宋潔，尹德錄，李群星，伏開全，虞宗穎

1徐州醫(yī)科大學(xué)附屬連云港醫(yī)院，江蘇連云港222002；2連云港市贛榆區(qū)人民醫(yī)院；3鎮(zhèn)江市第四人民醫(yī)院

左心室肥厚(LVH)是一種心肌細(xì)胞的生理和病理性反應(yīng)，是眾多心血管事件的高危因素[1]。心電圖(ECG)已成為當(dāng)今臨床篩選和診斷LVH的首選輔助檢查措施[2]。Peguero-Lo Presti 指數(shù)是一種新型LVH的ECG診斷標(biāo)準(zhǔn),具有較高的靈敏度，但特異度低[3]。因此，臨床因ECG檢查高度懷疑為LVH的患者，應(yīng)建議其進(jìn)一步檢查進(jìn)行確診。微小RNA-1(miRNA-1)是心肌的特異性miRNA，對(duì)高血壓患者LVH有較高的特異性診斷價(jià)值[4]。2016年4月—2019年4月,我們選擇150例3級(jí)高血壓患者，以超聲心動(dòng)圖(UCG)作為LVH的診斷金標(biāo)準(zhǔn)，探討Peguero-Lo Presti指數(shù)聯(lián)合miRNA-1對(duì)高血壓合并LVH的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年4月—2019年4月江蘇大學(xué)附屬第四人民醫(yī)院心內(nèi)科住院治療的3級(jí)高血壓患者150例，其中男74例、女76例，年齡(61.30±11.55)歲，高血壓病程(11.74±5.66)年。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18周歲；②臨床診斷為3級(jí)高血壓，高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2010年中國高血壓防治指南[5]，即未服用相關(guān)降壓藥下，多日多次測(cè)得靜息狀態(tài)下收縮壓≥180 mmHg和(或)舒張壓≥110 mmHg；③LVH超聲診斷標(biāo)準(zhǔn)：左室質(zhì)量指數(shù)(LVMI)男性≥115 g/m2，女性≥95 g/m2；④簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①未成年人、妊娠及哺乳期婦女；②先天性肥厚型心肌病和先天性心臟病；③存在冠心病、急性冠脈綜合征、心包積液、風(fēng)濕性心臟病和肺源性心臟病等心臟疾病者；④存在心房顫動(dòng)、房室傳導(dǎo)阻滯和起搏器植入患者。本研究已獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)?；颊呔邮躑CG檢查。根據(jù)UCG檢查結(jié)果，分為單純高血壓組(73例)和高血壓合并LVH組(77例)。單純高血壓組男30例、女43例，年齡(60.62±10.99)歲；高血壓病程(11.34±5.58)年。高血壓合并LVH組男44例、女33例，年齡(61.95±12.08)歲；高血壓病程(12.12±5.74)年。兩組性別、年齡和高血壓病程差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。

1.2 ECG檢查及Peguero-Lo Presti指數(shù)計(jì)算 檢查前患者安靜休息約30 min，采用北京麥迪克斯十二導(dǎo)聯(lián)同步心電分析系統(tǒng)(型號(hào)MECG-200)對(duì)患者進(jìn)行12導(dǎo)聯(lián)同步ECG檢查。檢查時(shí)患者取平臥位，平靜呼吸，按照順序連接肢體及胸前導(dǎo)聯(lián)，常規(guī)設(shè)置走紙速度為25 mm/s，并設(shè)置電壓為10 mm/mV，描記心電圖；去除導(dǎo)聯(lián)。測(cè)量所有導(dǎo)聯(lián)最深的S波振幅(SD)和V4導(dǎo)聯(lián)的S波振幅(SV4)值，根據(jù)公式SD+SV4計(jì)算Peguero-Lo Presti指數(shù)，如果最深的S波振幅在V4，則雙倍。LVH的電壓診斷標(biāo)準(zhǔn)為男性≥2.8 mV，女性≥2.3 mV。心電圖的測(cè)量及計(jì)算均由兩位高年資心電圖醫(yī)師獨(dú)立完成。

1.3 血漿中miRNA-1表達(dá)檢測(cè) 采用RT-PCR法檢測(cè)患者血漿中miRNA-1表達(dá)。采集患者肘靜脈血4～6 mL，應(yīng)用TRIzol試劑盒提取總RNA，并進(jìn)行溶解，隨后采用Bio-Rad法檢測(cè)所抽取的RNA濃度。采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行RNA逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，將所得的逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA于-20 ℃下保存?zhèn)溆谩０凑誱iRNA-1的逆轉(zhuǎn)錄引物序列5′-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGA

CATACAC-3′設(shè)計(jì)miRNA-1的RT-PCR引物；同時(shí)根據(jù)序列：5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′設(shè)計(jì)內(nèi)參U6逆轉(zhuǎn)錄引物。采用聚合酶鏈反應(yīng)試劑盒進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)：在冰上依次加入1 μL的cDNA、miRNA和U6引物各1 μL、10 μL的TaqMan GEx MASTER Mix試劑，隨后加入雙蒸水補(bǔ)至20 μL。在95 ℃反應(yīng)10 min，92 ℃反應(yīng)15 s，隨后60 ℃反應(yīng)1 min，共進(jìn)行60個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增。將所得的產(chǎn)物在熒光定量PCR儀上進(jìn)行分析，測(cè)量Ct值，以U6為內(nèi)參，計(jì)算miRNA-1的表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 Peguero-Lo Presti指數(shù)對(duì)高血壓合并LVH的診斷價(jià)值 74例男性高血壓患者中，UCG陽性44例，其中Peguero-Lo Presti指數(shù)陽性34例，靈敏度為77.27%；UCG陰性30例，其中Peguero-Lo Presti指數(shù)陰性17例，特異度為56.67%。76例女性高血壓患者中，UCG陽性33例，其中Peguero-Lo Presti指數(shù)陽性24例，靈敏度為72.73%；UCG陰性43例，其中Peguero-Lo Presti指數(shù)陰性19例，特異度為44.19%。

2.2 兩組血漿miRNA-1表達(dá)比較 74例男性患者中，高血壓合并LVH組患者血漿miRNA-1表達(dá)量高于單純高血壓組[(1.33±0.28)比(1.01±0.11),P均<0.05]，且血漿miRNA-1表達(dá)量診斷LVH的靈敏度為68.18%，特異度為86.67%。76例女性患者中，高血壓合并LVH組患者血漿miRNA-1表達(dá)量高于單純高血壓組[(1.26±0.25)比(0.95±0.19),P均<0.05]，且血漿miRNA-1表達(dá)量診斷LVH的靈敏度為60.61%，特異度為90.70%。

2.3 Peguero-Lo Presti指數(shù)聯(lián)合血漿miRNA-1對(duì)高血壓合并LVH的診斷價(jià)值 Peguero-Lo Presti指數(shù)診斷高血壓患者LVH的AUC男性為0.650，95%CI為0.52～0.78，P=0.030；女性AUC為0.674，95%CI為0.55～0.80，P=0.009。血漿miRNA-1表達(dá)量診斷LVH的AUC男性為0.867，95%CI為0.79～0.95，P<0.01；女性為0.849，95%CI為0.76～0.94，P<0.01。Peguero-Lo Presti指數(shù)聯(lián)合血漿miRNA-1診斷高血壓合并LVH的AUC男性為0.880，95%CI為0.81～0.95，P<0.01，靈敏度73.64%，特異度93.33%；女性為0.862，95%CI為0.78～0.94，P<0.01，靈敏度75.76%，特異度97.67%。

3 討論

LVH是高血壓患者常見的靶器官損害之一，是高血壓患者的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[1]。早診斷、早治療能有效延緩心臟重塑，改善患者預(yù)后。ECG具有方便、快捷、經(jīng)濟(jì)和易操作等優(yōu)點(diǎn)，已成為當(dāng)今臨床篩選和診斷LVH的首選輔助檢查措施[6]。研究顯示，LVH患者的心肌細(xì)胞增粗、增長，左心室面積增大，心肌細(xì)胞除極時(shí)產(chǎn)生的電偶數(shù)增多、電動(dòng)力增大；同時(shí)，肥厚的左室與胸壁間的距離縮短。因此，投射在左心室導(dǎo)聯(lián)上的QRS振幅增大[7]。

多年來，經(jīng)過眾多心臟病和心電圖學(xué)家的共同努力，目前有關(guān)LVH的ECG診斷標(biāo)準(zhǔn)已超過30種。臨床常用的Sokolow-Lyon指數(shù)和Cornell指數(shù)，二者的診斷特異度均可達(dá)到90%左右，但靈敏度普遍較低，對(duì)于輕度LVH的診斷靈敏度為7%～35%，中重度LVH的診斷靈敏度僅為10%～15%[8～10]。Peguero-Lo Presti 指數(shù)由美國學(xué)者Peguero教授通過一項(xiàng)回顧性研究在2017所提出的新型LVH心電圖診斷標(biāo)準(zhǔn)，其診斷公式為SD+SV4，SD是心電圖所有導(dǎo)聯(lián)中最深的S 波振幅。該標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)為，進(jìn)行12導(dǎo)聯(lián)心電圖檢查時(shí)，當(dāng)患者Peguero-Lo Presti 指數(shù)≥2.8 mV(男性)或2.3 mv(女性)時(shí)，可考慮LVH診斷[11]。我國學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，Peguero-Lo Presti 指數(shù)能提高ECG診斷LVH的靈敏度，但降低了特異度[3,12,13]。國外學(xué)者亦發(fā)現(xiàn)，Peguero-Lo Presti 指數(shù)對(duì)LVH的診斷價(jià)值優(yōu)于Sokolow-Lyon指數(shù)和Cornell指數(shù)[14]。

本研究對(duì)150例高血壓患者進(jìn)行ECG檢查，結(jié)果亦提示Peguero-Lo Presti指數(shù)診斷高血壓合并LVH的靈敏度高(男性77.27%，女性66.67%)，但特異度低(男性63.33%，女性44.19%)。分析其原因主要是LVH患者的電壓變化主要反映QRS后期的S波；而Peguero-Lo Presti指數(shù)采用最深的S 波振幅和胸前4導(dǎo)聯(lián)的S波幅之和，能早期識(shí)別S波的變化，故其靈敏度較高。但由于患者年齡、性別、肥胖、心臟內(nèi)血流量及傳導(dǎo)性、心臟的位置等因數(shù)的影響，Peguero-Lo Presti指數(shù)診斷高血壓合并LVH的特異度較低，易增加誤診率。

近年來，隨著基因技術(shù)的發(fā)展，miRNA因其多樣性及特異的生理功能，眾多學(xué)者推測(cè)miRNA可作為診斷LVH新型生物標(biāo)志物[15]。miRNA-1是一種特異性表達(dá)與心肌細(xì)胞的微小RNA，是由21～25個(gè)核苷酸序列組成的內(nèi)源性非編碼RNA分子，能通過調(diào)控miRNA基因表達(dá)，廣泛參與心臟相關(guān)病理生理過程[16]。前期研究發(fā)現(xiàn)，檢測(cè)血漿miRNA-1表達(dá)可作為早期診斷急性心肌梗死的生物學(xué)標(biāo)志物。司煜安等研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-1 表達(dá)與高血壓LVH的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，是特異性診斷高血壓LVH的潛在標(biāo)志物[4]，miRNA預(yù)測(cè)高血壓LVH的AUC為0.937(95%CI：0.88～0.96)。本研究發(fā)現(xiàn)，高血壓合并LVH患者的血漿miRNA-1高于單純高血壓患者，且miRNA-1診斷高血壓合并LVH的AUC為：男性0.867(95%CI:0.79～0.95)，女性0.849(95%CI:0.76～0.94)；且特異度高，但敏感度偏低。分析其原因，主要考慮血漿中的miRNA-1含量較低，且miRNA-1表達(dá)易受蛋白質(zhì)等雜質(zhì)影響，穩(wěn)定性差；導(dǎo)致機(jī)體中的miRNA 難以被準(zhǔn)確測(cè)量。另一方面考慮二者均為小樣本單中心研究，存在一定程度個(gè)體差異性。

多數(shù)學(xué)者認(rèn)為miRNA-1對(duì)診斷LVH有一定價(jià)值，可與其他檢查方法及生物標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)，有助于臨床醫(yī)師更準(zhǔn)確診斷LVH。本研究首次證實(shí)，相較于單獨(dú)檢測(cè)，Peguero-Lo Presti指數(shù)聯(lián)合miRNA-1能提高高血壓合并LVH診斷的準(zhǔn)確性(AUC男性為0.880，女性為0.862)、靈敏度(男性為73.64%，女性為75.76%)和特異度(男性為93.33%，女性為97.67%)。Peguero-Lo Presti指數(shù)聯(lián)合miRNA-1對(duì)高血壓合并LVH診斷有較高價(jià)值。