多壁碳納米管小柱-液質(zhì)聯(lián)用法測定豬肉中地美硝唑的不確定度評定

楊俊 管彬彬 何薛純 周楠 陳煜

摘要：豬肉樣品經(jīng)酸化乙腈提取、多壁碳納米管小柱凈化，采用液質(zhì)聯(lián)用法測定豬肉中地美硝唑含量，并根據(jù)建立的數(shù)學(xué)模型對各分量進(jìn)行不確定度評定。結(jié)果表明，利用多壁碳納米管小柱-液質(zhì)聯(lián)用法測定豬肉中地美硝唑，其不確定度的主要來源為標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制及曲線擬合。當(dāng)豬肉中地美硝唑含量為4.87 μg/kg時，擴(kuò)展不確定度為0.36 μg/kg（k = 2）。

關(guān)鍵詞：多壁碳納米管；液質(zhì)聯(lián)用法；地美硝唑；不確定度

中圖分類號：TS251.7 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI：10.16465/j.gste.cn431252ts.20210524

基金項目：南通市科技項目基礎(chǔ)科學(xué)研究（JC2020113）。

地美硝唑是硝基咪唑類藥物，對滴蟲、原蟲病和厭氧菌有良好的預(yù)防和治療作用，同時還具有抗結(jié)核、抗病毒、抗病毒腫瘤等作用[1-4]，常作為獸藥用于畜禽類疾病的預(yù)防和治療。但是，地美硝唑作為藥物在動物體內(nèi)會有一定的殘留，會引起人體致突變和致癌等副作用，對人體的健康造成影響[5-7]。因此準(zhǔn)確測定豬肉中的地美硝唑含量，了解測定地美硝唑的不確定度及來源，對提高分析的準(zhǔn)確性有十分重要的意義。

目前測定豬肉中地美硝唑含量的凈化方法有液-液萃取法、分散液液微萃取法、固相萃取法、分子印跡法、QuEChERS法等[8-11]，而多壁碳納米管濾過型（m-PFC）凈化小柱的方法鮮見報道，該方法操作簡單、快捷、準(zhǔn)確度高。

本研究采用多壁碳納米管小柱-液質(zhì)聯(lián)用法測定豬肉中地美硝唑含量，根據(jù)JJF 1059.1—2012《測量不確定度評定與表示》[12]建立實驗方法的數(shù)學(xué)模型，并對實驗過程中引入的各不確定度分量進(jìn)行評定，以期為采用該法測定豬肉中地美硝唑含量的質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

Vanquish/Altis型超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：美國賽默飛世爾公司；SECURA225D-1CN型電子天平（精度0.01 mg）、BSA224S型電子天平（精度0.1 mg）：德國賽多利斯公司；VM-2500型多管旋渦混合儀：廣東安勝儀器有限公司；TGL-16M型臺式高速冷凍離心機(jī)：上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司；Xcelvap型氮吹濃縮儀：美國Horizon公司；Milli-Q Reference型實驗室超純水儀：美國Millipore公司。

1.2 耗材與試劑

乙腈（色譜純）：德國Merck公司；正己烷（色譜純）、98%無水甲酸（分析純）：上海阿拉丁生化科技股份有限公司；無水硫酸鎂、氯化鈉（分析純）：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；QuickProQuEChERS-VD凈化柱：河南華仁健康科技有限公司；0.22 μm微孔濾膜：上海安譜實驗科技股份有限公司；地美硝唑（純度99.46%）：英國LGC公司。

1.3 前處理方法

稱取5 g試樣于50 mL離心管中，加入3 mL水，5 mL 1%的甲酸乙腈，渦旋提取5 min，加入4 g無水硫酸鎂、1 g氯化鈉，快速振蕩混勻，渦旋3 min，6 000 r/min離心5 min。上清液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中，加入5 mL正己烷，渦旋2 min，6 000 r/min離心5 min，棄去上層液體。吸取下層澄清液經(jīng)多壁碳納米管小柱凈化，氮吹濃縮至近干，加入1 mL含0.1%甲酸的水+甲醇（70+30）振蕩溶解殘渣后，濾液再經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾，上機(jī)。

1.4 儀器條件

1.4.1 色譜條件

色譜柱為Accucore RP-MS柱（150 mm×2.1 mm，2.6 μm）；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為2 μL；流動相為0.1%甲酸水（A）和0.1%甲酸乙腈（B），流速0.3 mL/min；采用梯度洗脫程序：0.0～6.0 min，95% A～5% A；6.0～8.0 min，5% A；8.0～8.1 min，5% A～95% A；8.1～10.0 min，95% A。

1.4.2 質(zhì)譜條件

采用電噴霧電離（ESI）正離子掃描；噴霧電壓3 500 V；鞘氣流量4.1 L/min；輔助氣流量5.1 L/min；吹掃擋錐氣流量1.5 L/min；蒸發(fā)溫度450 ℃；離子傳輸管溫度200 ℃；碰撞氣壓0.2 Pa。檢測方式為選擇反應(yīng)監(jiān)測（SRM）。SRM條件見表1。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：稱取10.1 mg地美硝唑，用甲醇定容至100 mL，質(zhì)量濃度為100 μg/mL；標(biāo)準(zhǔn)中間溶液：吸取0.1 mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液定容至10 mL容量瓶，質(zhì)量濃度為1 μg/mL；吸取1 mL標(biāo)準(zhǔn)中間溶液定容至10 mL，質(zhì)量濃度為0.1 μg/mL；標(biāo)準(zhǔn)工作曲線系列溶液：分別準(zhǔn)確吸取地美硝唑標(biāo)準(zhǔn)中間液0.01、0.05、0.100、0.250、0.500 mL，用基質(zhì)提取液定容至1 mL，質(zhì)量濃度為1、5、10、25、50 ng/mL。

2 結(jié)果與分析

2.1 數(shù)學(xué)模型的建立

3 測量結(jié)果及其不確定度報告

多壁碳納米管小柱-液質(zhì)聯(lián)用法測定豬肉中地美硝唑含量，當(dāng)稱樣量為5 g時，k = 2（置信度為95%），測定結(jié)果為（4.87±0.36） μg/kg。

4 結(jié) 論

本研究采用多壁碳納米管小柱-液質(zhì)聯(lián)用法測定豬肉中地美硝唑含量，建立實驗方法的數(shù)學(xué)模型，通過對實驗過程中引入的各不確定度分量進(jìn)行不確定度評定。結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)溶液配制、曲線擬合對不確定度的影響最大。在實驗過程中，標(biāo)準(zhǔn)溶液配制涉及的計量器具和配制步驟多，各個步驟的不確定度累計，導(dǎo)致該分量的不確定度較大。實驗中選擇合適的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在定量準(zhǔn)確的前提下減少中間配制的步驟，降低測定的不確定度；曲線的擬合對結(jié)果的不確定度也有很大的影響，因此，在實驗中標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍要與樣品中的濃度匹配，盡可能提高曲線擬合相關(guān)系數(shù)。

參 考 文 獻(xiàn)

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Evaluation of Uncertainty in the Determination of Desenidazole in Pork by Multi-walled Carbon Nanotube Column-liquid Mass Spectrometry

Yang Jun， Guan Binbin， He Xuechun， Zhou Nan， Chen Yu

（ Nantong Food and Drug Supervision and Inspection Center， Nantong， Jiangsu 226006 ）

Abstract： Pork samples were extracted by acidified acetonitrile and purified by multi-wall carbon nanotube column. The content of temenidazole in pork was determined by liquid mass spectrometry. The uncertainty of each component was evaluated according to the established mathematical model. Results： The main source of uncertainty is the preparation of standard curve and curve fitting. When the content of desenidazole in pork was 4.87 μg/kg， the extended uncertainty was 0.36 μg/kg （k=2）.

Key words： multi-walled carbon nanotubes， liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometry， desenidazole， uncertainty