王連軍,李艷美,宋昌梅
(1.上海辰山植物園,上海201602;2.黑龍江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,黑龍江哈爾濱150080)
擬南芥,拉丁名為Arabidopsis thaliala(L.),屬于十字花科擬南芥屬植物,又稱為阿拉伯草、鼠耳芥,在我國山東、內(nèi)蒙古、甘肅、云南、西藏等省份均有分布,同時在非洲和歐洲也有分布。擬南芥植株矮小,高20~30 cm,生長周期較短,種子多,然而卻是科學(xué)研究的重要模式植物。
作為重要的模式植物,國內(nèi)外對其研究報道非常多。將擬南芥的基因轉(zhuǎn)入水稻中表達,可以提高水稻對水分的利用能力[1],也有對擬南芥中生長素基因開展的研究[2-5],目前,國內(nèi)外關(guān)于擬南芥栽培方法有一些報道[6-9],然而,擬南芥的栽培卻面臨一些問題,比如植株生長特別弱小,花期提前。該文從最基本的擬南芥栽培介質(zhì)入手,來解決以上問題,可以為擬南芥的栽培提供重要參考價值。
采用野生型擬南芥為試驗材料。
1.2.1 擬南芥培養(yǎng)。試驗采用直接點播法,即先用75%的乙醇將擬南芥種子消毒5 min,再用質(zhì)量分數(shù)為0.5%的次氯酸鈉表面消毒,于4℃黑暗條件下放置3 d后,直接點播于不同類型的小型花盆中,并在22℃、光照16 h、黑暗8 h的條件下培養(yǎng)。
1.2.2 傳統(tǒng)擬南芥培養(yǎng)介質(zhì)。傳統(tǒng)擬南芥栽培介質(zhì)即為草炭、蛭石、珍珠巖,按照1∶1∶1的比例配置,配好混勻后即可用于擬南芥的培養(yǎng)。
1.2.3 改進后的擬南芥培養(yǎng)介質(zhì)。改進后的擬南芥栽培介質(zhì):草炭、蛭石、珍珠巖,按照1∶1∶1的比例配置,在混合之前,分別將3種介質(zhì)過80目的鐵篩子,將大顆粒的介質(zhì)捏碎過篩子,最后不能通過篩子的大顆粒棄用,通過篩子的3種介質(zhì)再按照1∶1∶1的比例混勻,混勻后即可用于擬南芥的培養(yǎng)。
如圖1A所示,傳統(tǒng)的土壤介質(zhì),草炭、蛭石、珍珠巖,按照1∶1∶1的比例配置,配置后顆粒較為粗糙。如圖1B所示,3種介質(zhì)通過80目的篩子后,土壤介質(zhì)變得非常精細。
如圖1所示,用傳統(tǒng)土壤介質(zhì)培育的擬南芥,幼苗生長很慢,植株非常弱小,而且在植株生長2周左右就開花,這是非常不正常的。這樣的植株很難收到種子,即使能收到種子,種子也很少很不飽滿,表明擬南芥的生長受到了脅迫。
如圖3所示,用改良后土壤介質(zhì)培育的擬南芥,擬南芥種子消毒后,播種于改良后的土壤介質(zhì)中,1周后,種子萌發(fā)成2片子葉的幼苗,在顆粒細小的擬南芥培養(yǎng)介質(zhì)中,幼苗生長迅速。2周后可長出6個葉片以上。幼苗生長非常快,植株生長非常健壯,植株底座較大,3~4周后開始逐步開花,花大果莢多,種子飽滿,相比于傳統(tǒng)介質(zhì)培養(yǎng)的擬南芥,效果非常顯著。
相同生長環(huán)境中,傳統(tǒng)介質(zhì)培養(yǎng)的擬南芥,平均植株高度為8 cm,此時植株開始開花,距離播種的時間為14 d,單個植株的果莢個數(shù)很少,平均個數(shù)小于8個;而改良后的土壤介質(zhì),平均植株高度為20 cm,此時植株開始開花,距離播種的時間為25 d,單個植株的果莢個數(shù)非常多,平均個數(shù)為23個,如表1所示。
表1 各種參數(shù)數(shù)值
20世紀90年代,由于擬南芥植株相對較小,種子多,生命周期短,基因組也比較小,便于遺傳方面的分析和操作,因此開始被研究者作為首選模式植物,2000年,擬南芥全基因組測序完成,迄今為止,關(guān)于擬南芥的國內(nèi)外學(xué)術(shù)論文達到5萬篇以上。然而擬南芥的生長受多種因素的影響,比如土壤介質(zhì)、溫度、濕度、光照、通風狀況等,該文為了探索擬南芥生長的主要影響因素,采取控制變量法,即把土壤介質(zhì)作為主要因素,同時控制其他因素如濕度、光照、溫度等條件不變。從研究結(jié)果來看,改良后的土壤介質(zhì),擬南芥生長較快,植株健壯,種子飽滿,這表明土壤介質(zhì)是擬南芥生長的重要因素。改進后的土壤介質(zhì),可解決擬南芥植株矮小、早開花等培養(yǎng)過程中遇到的問題。