養(yǎng)殖對(duì)蝦的主要病毒性疾病及其免疫防控措施（5）

○張喜貴孟長(zhǎng)明陳昌福

（1河南省新鄉(xiāng)市康大消毒劑有限公司，河南新鄉(xiāng)453700；2華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，武漢430070）

3.2 細(xì)胞免疫

甲殼動(dòng)物的血淋巴細(xì)胞既是細(xì)胞免疫應(yīng)答的承擔(dān)者，也是體液免疫因子的提供者。當(dāng)病原微生物突破機(jī)體第一道防御屏障進(jìn)入血淋巴后，則刺激體內(nèi)血淋巴細(xì)胞發(fā)生一系列的細(xì)胞免疫應(yīng)答。首先，血淋巴細(xì)胞通過(guò)吞噬、包囊、形成結(jié)節(jié)等防御反應(yīng)清除血竇中入侵的病原微生物，其次它們通過(guò)釋放胞漿凝結(jié)因子參與傷口的愈合。此外，血淋巴細(xì)胞還參與合成一些重要的體液免疫因子。

（1）吞噬作用

吞噬作用在動(dòng)物界普遍存在，低等單細(xì)胞動(dòng)物通過(guò)吞噬作用攝取食物，高等多細(xì)胞動(dòng)物的吞噬作用則是吞噬消化和清除一切異物的重要手段。目前己證實(shí)甲殼動(dòng)物的血淋巴細(xì)胞具有吞噬異物能力，其吞噬過(guò)程是血淋巴細(xì)胞首先接觸異物，通過(guò)辨別其表面特征結(jié)構(gòu)識(shí)別異物；然后在粘附分子作用下血淋巴細(xì)胞與異物粘附，相互凝集形成細(xì)胞團(tuán)；最后血淋巴細(xì)胞伸出偽足或直接形成凹陷將異物吞入形成吞噬泡，細(xì)胞內(nèi)溶酶體釋放水解酶或產(chǎn)生活性氧對(duì)異物進(jìn)行殺死、消化和清除。與此同時(shí)，常常伴隨著血細(xì)胞解體。

甲殼動(dòng)物的粘附分子粘附分子是由細(xì)胞產(chǎn)生，存在于細(xì)胞表面或細(xì)胞外基質(zhì)中，通過(guò)存在于細(xì)胞或細(xì)胞間基質(zhì)上的配體使細(xì)胞與細(xì)胞間，或細(xì)胞與基質(zhì)間相互結(jié)合的一類分子。根據(jù)粘附分子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)不同，脊椎動(dòng)物體內(nèi)的粘附分子分為整合素家族、選擇素家族、鈣粘蛋白家族和免疫球蛋白家族四類。在蝲蛄、斑節(jié)對(duì)蝦、螯蝦、小龍蝦和岸蟹等多種甲殼動(dòng)物中也發(fā)現(xiàn)了一些粘附分子，主要是整合蛋白和過(guò)氧化物酶家族的Peroxinectin分子。Peroxinectin分子最初是由Johansson 和 Soderhall（1988）從軟尾太平蝲蛄血細(xì)胞分泌物中分離純化獲得，經(jīng)cDNA克隆及序列分析表明，此蛋白與其它動(dòng)物體內(nèi)的過(guò)氧化物酶家族中蛋白質(zhì)極其相似，相對(duì)分子量約為76kDa，在蛋白質(zhì)羧基末端含有粘附因子特有的KGD基序。因此，Peroxinectin粘附因子既具有粘附活性，又具有過(guò)氧化物酶活性。斑節(jié)對(duì)蝦中的peroxinectin基因也已被克隆，其與軟尾太平蝲蛄peroxi-nectin編碼基因的同源性為60%，與脊椎動(dòng)物peroxinectin編碼基因的同源性為45%～55%。整合蛋白是一跨膜二聚體蛋白，它是許多胞外粘附配體的受體，配體蛋白多種多樣，分屬于不同蛋白家族，如膠原蛋白、纖粘連蛋白等，但其共同特征是具有RGD基序，借此可被整合素識(shí)別。Peroxinectin粘附分子中也含有整合蛋白結(jié)合識(shí)別位點(diǎn)，可與之結(jié)合。

在甲殼動(dòng)物血淋巴細(xì)胞粘附病原微生物的過(guò)程中，上述兩種粘附分子共同發(fā)揮作用。粘附分子由血淋巴細(xì)胞產(chǎn)生后，以無(wú)活性形式儲(chǔ)存于分泌性顆粒中，受到病原微生物刺激后被激活并釋放到細(xì)胞表面或胞外基質(zhì)中，首先是整合蛋白與病原微生物靶蛋白上特定基序結(jié)合，然后Peroxinectin粘附分子再與整合蛋白結(jié)合，引起細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳遞，觸發(fā)細(xì)胞吞噬、殺死、消化和清除病原微生物。

血淋巴細(xì)胞的殺菌機(jī)制血細(xì)胞吞入病原微生物后可通過(guò)氧化性殺菌機(jī)制和非氧化性殺菌機(jī)制殺死病原微生物。氧化性殺菌現(xiàn)象最初是在哺乳動(dòng)物的嗜中性白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，又稱為呼吸爆發(fā)。Bell等證實(shí)了甲殼動(dòng)物血淋巴細(xì)胞也存在氧化性殺菌現(xiàn)象，其機(jī)制是血淋巴細(xì)胞吞噬病原微生物后，細(xì)胞膜上的NADPH氧化酶催化氧還原形成超氧陰離子，隨后再活化為各種活性氧或氧化物，如過(guò)氧化氫、羥自由基和單線態(tài)氧等。ROS或ROIs直接作用于微生物，或通過(guò)髓過(guò)氧化物酶和鹵化物的協(xié)同作用而殺死病原微生物。

非氧化性殺菌機(jī)制主要以溶酶體酶的水解作用來(lái)殺死病原微生物。溶酶體酶一般包括溶菌酶、過(guò)氧化物酶及各種水解酶類，如蛋白酶、肽酶、磷酸酶、脂酶和糖酵解酶等。吞噬細(xì)胞對(duì)外來(lái)異物進(jìn)行吞噬或包囊后，細(xì)胞內(nèi)的溶酶體與異物進(jìn)行融合形成吞噬溶酶體，并釋放各種酶類，其中溶菌酶、過(guò)氧化物酶、磷酸酶等直接殺死外來(lái)入侵的病原微生物，隨后各種水解性酶類再進(jìn)一步將它們水解消化并將消化后的的殘?jiān)槠懦霭狻?/p>

（未完待續(xù)）