鉤突關(guān)節(jié)增生等［1］。Radhakrishnan等［2］研究表明50～54歲年齡組每10萬人的年發(fā)病率最高可達202.9,隨著電腦、智能手機的普及和伏案工作時間增長,發(fā)病率逐漸增高,而且發(fā)病年齡逐漸年輕化。中醫(yī)學(xué)認為本病屬于“項痹” 范疇,內(nèi)因氣血不足,不能濡養(yǎng)筋骨,外加勞累,起居不慎,風(fēng)寒濕邪入侵,壅閉經(jīng)絡(luò),導(dǎo)致氣血凝滯、經(jīng)絡(luò)不通而產(chǎn)生疼痛、麻木等癥狀［3］。神經(jīng)根型頸椎病以上肢疼痛,受累神經(jīng)根支配區(qū)域感覺異常、肌力減退甚至肌肉萎縮為典型癥狀,嚴重影響人們的生活質(zhì)量。其治療方法主要以非手術(shù)療法為主,西醫(yī)包括頸部制動、牽引、理療、抗炎、神經(jīng)根脫水、硬膜外激素注射等［4］。而中醫(yī)治療神經(jīng)根型頸椎病具有獨特優(yōu)勢,包括針灸、手法、拔罐、中藥外敷、小針刀、中藥方劑辨證施治等。其中,辨證后使用方劑治療神經(jīng)根型頸椎病是一種別具特色且效果良好的方法。

行氣活血通絡(luò)方,是中國中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院院內(nèi)制劑,由三七、川芎、延胡索、秦艽、獨活、桂枝、葛根、威靈仙、當(dāng)歸、白芍、地龍11味中藥組成,具有活血通絡(luò)、行氣止痛之效。其中,川芎、延胡索活血行氣、散郁止痛共為君藥。白芍,養(yǎng)血合營、緩急止痛；當(dāng)歸、地龍補血活血、通經(jīng)活絡(luò),主肢體麻木,半身不遂；桂枝、葛根溫經(jīng)通脈,善治頸項肢節(jié)強痛,上5味共為臣藥。秦艽、威靈仙、獨活祛風(fēng)除濕,和血舒筋,通絡(luò)止痛,主風(fēng)濕痹痛,肢麻筋攣,頭項難伸共為佐藥；三七活血消腫、祛瘀止痛為使藥。諸藥合用化瘀行氣、通絡(luò)止痛,治療神經(jīng)根型頸椎病臨床效果顯著。目前的研究多通過臨床療效或動物實驗探討行氣活血通絡(luò)方作用機制,對其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及分子水平作用機制等方面研究尚不明確。并且由于復(fù)方中藥活性成分多樣,可作用于不同靶點,所以用常規(guī)方法來描述此方治療神經(jīng)根型頸椎病藥理學(xué)機制則顯得比較困難。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于藥物通過“多靶點、多途徑、多通路” 發(fā)揮作用的理念而發(fā)展起來的新方法［5］,它可整合各種藥物、蛋白、基因等數(shù)據(jù)庫,采用生物信息學(xué)技術(shù)分析和構(gòu)建藥物-靶點-疾病的網(wǎng)絡(luò)相互作用模型,探索藥物發(fā)揮作用機制,其整體性、系統(tǒng)性的特點非常適合應(yīng)用于中藥及中藥復(fù)方的研究。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對行氣活血通絡(luò)方治療神經(jīng)根型頸椎病的機制進行探討,并為中藥復(fù)方的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 行氣活血通絡(luò)方所含成分的收集與篩選 行氣活血通絡(luò)方由11味中藥組成,分別是三七、川芎、延胡索、秦艽、獨活、桂枝、葛根、威靈仙、當(dāng)歸、白芍、地龍。通過國內(nèi)外文獻調(diào)研和中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫分析平臺TCMSP （https：//tcmspw.com/tcmsp.php）收集以上11味中藥的活性成分,因地龍未在TCMSP中收錄,因此通過BATMAN-TCM （http：//bionet.ncpsb.org/batman-tcm/）數(shù)據(jù)庫檢索其活性成分,然后將地龍活性成分輸入TCMSP數(shù)據(jù)庫進行檢索,最后以口服生物利用度（oral bioavailability,OB）≥30% 和類藥性 （drug-likeness,DL）≥0.18［6］為限定條件對所有活性成分進行篩選。

1.2 行氣活血通絡(luò)方成分靶點預(yù)測 通過TCMSP數(shù)據(jù)庫檢索“1.1” 項中篩選出的活性成分的相關(guān)蛋白靶點,由于檢索到的蛋白靶點存在命名不規(guī)范的問題,因此使用UniProt數(shù)據(jù)庫（https：//www.uniprot.org/）中的UniprotKB搜索功能,通過輸入靶點名稱并設(shè)定物種為人,將檢索到的所有靶點蛋白校正為其官方基因名稱（Official Symbol）。

1.3 神經(jīng)根型頸椎病相關(guān)基因靶點的篩選 通過GeneCards數(shù)據(jù)庫 （http：//www.genecards.org,Version 4.5.0）、OMIM數(shù) 據(jù) 庫 （https：//omim.org/）和DisGeNET數(shù)據(jù)庫（http：//www.disgenet.org）檢索與神經(jīng)根型頸椎病相關(guān)基因。因為神經(jīng)根型頸椎病屬于周圍神經(jīng)損傷,為了使結(jié)果更加全面準確,因此分別使用檢索詞peripheral nerve injury、cervical radiculopathy進行檢索,獲取與神經(jīng)根型頸椎病相關(guān)基因。

1.4 行氣活血通絡(luò)方活性成分靶點與神經(jīng)根型頸椎病相關(guān)靶點相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析 利用R語言韋恩圖將行氣活血通絡(luò)方活性成分靶點基因與神經(jīng)根型頸椎病相關(guān)基因進行合并,交集的部分很有可能是行氣活血通絡(luò)方活性成分治療神經(jīng)根型頸椎病的靶點基因。將交集基因及與之對應(yīng)化合物導(dǎo)入Cytoscape 3.6.0軟件構(gòu)建行氣活血通絡(luò)方活性成分-作用靶點網(wǎng)絡(luò),并對網(wǎng)絡(luò)進行分析,保存網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果。在網(wǎng)絡(luò)中,用節(jié)點（node）表示成分和靶點,用邊（edge）表示成分與靶點之間的相互作用。

1.5 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析 STRING數(shù)據(jù)庫（https：//string-db.org,Version 10.5）［7］是一個收集了大量蛋白相互作用關(guān)系的數(shù)據(jù)庫,其中包含了經(jīng)過實驗驗證和通過生物信息學(xué)方法預(yù)測得到的數(shù)據(jù),共涉及9 643 763個蛋白,1 380 838 440個相互作用。將行氣活血通絡(luò)方活性成分作用的蛋白靶點導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫,限定物種為人,獲取蛋白相互作用關(guān)系,結(jié)果保存成TSV格式,導(dǎo)入Cytoscape 3.6.0軟件繪制相互作用網(wǎng)路。首先對此蛋白互作網(wǎng)絡(luò)進行總體分析,然后使用Cytoscape 3.6.0軟件中的cytohubba插件確定最重要的10個蛋白互作關(guān)系,計算方法的選擇最大團中心性（maximal clique centrality,MCC）［8］。

1.6 GO分析與KEGG通路分析 Metascape數(shù)據(jù)庫（http：//metascape.org）可為大規(guī)模的基因或蛋白提供系統(tǒng)綜合的生物功能注釋信息,能夠找出最顯著富集的生物學(xué)注釋［9］。將行氣活血通絡(luò)方的作用靶點導(dǎo)入Metascape數(shù)據(jù)庫,Input as species和Analysis as species均設(shè)置為H.sapiens,選擇自定義分析（Custom Analysis）中的富集（Enrichment）,分別對GO Biological Processes、GO Molecular Functions、GO Cellular Components、KEGG Pathway進行富集分析（Enrichment Analysis）,保存結(jié)果,篩選排名靠前條目。GO分析用GraphPad Prism 7.0軟件繪制條形圖、KEGG Pathway,用R語言繪制氣泡圖。

2 結(jié)果

2.1 行氣活血通絡(luò)方成分的收集與篩選 通過TCMSP數(shù)據(jù)庫,以O(shè)B≥30%和DL≥0.18為參數(shù)收集行氣活血通絡(luò)方中符合條件的活性成分,結(jié)果三七8種、川芎8種、延胡索49種、秦艽2種、獨活9種、桂枝7種、葛根4種、威靈仙7種、當(dāng)歸2種、白芍13種；地龍在BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫中檢索到8種活性成分,代入TCMSP數(shù)據(jù)庫后,滿足篩選條件的1種。所有化合物去重后共得到93種活性成分。

2.2 行氣活血通絡(luò)方靶點預(yù)測 通過TCMSP數(shù)據(jù)庫檢索行氣活血通絡(luò)方所含93種活性成分,結(jié)果得到出784個靶點,其中三七54個、川芎45個、延胡索215個、秦艽40個、獨活92個、桂枝52個、葛根69個、威靈仙53個、當(dāng)歸70個、白芍90個、地龍4個。去重后共得到250個靶點,通過UniProt數(shù)據(jù)庫將靶點蛋白轉(zhuǎn)換為官方名稱（Officical Symbol）。

2.3 神經(jīng)根型頸椎病相關(guān)基因靶點篩選 在數(shù)據(jù)庫中以peripheral nerve injury、cervical radiculopathy進行檢索后,分別獲得5 025、79個相關(guān)基因靶點,刪除重復(fù)后共得到5 041個神經(jīng)根型頸椎病相關(guān)基因。

2.4 行氣活血通絡(luò)方活性成分-作用靶點網(wǎng)絡(luò)互作 將“2.2” “2.3” 項中的基因進行映射對比,發(fā)現(xiàn)213個共同基因,見圖1,推測這些可能為行氣活血通絡(luò)方治療神經(jīng)根型頸椎病的基因靶點。將交集基因靶點與對應(yīng)活性成分輸入Cytoscape 3.6.0軟件構(gòu)建行氣活血通絡(luò)方活性成分-作用靶點網(wǎng)絡(luò),見圖2。圖中共涉及303個節(jié)點,1 239條邊,其中菱形節(jié)點代表行作用靶點,圓形代表活性成分,邊代表活性成分和作用靶點間的相互關(guān)聯(lián)。從圖中可看出同一靶點可對應(yīng)于不同的活性成分,同一活性成分也可對應(yīng)于不同的靶點,體現(xiàn)了行氣活血通絡(luò)方多成分、多靶點的作用特點。其中川芎、延胡索共有成分槲皮素（quercetin/133個靶點）,白芍獨有成分山柰酚（kaempferol/52個靶點）,葛根獨有成分芒柄花黃素（formononetin/34個靶點）是作用靶點最多3種化合物。β-谷甾醇（beta-sitosterol/33個靶點）作用靶點數(shù)目排名第4,但當(dāng)歸、白芍、獨活、三七、秦艽、桂枝、葛根、威靈仙8味藥中都含有此種成分。因此,上述4種化合物可能是此方劑中比較重要的活性成分。

2.5 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)結(jié)果見圖3,圖中節(jié)點表示蛋白,邊表示蛋白之間的關(guān)聯(lián),共涉及210個節(jié)點,3 721條邊（其中ADH1C、ATP5F1B未在數(shù)據(jù)庫中找到,EIF6與其他蛋白沒有相互作用,這3個蛋白不在相互作用網(wǎng)絡(luò)中體現(xiàn)）。使用cytohubba插件中MCC方法計算后,確定最重要的10個蛋白互作關(guān)系,結(jié)果見圖4。

圖1 行氣活血通絡(luò)方化合物相關(guān)靶點與神經(jīng)根型頸椎病相關(guān)靶點映射

圖2 行氣活血通絡(luò)方“活性成分-靶點” 相互作用網(wǎng)絡(luò)圖

圖3 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)

2.6 基因功能分析 使用Metascape數(shù)據(jù)庫對行氣活血通絡(luò)方活性成分對應(yīng)靶點進行GO分析,并篩選靠前的生物學(xué)過程、分子功能和細胞組分,用GraphPad Prism 7.0軟件繪圖,見圖5～7。

圖4 10個最重要的蛋白互作關(guān)系

其中BP分析（圖5）中排名靠前的有response to toxic（對有毒物質(zhì)的反應(yīng),65個靶點/30.66%）、response to inorganic substance （對無機物的反應(yīng),61個靶點/28.77%）、cellular response to nitrogen compound （細胞對氮化合物的反應(yīng),59個靶點/27.83%）、cellular response to organic cyclic compound （細胞對有機環(huán)狀化合物的反應(yīng),56個靶點/26.42%）、response to lipopolysaccharide （對脂多糖的反應(yīng),44個靶點/20.75%）等生物學(xué)過程。MF分析（圖6）排名靠前的的有neurotransmitter receptor activity （神經(jīng)遞質(zhì)受體活性,22個靶點/10.38%）、kinase binding （激酶結(jié)合,39個靶點/18.4%）、G protein-coupled amine receptor activity（G蛋白偶聯(lián)胺受體活性,15個靶點/7.08%）、transcription factor binding （轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合,35個靶點/16.51%）、protein domain specific binding （蛋白域特異性結(jié)合,34個靶點/16.04%）等分子功能。CC分析（圖7）排名靠前的有membrane raft （膜筏,31個靶點/14.62%）、postsynaptic membrane （突觸后膜,26個靶點/12.26%）、dendrite （樹突,32個靶點/15.09%）、receptor complex （受體復(fù)合物,26個靶點/12.26%）、vesicle lumen （囊腔,19個靶點/8.96%）等細胞組分。

圖5 GO分析生物學(xué)過程

圖6 GO分析分子功能

圖7 GO分析細胞組分

2.7 KEGG通路分析 使用Metascape數(shù)據(jù)庫對行氣活血通絡(luò)方治療神經(jīng)根型頸椎病的213個靶點進行KEGG通路分析,根據(jù)LogP值篩選靠前的10個代表性通路見圖8。圖中節(jié)點的顏色從綠到紅反應(yīng)了LopP值從大到小,節(jié)點從小到大反應(yīng)了相關(guān)基因數(shù)量的從少到多。結(jié)果顯示,行氣活血通絡(luò)方治療神經(jīng)根型頸椎病的機制主要涉及AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications、Pathways in cancer、TNF signaling pathway、Neuroactive ligand-receptor interaction、HTLV-I infection、MAPK signaling pathway、Platinum drug resistance、cAMP signaling pathway、NF-kappa B signaling pathway、Amoebiasis等通路。因此推測行氣活血通絡(luò)方治療神經(jīng)根型頸椎病可能與上述通路關(guān)系密切。

3 討論

神經(jīng)根型頸椎是頸椎病分型中的一種,以放射性上肢疼痛麻木或上肢感覺、運動功能障礙為主要表現(xiàn)。中藥治療頸椎病一般采取祛風(fēng)散寒、活血行氣、化痰祛濕、補益肝腎、通絡(luò)止痛等治療方法。行氣活血通絡(luò)方,是中國中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院院內(nèi)協(xié)定方,由三七、川芎、延胡索、秦艽、獨活、桂枝、葛根、威靈仙、當(dāng)歸、白芍、地龍11味中藥組成。方中川芎、延胡索活血行氣、散郁止痛共為君藥。白芍,合營止痛；當(dāng)歸、地龍活血通絡(luò)；桂枝、葛根溫經(jīng)通脈,上5味共為臣藥。秦艽、威靈仙、獨活祛風(fēng)除濕,通絡(luò)止痛,共為佐藥；三七活血消腫、祛淤止痛為使藥。諸藥合用活血行氣、通絡(luò)止痛,臨床采用此方加減治療神經(jīng)根型頸椎病具有良好療效,以此方為基礎(chǔ)化裁出的頸痛顆粒,已經(jīng)批準上市用于治療神經(jīng)根型頸椎?。?0］。但行氣活血通絡(luò)方治療神經(jīng)根型頸椎病的藥理學(xué)機制尚不明確。

圖8 行氣活血通絡(luò)方治療神經(jīng)根型頸椎病相關(guān)靶點KEGG通路富集

本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法從行氣活血通絡(luò)方所含11味中藥中,篩選出93種活性成分,250個基因靶點,其中有213個基因與神經(jīng)根型頸椎病相關(guān),構(gòu)建行氣活血通絡(luò)方活性成分-作用靶點網(wǎng)絡(luò)圖,有303個節(jié)點,1 239條邊。顯示了行氣活血通絡(luò)方多成分、多靶點共同作用治療神經(jīng)根型頸椎病的特點。其中槲皮素是行氣活血通絡(luò)方中君藥川芎、延胡索的共有成分,擁有133個作用靶點在所有化合物中排名第1。臣藥白芍的化合物山柰酚、葛根的化合物芒柄花黃素分別作用于52、44個靶點位列第2、3位,間接說明了君、臣藥在此方中的重要作用。而第4位的β-谷甾醇（beta-sitosterol/33個靶點）是當(dāng)歸、白芍、獨活、三七、秦艽、桂枝、葛根、威靈仙8味中藥的共有化合物,說明此方劑組合可產(chǎn)生一定的協(xié)同作用。以上兩點可反應(yīng)此方配伍較為科學(xué)合理。槲皮素是一種廣泛存在于自然界的天然黃酮類化合物,目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)它具有多重生物活性,如抗氧化、抗病毒、抗炎作用［11］。Lazo-Gomez等［12］研究表明,槲皮素可通過活化sirtuin 1 （去乙酰化酶）防止慢性興奮毒性刺激引起的脊髓運動神經(jīng)元退行性變。Chen等［13］研究表明槲皮素可通過調(diào)節(jié)與再生和營養(yǎng)支持有關(guān)的基因的表達,如增加環(huán)磷酸腺苷表達使神經(jīng)細胞在外周神經(jīng)軸突再生中的生長激活,促進軸突再髓化,運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度加快,從而促進小鼠坐骨神經(jīng)擠壓損傷后運動和感覺功能的恢復(fù)。山柰酚是一種黃酮類化合物,具有明顯的抗氧化和抗炎活性。Su等［14］研究表明,山柰酚通過抑制NADPH氧化酶和保護SHP-2 （酪氨酸磷酸酶）免受氧化失活抑制膠原誘導(dǎo)的血小板活化,這說明山柰酚具有預(yù)防和治療血栓性血管疾病的治療潛力。農(nóng)藥毒死蜱（Chlorpyrifos,CPF）,是一種潛在的食品污染物,會引起神經(jīng)毒性,Hussein等［15］研究表明,山柰酚可能通過調(diào)節(jié)GSK3β-Nrf2 （糖原合成酶激酶3β-核因子E2相關(guān)因子）信號通路,抑制GSK3β 介導(dǎo)基因表達和誘導(dǎo)Nrf2在大腦組織表達,提高抗氧化酶活性和乙酰膽堿酯酶活性,起到對神經(jīng)元損傷的保護作用。芒柄花黃素可抑制腦內(nèi)炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激,從而起到對腦外傷大鼠的神經(jīng)保護作用［16］。β-谷甾醇廣泛地存在于多種植物的細胞膜中,藥理活性多樣,研究表明,β-谷甾醇可調(diào)控多種細胞信號通路,包括細胞周期、凋亡、增殖、存活、侵襲、血管生成、轉(zhuǎn)移和炎癥［17］。

蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)結(jié)果顯示行氣活血通絡(luò)方作用于神經(jīng)根型頸椎病的靶點間存在著復(fù)雜的交互關(guān)系,而不是獨立的發(fā)揮作用,網(wǎng)絡(luò)中共有210個節(jié)點,3 721條邊,經(jīng)過計算后發(fā)現(xiàn)JUN （轉(zhuǎn)錄因子AP-1）、VEGFA （血管內(nèi)皮生長因子A）、TP53 （腫瘤抑制蛋白）、AKT1 （蛋白激酶B）、MAPK1 （絲裂原激活的蛋白激酶1）、BCL2 （細胞凋亡相關(guān)蛋白）、PIK3CG （磷脂酰肌醇3激酶）、IL-6 （白細胞介素6）、PTGS2 （前列腺素內(nèi)過氧化物合酶）、MMP9 （基質(zhì)金屬蛋白酶9）等可能是行氣活血通絡(luò)方治療神經(jīng)根型頸椎病的主要靶蛋白。GO富集分析發(fā)現(xiàn),行氣活血通絡(luò)方治療神經(jīng)根型頸椎病主要涉及毒性反應(yīng)、無機物反應(yīng)、細胞對氮化合物的反應(yīng)、細胞對有機循環(huán)化合物的反應(yīng)、脂多糖反應(yīng)、細胞對藥物的反應(yīng)、細胞因子介導(dǎo)的信號通路、氧水平反應(yīng)、類固醇激素反應(yīng)、活性氧代謝等生物學(xué)過程；涉及神經(jīng)遞質(zhì)受體的活性、激酶結(jié)合、G蛋白偶聯(lián)胺受體活性、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合、蛋白異構(gòu)化活性、核受體活性、突觸后神經(jīng)遞質(zhì)受體活性、受體調(diào)節(jié)活性、蛋白酶結(jié)合等分子功能；涉及膜筏、突觸后膜、樹突、受體復(fù)合體、囊泡腔、轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合體、胞質(zhì)核周區(qū)、細胞頂部、樹突膜等細胞組分,是一個復(fù)雜的過程。

通過KEGG生物途徑富集分析發(fā)現(xiàn),有10條信號通路被顯著富集。其中,腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor,TNF）信號通路,可誘導(dǎo)多種細胞內(nèi)信號傳導(dǎo),包括凋亡、細胞存活、炎癥和免疫Rothman等［18］研究發(fā)現(xiàn)大鼠頸背根神經(jīng)節(jié)受壓可產(chǎn)生疼痛,而TNF-α 抗體可阻斷相關(guān)信號傳導(dǎo)提高痛閾。NF-κB （nuclear factor-kappa B,NF-κB）是一個轉(zhuǎn)錄因子家族的通稱,可調(diào)控涉及免疫、炎癥和細胞存活的基因。Suzuki等［19］發(fā)現(xiàn)使用NF-κB拮抗劑可明顯抑制大鼠受壓背根神經(jīng)節(jié)中轉(zhuǎn)錄激活因子3 （ATF-3）及降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）基因表達,從而提高大鼠的機械性痛閾和熱覺痛閾,同時也證明NF-κB可能是腰椎間盤突出引起的坐骨神經(jīng)痛明確的治療靶點。晚期糖基化終末產(chǎn)物與其受體（AGEs-RAGE）是一組特異性組合,AGEs的產(chǎn)生和蓄積是導(dǎo)致神經(jīng)、血管等多組織器官損傷的重要病理基礎(chǔ)［20］。AGEs與RAGE相互作用啟動一系列受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,激發(fā)多種細胞因子的形成與釋放,導(dǎo)致機體神經(jīng)、血管的病理改變。AGEs與RAGE的相互作用還可導(dǎo)致氧化應(yīng)激的發(fā)生,進而激活NF-κB。NF-κB的激活可以增加黏附因子、內(nèi)皮素和促凝血組織因子等基因的表達,使血流調(diào)節(jié)受損,導(dǎo)致神經(jīng)內(nèi)膜血流灌注減少［21］。神經(jīng)活性配體-受體相互作用是質(zhì)膜上所有與細胞內(nèi)外信號通路相關(guān)的受體和配體的集合。涉及環(huán)境信息處理,信號分子間相互作用等功能。人T細胞白血病病毒1型（HTLV-1）是一種致病性逆轉(zhuǎn)錄病毒,除了成人T細胞白血病/淋巴瘤（ATL）有關(guān),它還與非腫瘤性慢性炎性疾病密切相關(guān),Tax是此通路中一種病毒調(diào)控蛋白和轉(zhuǎn)錄輔助因子,可干擾與抗凋亡或細胞增殖相關(guān)的多個信號通路,Tax調(diào)控信號通路也可涉及到它的結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子如NF-κB等［22］。絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）級聯(lián)是一個高度保守的模塊,參與細胞的增殖、分化和遷移等多種功能。Obata等［23］研究表明MAPK在初級傳入神經(jīng)的活化作用,可能與炎癥誘導(dǎo)的神經(jīng)根病變的病理生理機制相關(guān),初級傳入神經(jīng)中的MAPK通路,可能是背根神經(jīng)節(jié)體細胞附近由炎性引起的神經(jīng)病理性疼痛潛在的藥物干預(yù)靶點。環(huán)腺苷酸信號通路（cAMP signaling pathway,cAMP）是最常見、最普遍的第二信使之一,它的形成是由腺苷酰環(huán)化酶（AC）在G蛋白偶聯(lián)受體（GPCRs）被激素、神經(jīng)遞質(zhì)等信號分子配體連接后激活而促進的。細胞內(nèi)cAMP水平的改變會影響細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,進而調(diào)節(jié)蛋白活性、基因表達和細胞功能,進而調(diào)節(jié)細胞代謝、生長、分化和凋亡［24］。據(jù)報道［25］,神經(jīng)組織中cAMP水平的升高不僅有助于減少SCI后的繼發(fā)性病理反應(yīng),還能促進神經(jīng)再生。Yang等［26］研究表明,補陽還五湯聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細胞移植對脊髓損傷后紅核神經(jīng)元的神經(jīng)保護具有協(xié)同作用,其機制可能與上調(diào)cAMP水平、激活cAMP/CREB/RhoA信號通路、促進神經(jīng)生長因子表達有關(guān)。此外癌癥、阿米巴病、鉑耐藥3個信號通路也富集了較豐富的基因,這3條通路參與細胞的增殖、分化、運動、遷移,還與炎性反應(yīng)、血管的生成、細胞凋亡等多種生物功能相關(guān)。因此推斷行氣活血通絡(luò)方可能通過以上通路發(fā)揮治療神經(jīng)根型頸椎病的作用。

綜上所述,本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對行氣活血通絡(luò)方治療神經(jīng)根型頸椎病的機制進行探討,發(fā)現(xiàn)此方包含多種活性成分,涉及多種信號通路和生物過程,體現(xiàn)了“多成分-多靶點-多途徑發(fā)揮作用的特點。以期為研究行氣活血通絡(luò)方治療作用的分子機制及藥理學(xué)機制奠定基礎(chǔ),同時也為其他復(fù)方中藥的研究提供思路和方法。