抗病毒治療對HCV感染外周血單個核細(xì)胞的IFN-γ和TNF-α的影響

周付成 牛玉蘭 吳倩

【摘要】目的：考察抗病毒治療對丙型肝炎病毒（HCV）感染外周血單個核細(xì)胞的干擾素-γ（IFN-γ）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的影響。方法：收集2015年12月至2019年2月到江蘇省宿遷市鐘吾醫(yī)院治療且確診的慢性HCV患者84例作為觀察組，選擇同期健康體檢者84例為對照組及80例急性 HCV 自愈作為急性 HCV 自愈組。檢測對照組、急性 HCV 自愈及慢性 HCV 抗病毒治療前后的病毒滴度（HCV-RNA）、肝功能、細(xì)胞因子、IFN-γ和 TNF-α等指標(biāo)。結(jié)果：與治療前比，觀察組治療后的病毒載量、肝功能、細(xì)胞因子及外周血單個核細(xì)胞的IFN-γ和TNF-α均明顯降低（P <0.05），與對照組及急性HCV自愈組比，觀察組治療前后的病毒載量、肝功能、細(xì)胞因子及外周血單個核細(xì)胞的 IFN-γ和 TNF-α均明顯增高（P <0.05），與對照組比，急性 HCV 自愈組的病毒載量、肝功能、細(xì)胞因子及外周血單個核細(xì)胞的 IFN-γ和 TNF-α均明顯增高（P <0.05）。結(jié)論：給予抗病毒治療可顯著降低 HCV 感染外周血病毒載量和細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）和白細(xì)胞介素-10（IL-10），降低單個核細(xì)胞的 IFN-γ和 TNF-α， HCV 感染引起的應(yīng)答可能是由多種免疫細(xì)胞及分泌的相關(guān)細(xì)胞因子共同參與。

【關(guān)鍵詞】抗病毒;丙型肝炎病毒;單個核細(xì)胞;干擾素-γ;腫瘤壞死因子-α

【中圖分類號】R575.1【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】2096-5249（2021）22-0067-02

目前全球近2億人感染丙型肝炎病毒（HCV），我國的HCV 感染者至少有3000萬[1]。 HCV感染時，機(jī)體免疫系統(tǒng)激活，產(chǎn)生免疫效應(yīng)，如免疫細(xì)胞數(shù)改變、免疫細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子變化：干擾素-γ（IFN-γ）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α），上述物質(zhì)表達(dá)與HCV預(yù)后有關(guān)。外周血單個核細(xì)胞（PBMCs）是由 T淋巴細(xì)胞、 B淋巴細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞等的混合，參與先天性免疫及適應(yīng)性免疫。報道顯示[2-3]， HCV可感染外周血單個核細(xì)胞，觀察和分析HCV 感染后外周血 PBMCs出現(xiàn)的免疫效應(yīng)變化，或可為理解慢性HCV 感染機(jī)制提供幫助，并為HCV免疫治療提供參考。因此本課題試圖分析抗病毒治療對 HCV感染外周血單個核細(xì)胞的IFN-γ和TNF-α的影響。

1對象與方法

1.1研究對象

收集2015年12月至2019年2月到江蘇省宿遷市鐘吾醫(yī)院治療且根據(jù)《慢性丙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)確診的慢性 HCV 患者84例作為觀察組，選擇同期健康體檢者84例為對照組及80例急性HCV 自愈作為急性 HCV 自愈組，3個組別的一般情況具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：患者符合《慢性丙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)確;對本次研究知情并愿意參與;臨床資料能夠完整收集。

排除標(biāo)準(zhǔn)：合并甲、乙、丁及戊型病毒性肝炎、結(jié)核患者、人類免疫缺陷病毒或惡性腫瘤患者;肝硬化或6個月內(nèi)接受過抗病毒、免疫抑制劑和化療藥者;6個月內(nèi)服用過的藥物致藥物性肝毒性者;合并嚴(yán)重的心、腦、肺和腎臟功能障礙者;妊娠或哺乳期女性。

1.2抗病毒治療

慢性 HCV 患者均接受抗病毒治療方案。達(dá)卡他韋片（百達(dá)澤，生產(chǎn)廠家：中美上海施貴寶制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字20171011，規(guī)格60 mg/片），60 mg/次，1次/d;索非布韋（生產(chǎn)廠家：吉利德，批準(zhǔn)文號H30170365，規(guī)格400 mg/片），??? 400 mg/次，1次/d，利巴韋林片（生產(chǎn)廠家：重慶科瑞制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20073882，規(guī)格1000 mg/片），連續(xù)給藥48周。

1.3標(biāo)本采集和檢測

收集健康體檢者、80例急性HCV 自愈、觀察組抗病毒

找前后的空腹外周血5 mL分別用于病毒滴度（HCV-RNA）、肝功能[丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）]、細(xì)胞因子[白介素-2（IL-2）、白介素-6（IL-6）和白介素-10（IL-10）]、IFN-γ和TNF-α等指標(biāo)的檢測。其中HCV-RNA 含量采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）檢測;全自動生化分析儀檢測ALT 和 AST，ELISA 法檢測細(xì)胞因子[取5 mL人淋巴細(xì)胞分離液，置于無菌離心管中，用滴管取抗凝血5 mL加其上方，20℃1800 rpm離心20min，吸取白膜層并轉(zhuǎn)入另一無菌離心管中，加入2倍體積的PBS緩沖液20℃1500 rpm離心10min，棄上清，洗滌1次，重懸細(xì)胞備用，得到分離 PBMCs，采用 ELISA 法檢測IFN-γ和TNF-α]。試劑盒均購自上海森雄科技實業(yè)有限公司。

檢測并對比對照組、急性 HCV 自愈及慢性 HCV 抗病毒治療前后的病毒滴度（HCV-RNA）、肝功能（ALT 和 AST）、細(xì)胞因子（IL-2）、白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）、IFN-γ和 TNF-α等指標(biāo)的變化情況。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用 SPSS15.0軟件包處理數(shù)據(jù)。計量資料采用（±s）表示，計數(shù)資料采用例數(shù)或百分比表示，采用 t、χ2卡方檢驗。當(dāng) P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三組受試者一般情況比較

三組受試者的年齡、性別比和體重指數(shù)無顯著差異（P>0.05），見表1。

2.2 HCV患者抗病毒治療前后的病毒載量、肝功能、細(xì)胞因子及外周血單個核細(xì)胞的IFN-γ和TNF-α的變化

與治療前比，觀察組治療后的病毒載量、肝功能、細(xì)胞因子及外周血單個核細(xì)胞的IFN-γ和TNF-α均明顯降低（P<0.05），與對照組及急性HCV 自愈組比，觀察組治療前后的病毒載量、肝功能、細(xì)胞因子及外周血單個核細(xì)胞的IFN-γ和TNF-α均明顯增高（P<0.05），與對照組比，急性 HCV 自愈組的病毒載量、肝功能、細(xì)胞因子及外周血單個核細(xì)胞的 IFN-γ和TNF-α均明顯增高（P<0.05），見表2。

3討論

輔助型T 細(xì)胞2（T helper 2 cell，Th2）細(xì)胞因子分泌IL-6、IL-10和 IL-13等細(xì)胞因子，介導(dǎo)體液免疫反應(yīng)，促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞分化，抑制機(jī)體免疫炎癥反應(yīng)，促進(jìn)機(jī)體抗體形成，抑制機(jī)體過度損傷[4-5]?？梢娸o助型 T細(xì)胞1（T helper1 cell，Th1）與 Th2的細(xì)胞因子相互作用，在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫平衡方面發(fā)揮重要作用。報道顯示HCV 可感染外周血單個核細(xì)胞，破壞機(jī)體的細(xì)胞和體液免疫功能，即破壞Th1/Th2平衡，致使機(jī)體難以清除 HCV 病毒， HCV持續(xù)感染機(jī)體，影響預(yù)后[6]。本課題結(jié)果顯示， HCV 感染者外周血單個核細(xì)胞的炎癥因子IFN-γ和TNF-α表達(dá)均明顯增高，與健康人及HCV 自愈者均較高，給予抗病毒治療后， IFN-γ和 TNF-α表達(dá)明顯降低，盡管與健康人及HCV 自愈者相比仍處于較高的水平，該結(jié)果進(jìn)一步佐證外周血單個核細(xì)胞可能受到 HCV刺激，免疫細(xì)胞增殖，促進(jìn)IFN-γ和 TNF-α分泌。另外，給予抗病毒治療后，表達(dá)同時降低的還有細(xì)胞因子 IL-2、IL-6和 IL-10、病毒載量及肝功能，該結(jié)果提示抗病毒治療可明顯降低HCV病毒載量，且HCV 感染引起的應(yīng)答是由多種免疫細(xì)胞及分泌的相關(guān)細(xì)胞因子共同參與[7]。但也有研究顯示[8]，給予抗病毒治療后，即使HCV被清除，也未能改變細(xì)胞因子表達(dá)，難以影響機(jī)體免疫，因為病毒清除后，肝臟的恢復(fù)仍需一段時間，而抗病毒治療時間相對較短。

此外，與對照組比，急性HCV 自愈及 HCV感染抗病毒治療后外周血仍存在不同程度的病毒載量、細(xì)胞因子IL-2、 IL-6和 IL-10表達(dá)較高，單個核細(xì)胞的IFN-γ和TNF-α表達(dá)增高的情況。即使成功清除患者體內(nèi)的HCV，細(xì)胞因子、 IFN-γ和TNF-α表達(dá)仍難以恢復(fù)至正常水平，可能與HCV相關(guān)肝癌有關(guān)。

綜上所述，抗病毒治療可顯著降低HCV感染外周血病毒載量和細(xì)胞因子IL-2、IL-6和 IL-10，降低單個核細(xì)胞的 IFN-γ和TNF-α， HCV 感染引起的應(yīng)答可能是由多種免疫細(xì)胞及分泌的相關(guān)細(xì)胞因子共同參與。

參考文獻(xiàn)

[1] 聶靜敏，胡鳳玉，許敏，等.丙型肝炎患者抗病毒治療后外周血單個核細(xì)胞內(nèi)病毒 RNA 的檢測及其與療效的關(guān)系[J].中華傳染病雜志，2016，34（3）：156-159.

[2] 溫春燕，李凌華，胡鳳玉，等.HIV-1/HCV 合并感染者 HAART 后外周血單個核細(xì)胞總 HIV-1DNA 變化規(guī)律研究[J].中華臨床感染病雜志，2020，13（3）：175-181.

[3] 朱兵帥，朱明武.IL-21對慢性丙肝患者分泌 IL-17和 IFN-γ的調(diào)節(jié)作用[J].中國實驗診斷學(xué)，2018（12）：2080-2082.

[4] 陳佩蘭，范公忍，李琳，等.丙型肝炎患者外周血單個核細(xì)胞 HCV免疫組化和電鏡研究[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2016，22（9）：855-857.

[5] 王莉，郭振濤，彭美玉.全血和外周血單個核細(xì)胞檢測 IL-17和IFN-γ的比較[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2018，39（19）：22-25.

[6] 張茜茜.丙肝病毒核心蛋白抑制單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞極化的作用研究[D].吉林：吉林大學(xué)，2016.

[7] 楊秉芬，翟斐，蔣靜，等.活動性肺結(jié)核患者 CD4+ T 細(xì)胞中 T-bet表達(dá)與 IFN-γ和 TNF-α表達(dá)負(fù)相關(guān)[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2017，33（1）：72-76.

[8]肖婧，朱傳智，李潔瓊，等.活動性結(jié)核病患者外周血單個核細(xì)胞中結(jié)核分枝桿菌抗原特異性多能 CD4+和 CD8+ T 淋巴細(xì)胞的特征研究簡[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2017（6）：686-691.

（收稿日期：2021-01-28）