嘉寶果葉片多酚提取物的微生物轉(zhuǎn)化及其對抗氧化活性的影響

吳妙鴻 邱珊蓮 林寶妹 李海明 張帥 鄭開斌

摘要：對嘉寶果葉片多酚提取物進行微生物轉(zhuǎn)化，以期獲得一種提高其抗氧化能力的方法。以總抗氧化能力（total antioxidant capacity，簡稱T-AOC）提高率為指標，研究菌種類型、底物濃度和轉(zhuǎn)化時間對微生物轉(zhuǎn)化的影響，并用高效液相色譜法（HPLC）分析底物的變化情況。結(jié)果表明，嘉寶果葉片多酚提取物經(jīng)過黑曲霉轉(zhuǎn)化后，T-AOC提高最明顯，底物濃度、轉(zhuǎn)化時間對轉(zhuǎn)化效果的影響顯著，最佳底物濃度為1.0 mg/mL，最佳轉(zhuǎn)化時間為2 d。在最佳轉(zhuǎn)化條件下，嘉寶果葉片多酚提取物的T-AOC由0.506 mmol/L提高至0.818 mmol/L，而多酚含量由0.686 mg/mL下降至0.463 mg/mL。HPLC分析發(fā)現(xiàn)，黑曲霉轉(zhuǎn)化嘉寶果葉片多酚提取物后產(chǎn)生了新的強極性物質(zhì)。

關(guān)鍵詞：嘉寶果葉片;多酚;微生物轉(zhuǎn)化;抗氧化活性;黑曲霉

中圖分類號： S667.901文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2021）24-0184-05

收稿日期：2021-03-29

基金項目：福建省自然科學基金（編號：2020J011369）;福建省公益類科研院所專項（編號：2019R1030-4）。

作者簡介：吳妙鴻（1991—），女，福建漳州人，碩士，研究實習員，主要從事植物天然產(chǎn)物提取與利用研究。Tel：（0596）2122840;E-mail：miaohongwu@qq.com。

通信作者：邱珊蓮，博士，副研究員，主要從事天然產(chǎn)物提取及功效研究。Tel：（0596）2122840;E-mail：slqiu79@163.com。

嘉寶果（Myrciaria cauliflora）是桃金娘科擬愛神木屬熱帶亞熱帶常綠灌木，原產(chǎn)于南美洲，又名珍寶果、樹葡萄[1]，目前在我國仍被視為一種新型水果，主要種植地區(qū)為福建、廣東、浙江等地。嘉寶果有很高的營養(yǎng)價值[2]，具有消炎、抗氧化、降血糖等生物活性[3]。有研究發(fā)現(xiàn)，嘉寶果根、莖、葉、果實中都富含多酚類物質(zhì)，以其葉片中的多酚含量最高，抗氧化和降糖活性最強[4]，Duarte等研究發(fā)現(xiàn)，嘉寶果葉片中的總酚含量可達136.68 mg/g，單寧含量可達60.72 mg/g，嘉寶果葉片是開發(fā)抗氧化、降血糖保健食品藥品潛在的理想天然來源[5]，因此研究提高其提取物生物活性的方法具有實際意義。

多酚類化合物是一類以苯酚為基本骨架、具有多羥基結(jié)構(gòu)的植物次生代謝產(chǎn)物，包括小分子量的多酚單體和具有高聚合結(jié)構(gòu)的單寧物質(zhì)，多數(shù)情況下酚類化合物是與單糖或多糖相結(jié)合，結(jié)構(gòu)復雜，具有多種生物活性[6]。有研究發(fā)現(xiàn)，對酚類分子進行改性，如加入—CH3、—OCH3和—NH2等取代基團能夠提高酚類的抗氧化活性[7]。微生物轉(zhuǎn)化是一種修飾天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)的方法，其利用微生物代謝過程中產(chǎn)生的一種或多種酶對底物進行催化反應，根據(jù)酶體系的轉(zhuǎn)化效果可細分為羥基化、氫化、脫乙酰化、糖苷化、糖苷鍵水解、酯鍵水解、支鏈降解、酯化、酰基轉(zhuǎn)移等反應類型[8]。利用微生物轉(zhuǎn)化酚類物質(zhì)，能選擇性地改變其分子結(jié)構(gòu)，顯著提高生物活性[9]，還能通過改變分子的極性、分子大小解決其溶解性差、生物利用度低等局限性[10-11]。胡麗云等利用霉菌對荔枝果肉中的多酚進行轉(zhuǎn)化，發(fā)現(xiàn)11.2%結(jié)合酚被降解為游離酚，提高了多酚的生物利用度[12]。李東曉利用黑曲霉、棘孢曲霉轉(zhuǎn)化八角金盤的酚酸類化合物，發(fā)現(xiàn)咖啡?？崴岜凰鉃榭Х人醄13]。

目前，通過結(jié)構(gòu)修飾提高嘉寶果葉片多酚提取物生物活性的相關(guān)研究還未見報道，而微生物轉(zhuǎn)化法因無污染、高酶活、低成本等優(yōu)點被廣泛應用于天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)修飾和分子改性[14-15]，在提高提取物生物活性方面具有較大潛力。本研究利用微生物對嘉寶果葉片的多酚提取物進行轉(zhuǎn)化，篩選最佳轉(zhuǎn)化菌種，研究不同轉(zhuǎn)化條件的影響，分析轉(zhuǎn)化前后總抗氧化能力和成分的變化，以期獲得提高嘉寶果葉片多酚提取物抗氧化活性的微生物轉(zhuǎn)化方法，為其在食品、藥品中的應用提供更多途徑。

1 材料與方法

1.1 材料、菌種和試劑

試驗材料：嘉寶果葉片于2020年8月在福建省農(nóng)業(yè)科學院亞熱帶農(nóng)業(yè)研究所嘉寶果苗圃采摘。

試驗菌種：黑曲霉（Aspergillus niger），購自中國醫(yī)學微生物菌種保藏管理中心;釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、構(gòu)巢曲霉[Aspergillus nidulans （Eidam） Winter）]、紅曲霉（Monascus anka）、青霉菌（Penicillium sp.），購自北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)有限公司。

試驗試劑：沙氏葡萄糖培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基、查氏培養(yǎng)基、瓊脂粉，購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司;總抗氧化能力測定試劑盒（FRAP法），購自南京建成生物工程研究所;福林酚試劑，購自美國Sigma公司;沒食子酸（純度>98%），購自日本東京化成工業(yè)株式會社;色譜純甲醇、色譜純磷酸、分析純硫酸鎂七水合物，購自上海麥克林生化科技有限公司;分析純無水乙醇、磷酸二氫鉀、葡萄糖，購自西隴科學股份有限公司;分析純碳酸鈉、硫胺素，購自國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 儀器與設備

THZ-100B型恒溫培養(yǎng)搖床，上海一恒科學儀器有限公司;LDZF-75L-Ⅲ型高壓滅菌鍋，上海申安醫(yī)療器械廠;YS-840-1型潔凈工作臺，上海博迅實業(yè)有限公司;CR22N型高速冷凍離心機，日本日立公司（HITACHI Limited）;UPW-20N型超純水機，北京歷元電子儀器有限公司;BS110S型分析天平，德國賽多利斯集團;RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠;GZX-9246MBE型電熱鼓風干燥箱，上海博迅實業(yè)有限公司;SPX-150B-Z型生化培養(yǎng)箱，上海博迅實業(yè)有限公司;L5S型紫外分光光度計，上海儀電分析儀器有限公司;iMark酶標儀，美國伯樂（Bio-Rad公司;Ultimate 3000型高效液相色譜儀，美國Thermo Fisher公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 嘉寶果葉片多酚提取物的制備 嘉寶果葉片多酚的提取參考林寶妹等的方法[16]，并作適當修改。將新鮮葉片于60℃烘干至恒質(zhì)量，用中藥研磨機粉碎后過40目篩。稱取嘉寶果葉片粉末至離心管中，按1 g ∶80 mL的料液比加入體積分數(shù)為70%的乙醇溶液，充分混勻后于200 W、40 ℃超聲處理10 min，隨后繼續(xù)振搖提取1 h。將提取懸浮液于 4 ℃、6 000 r/min離心15 min，收集上清液，在 50 ℃ 下減壓旋蒸至無醇味，最后通過真空冷凍干燥得到嘉寶果葉片的多酚提取物粉末。

1.3.2 微生物活化和培養(yǎng) 用無菌水將菌種凍干粉末充分溶解成菌懸液，分別將黑曲霉、釀酒酵母、構(gòu)巢曲霉、紅曲霉、青霉接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基、查氏瓊脂培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基（1 L，含20%馬鈴薯汁、20 g葡萄糖、15 g瓊脂）、綜合PDA培養(yǎng)基（1 L，含20%馬鈴薯汁、20 g葡萄糖、3 g KH2PO4、1.5 g MgSO4·7H2O、微量硫胺素、15 g瓊脂）平板上，置于生化培養(yǎng)箱中，在30 ℃下活化培養(yǎng) 3～5 d，直至長出明顯菌落。用無菌水將真菌洗下，將菌懸液濃度稀釋為1×107 CFU/mL，用于微生物轉(zhuǎn)化。

1.3.3 微生物轉(zhuǎn)化 量取100 mL轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基于三角錐瓶中，高壓滅菌15 min。采用適合菌種生長的液體培養(yǎng)基作為轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基（黑曲霉采用沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基，釀酒酵母采用麥芽汁培養(yǎng)基，構(gòu)巢曲霉采用查氏液體培養(yǎng)基，紅曲霉采用馬鈴薯液體培養(yǎng)基，青霉采用綜合馬鈴薯液體培養(yǎng)基）。分為空白組、對照組和試驗組，向空白組、試驗組中分別加入1 mL的1×107 CFU/mL菌懸液，向?qū)φ战M中加入 1 mL 無菌水，將各組三角錐瓶置于恒溫振蕩器中，于28 ℃、180 r/min培養(yǎng)1 d。用無菌水將葉片多酚提取物凍干粉末配制為一定濃度的溶液，分別在對照組、試驗組中加入10 mL葉片提取物溶液，在空白組中加入10 mL無菌水，置于恒溫振蕩器中，于 28 ℃、180 r/min繼續(xù)培養(yǎng)一定時間，最后濾去菌體即得微生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。

1.3.4 轉(zhuǎn)化條件的測定 （1）轉(zhuǎn)化菌種的影響：固定底物濃度為1.0 mg/mL，轉(zhuǎn)化時間為3 d，研究黑曲霉、釀酒酵母、構(gòu)巢曲霉、紅曲霉、青霉轉(zhuǎn)化對底物總抗氧化能力的影響。

（2）底物濃度的影響：以上述單因素試驗確定的最佳菌種為轉(zhuǎn)化菌種，固定轉(zhuǎn)化時間為3 d，設置底物濃度為0、0.5、1.0、2.0 mg/mL，研究底物濃度對轉(zhuǎn)化底物總抗氧化能力的影響。

（3）轉(zhuǎn)化時間的影響：以最佳菌種為轉(zhuǎn)化菌種，固定底物濃度為1.0 mg/mL，設置轉(zhuǎn)化時間為0、1、2、3、4、5 d，研究轉(zhuǎn)化時間對底物總抗氧化能力的影響。

1.3.5 總抗氧化能力的測定 總抗氧化能力測定采用總抗氧化能力測定試劑盒（FRAP法）。

1.3.6 總多酚含量的測定 總多酚含量的測定參考Tohidi等的方法[17]。將樣品稀釋15倍后，精確量取0.5 mL樣品于玻璃試管中，隨后依次加入 2.5 mL 0.1 mol/L福林酚試劑、2 mL 75 g/L碳酸鈉溶液，用漩渦振蕩器充分混勻后置于45 ℃水浴鍋中反應15 min，最后于765 nm下測定吸光度。用質(zhì)量濃度為0.01～0.08 mg/mL的沒食子酸標準溶液代替樣品繪制標準曲線，樣品中的多酚濃度以單位體積樣品中含有的沒食子酸質(zhì)量計，mg/mL。

1.3.7 多酚提取物轉(zhuǎn)化前后的HPLC分析 轉(zhuǎn)化前后的多酚提取物用水飽和乙酸乙酯按1 ∶2的體積比振搖萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓旋蒸除去乙酸乙酯，用色譜純甲醇復溶，過0.22 μm有機相濾膜后用高效液相色譜儀檢測。色譜條件參考NY/T 2741—2015《仁果類水果中類黃酮的測定 液相色譜法》[18]并做適當修改。色譜柱：月旭Ultimate AQ-C18柱，5 μm，4.6 mm×250 mm;柱溫為40 ℃;流速為0.8 mL/min;進樣量為10 μL;檢測波長為280、350 nm;流動相為0.4%磷酸水溶液（A）和100%甲醇（B）;梯度洗脫（0～10 min，0～25% B;10～25 min，25%～40% B;25～55 min，40%～60% B;55～60 min，60%～0 B）。

1.4 數(shù)據(jù)分析

每個樣品做3次重復，用Excel、Origin軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析并作圖，采用SPSS軟件進行統(tǒng)計檢驗分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 微生物轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化

2.1.1 轉(zhuǎn)化菌種的篩選 不同菌種轉(zhuǎn)化對嘉寶果葉片多酚提取物總抗氧化能力的影響見表1。Xiao等利用黑曲霉轉(zhuǎn)化甘草黃酮，發(fā)現(xiàn)生成了10種新成分，分別為氫化代謝產(chǎn)物、雙羥基化代謝產(chǎn)物、環(huán)氧化代謝產(chǎn)物和糖基化代謝產(chǎn)物[19];Jin等研究了14個不同菌株利用糖苷鍵水解將虎杖苷轉(zhuǎn)化為白藜蘆醇的能力，結(jié)果表明，酵母菌CICC1912的轉(zhuǎn)化能力最強[20];Savinova等則利用構(gòu)巢曲霉VKPM F-1069使黃體酮發(fā)生羥基化，生成了3種新的化合物[21];叢悅怡等利用紅曲霉將人參皂苷轉(zhuǎn)化為生物活性更強的稀有人參皂苷Rg3[22];蘇龍等則利用青霉發(fā)酵產(chǎn)生的酶將黃岑苷水解得到黃岑素[23]。本研究以上述幾種常用于微生物轉(zhuǎn)化且易于獲得的菌種為研究對象，比較其轉(zhuǎn)化嘉寶果葉片多酚提取物的能力。由表1可知，經(jīng)過黑曲霉、釀酒酵母轉(zhuǎn)化后，嘉寶果葉片多酚提取物的總抗氧化能力有所提高，提高率分別為53.95%、14.37%;經(jīng)過構(gòu)巢曲霉、紅曲霉、青霉轉(zhuǎn)化后，葉片多酚提取物的總抗氧化能力卻顯著下降，分別下降了64.48%、41.75%、47.79%。由此可見，黑曲霉是嘉寶果葉片多酚提取物轉(zhuǎn)化的最佳菌種。

2.1.2 底物濃度的影響 由表2可見，當?shù)孜镔|(zhì)量濃度由0.5 mg/mL增加到1.0 mg/mL時，嘉寶果葉片多酚提取物的總抗氧化能力顯著提高，這是因為適當增加底物濃度可增加底物與酶的結(jié)合位點，提高酶促反應速率。而當?shù)孜镔|(zhì)量濃度由1.0 mg/mL增加至2.0 mg/mL時，嘉寶果葉片多酚提取物的總抗氧化能力卻有所下降，這是因為黑曲霉代謝過程中產(chǎn)生的酶量有限，底物質(zhì)量濃度過高時，酶已經(jīng)被底物完全飽和，多余的底物無法與酶結(jié)合發(fā)生酶促反應，使反應速率下降，因此總抗氧化能力有所降低。綜上所述，1.0 mg/mL為最佳底物質(zhì)量濃度，此時總抗氧化能力提高率為49.30%。

2.1.3 轉(zhuǎn)化時間的篩選 本研究結(jié)果表明，轉(zhuǎn)化時間對嘉寶果葉片多酚提取物總抗氧化能力提高率的影響極顯著（P<0.01）。由圖1可知，隨著轉(zhuǎn)化時間的延長，嘉寶果葉片多酚提取物的總抗氧化能力呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢。本試驗在加入底物前，先將黑曲霉培養(yǎng)1 d，其在生長過程中產(chǎn)生了酶，因此加入底物后轉(zhuǎn)化1 d，其總抗氧化能力明顯提高。轉(zhuǎn)化時間為2 d時，嘉寶果葉片多酚提取物的總抗氧化能力達到最高，說明此時黑曲霉產(chǎn)生的酶量最大，酶促反應速率最高。繼續(xù)延長轉(zhuǎn)化時間，總抗氧化能力有所下降，這可能是因為轉(zhuǎn)化時間過長會使多酚發(fā)生降解，導致活性降低，而且大部分植物多酚本身不穩(wěn)定，在貯藏和加工過程中易出現(xiàn)降解的現(xiàn)象[24]。

2.2 轉(zhuǎn)化前后主要成分的變化

2.2.1 嘉寶果葉片提取物轉(zhuǎn)化過程中多酚含量的變化 由圖2可見，黑曲霉轉(zhuǎn)化過程中嘉寶果葉片總多酚含量顯著下降（P<0.01），從0.686 mg/mL下降至0.463 mg/mL，而對照的多酚含量變化不明顯，表明在轉(zhuǎn)化過程中，酚類物質(zhì)結(jié)構(gòu)在酶的作用下發(fā)生了變化，使多酚含量明顯降低。

2.2.2 嘉寶果葉片多酚轉(zhuǎn)化前后的HPLC分析 黑曲霉轉(zhuǎn)化嘉寶果葉片多酚提取物2 d后，通過HPLC分析轉(zhuǎn)化前后多酚含量的變化情況（圖3）。通過對比譜圖中峰的保留時間可知，350 nm下的多酚底物轉(zhuǎn)化后，極性較強的峰相對強度變大，極性較弱的峰相對強度變小;而280 nm下的多酚底物轉(zhuǎn)化后，峰發(fā)生了明顯變化，弱極性的物質(zhì)明顯減少，新生成的物質(zhì)均為強極性物質(zhì)。

3 討論與結(jié)論

本研究對比了幾種微生物轉(zhuǎn)化對嘉寶果葉片多酚提取物總抗氧化能力的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)黑曲霉轉(zhuǎn)化的多酚提取物的總抗氧化能力提高最明顯。黑曲霉在生長過程中能代謝產(chǎn)生豐富的酶體系，是產(chǎn)酶的寶庫[25]，也是世界公認的在食品藥品中具有較高安全性的真核生物[26]。黑曲霉的轉(zhuǎn)化機制是利用其產(chǎn)生豐富的酶系，催化底物發(fā)生去糖基化、羥基化、甲基化、脫氫化等過程而形成轉(zhuǎn)化產(chǎn)物[27]。黑曲霉代謝過程中產(chǎn)生大量葡萄糖苷酶，因此在轉(zhuǎn)化天然產(chǎn)物的過程中極易發(fā)生糖基鍵水解反應。陳箐筠等利用黑曲霉發(fā)酵產(chǎn)β-葡萄糖苷酶、蕓香苷-α-鼠李糖苷酶，催化蕓香苷二元糖苷鍵發(fā)生水解得到苷元槲皮素[28]。吳秀麗等利用黑曲霉對人參皂苷Re進行微生物轉(zhuǎn)化發(fā)現(xiàn)，黑曲霉產(chǎn)生的α-鼠李糖苷水解酶、β-葡萄糖苷酶有催化作用，將人參皂苷Re轉(zhuǎn)化為Rg1、Rg2和Rh1[29]。

嘉寶果葉片多酚提取物的底物質(zhì)量濃度與轉(zhuǎn)化效果密切相關(guān)，當?shù)孜镔|(zhì)量濃度過低時，無法充分利用微生物代謝產(chǎn)生的酶，質(zhì)量濃度過高時則會導致酶結(jié)合位點缺失，還可能由于多酚的抑菌性[30]抑制了菌株生長，從而使轉(zhuǎn)化效率下降。本研究發(fā)現(xiàn)，最佳轉(zhuǎn)化底物質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL。王曉玲研究芍藥苷的微生物轉(zhuǎn)化條件發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)化率隨著底物濃度的提高先上升后下降[31]，這與本研究結(jié)果一致。本研究還分析了轉(zhuǎn)化時間對轉(zhuǎn)化效果的影響，優(yōu)化得到黑曲霉轉(zhuǎn)化嘉寶果葉片多酚提取物的最佳轉(zhuǎn)化時間為2 d。Knockaert等研究了2種乳桿菌轉(zhuǎn)化阿魏酸的能力，發(fā)現(xiàn)植物乳桿菌在對數(shù)生長期時開始轉(zhuǎn)化阿魏酸，而丘狀乳桿菌則在穩(wěn)定期才開始轉(zhuǎn)化[32]，說明不同菌種轉(zhuǎn)化植物提取物時所處的生長階段不同，因此選擇能確保轉(zhuǎn)化反應充分進行的轉(zhuǎn)化時間至關(guān)重要，同時還應考慮酚類物質(zhì)在反應體系中易發(fā)生降解，導致活性降低，轉(zhuǎn)化時間也不宜過長。

嘉寶果葉片多酚提取物經(jīng)過黑曲霉轉(zhuǎn)化后多酚含量明顯下降，且生成了強極性的物質(zhì)，說明黑曲霉分泌的酶催化產(chǎn)生一系列化學反應，改變了多酚物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，并顯著提高了嘉寶果葉片提取物的總抗氧化能力。通過優(yōu)化底物質(zhì)量濃度、轉(zhuǎn)化時間，可以使抗氧化能力提高率顯著增大，本研究對嘉寶果葉片在食品藥品中的應用具有一定的指導意義。

參考文獻：

[1]邱珊蓮，林寶妹，張少平，等. 嘉寶果果實不同部位營養(yǎng)成分分析[J]. 福建農(nóng)業(yè)科技，2018（1）：1-3.

[2]唐 麗，袁婷婷，鐘秋平. 嘉寶果營養(yǎng)成分分析[J]. 經(jīng)濟林研究，2014，32（2）：120-124.

[3]Zhao D K，Shi Y N，Petrova V，et al. Jaboticabin and related polyphenols from Jaboticaba （Myrciaria cauliflora） with anti-inflammatory activity for chronic obstructive pulmonary disease[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2019，67（5）：1513-1520.

[4]邱珊蓮，林寶妹，洪佳敏，等. 樹葡萄植株不同部位醇提物抗氧化及抑制α-葡萄糖苷酶活性的比較研究[J]. 果樹學報，2018，35（3）：311-318.

[5]Duarte A R，Santos S C，Seraphin J C，et al. Environmental influence on phenols and essential oils of Myrciaria cauliflora leaves[J]. Journal of the Brazilian Chemical Society，2010，21（9）：1672-1680.

[6]吳建華，吳志瑰，裴建國，等. 多酚類化合物的研究進展[J]. 中國現(xiàn)代中藥，2015，17（6）：630-636.

[7]陳金祥. 酚酸抗氧化活性的構(gòu)效關(guān)系及抗氧化機制的研究[D]. 太原：中北大學，2020：41.

[8]李 艷，周 劍，何東賢，等. 微生物轉(zhuǎn)化在現(xiàn)代中藥研發(fā)中的應用[J]. 中國抗生素雜志，2020，45（5）：418-422.

[9]王珊珊，胡 萍，余少文. 天然產(chǎn)物微生物轉(zhuǎn)化的研究進展[J]. 中國新藥雜志，2016，25（1）：71-75.

[10]Dupas C，Baglieri A M，Ordonaud C，et al. Chlorogenic acid is poorly absorbed，independently of the food matrix：a Caco-2 cells and rat chronic absorption study[J]. Molecular Nutrition & Food Research，2010，50（11）：1053-1060.

[11]薛海潔，王 穎，李 春. 植物天然產(chǎn)物的微生物合成與轉(zhuǎn)化[J]. 化工學報，2019，70（10）：215-225.

[12]胡麗云. 荔枝果肉多酚在貯藏褐變和微生物轉(zhuǎn)化過程中的變化規(guī)律研究[D]. 南昌：江西農(nóng)業(yè)大學，2016：45.

[13]李東曉. 甜茶和八角金盤天然產(chǎn)物分析及微生物轉(zhuǎn)化研究[D]. 南京：南京師范大學，2015：60-61.

[14]Zhang H C，Yu H N. Enhanced biotransformation of soybean isoflavone from glycosides to aglycones using solid-state fermentation of soybean with effective microorganisms （EM） strains[J]. Journal of Food Biochemistry，2019，43（4）：12804-12814.

[15]Joyeau R，Planchon M，Abessolo J，et al. Combinatorial approach to the selection of active microorganisms in biotransformation：Application to sinomenine[J]. Journal of Molecular Catalysis B Enzymatic，2013，85/86：65-70.

[16]林寶妹，邱珊蓮，鄭開斌，等. 嘉寶果葉片總多酚提取工藝優(yōu)化及其體外降糖活性[J]. 福建農(nóng)業(yè)學報，2019，34（5）：587-594.

[17]Tohidi B，Rahimmalek M，Arzani A. Essential oil composition，total phenolic，flavonoid contents，and antioxidant activity of Thymus species collected from different regions of Iran[J]. Food Chemistry，2017，220：153-161.

[18]仁果類水果中類黃酮的測定 液相色譜法：NY/T 2741—2015[S]. 北京：中國標準出版社，2015.

[19]Xiao Y，Han F B，Lee I S. Microbial transformation of licochalcones[J]. Molecules，2020，25（1）：60-73.

[20]Jin S，Luo M，Wang W，et al. Biotransformation of polydatin to resveratrol in Polygonum cuspidatum roots by highly immobilized edible Aspergillus niger and yeast[J]. Bioresource Technology，2013，136：766-770.

[21]Savinova O S，Solyyev P N，Vasina D V，et al. Biotransformation of progesterone by Aspergillus nidulans VKPM F-1069 （wild type）[J]. Steroids，2019，149：108421-108429.

[22]叢悅怡，孫 佳，于 恩，等. 紅曲霉發(fā)酵轉(zhuǎn)化人參皂苷Rg3的研究[J]. 中草藥，2018，49（6）：1298-1303.

[23]蘇 龍，梁廣波，龍文英，等. 黃芩苷微生物轉(zhuǎn)化菌的篩選鑒定及發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學，2017，56（8）：1483-1488.

[24]林國榮，楊麗洪. 加工條件對葡萄多酚穩(wěn)定性影響的研究[J]. 食品科技，2019，44（11）：267-272.

[25]姚善涇，蔡禮年，林東強. 黑曲霉作為分泌蛋白細胞工廠的研究進展[J]. 化工學報，2019，70（10）：3690-3703.

[26]Schuster E，Dunn-Coleman N，F(xiàn)risvad J，et al. On the safety of Aspergillus niger—A review[J]. Applied Microbiology & Biotechnology，2002，59（4）：426-435.

[27]王智磊，劉素娟，張 鑫，等. 黑曲霉生物轉(zhuǎn)化黃酮類成分研究進展[J]. 中國實驗方劑學雜志，2017，23（21）：220-228.

[28]陳箐筠，張迎慶，干 信，等. 黑曲霉As3.4309發(fā)酵轉(zhuǎn)化蘆丁的研究[J]. 生物技術(shù)，2009，19（2）：88-91.

[29]吳秀麗，劉 成，陳 靖. 黑曲霉Aspergillus niger對人參皂苷Re的微生物轉(zhuǎn)化[J]. 中國當代醫(yī)藥，2011，18（33）：7-9.

[30]張兆英，王 君，宋立立，等. 金絲小棗多酚的提取及抗氧化性和抑菌活性研究[J]. 中國調(diào)味品，2020，45（3）：42-47.

[31]王曉玲. 芍藥苷的微生物轉(zhuǎn)化研究[J]. 西南民族大學學報，2011，37（3）：425-430.

[32]Knockaert D，Raes K，Wille C，et al. Metabolism of ferulic acid during growth of Lactobacillus plantarum and Lactobacillus collinoides[J]. Journal of the Science of Food & Agriculture，2012，92（11）：2291-2296.