銀杏葉渣制肥對(duì)小白菜種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)的影響

邵金華 全沁果 張文兵 熊佳萱 文天鳳 楊川川

(1湖南科技學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，湖南 永州 425199；2湖南省銀杏工程技術(shù)研究中心，湖南 永州 425199；3湘南優(yōu)勢(shì)植物資源綜合利用湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 永州 425199；4 土傳病害綠色防控湖南省工程研究中心，湖南 永州 425199)

過渡使用化肥會(huì)破壞土壤原有的結(jié)構(gòu)和生境，使得蔬菜的養(yǎng)分吸收和運(yùn)輸發(fā)生障礙，導(dǎo)致其產(chǎn)量和品質(zhì)隨之下降[1]，且化肥中的重金屬元素、硝酸鹽、放射性物質(zhì)易污染蔬菜，造成食品安全隱患[2]。生物有機(jī)肥是以有機(jī)固體殘留物為原料，包括有機(jī)垃圾、農(nóng)副產(chǎn)品廢棄物、動(dòng)物糞便等，經(jīng)過微生物發(fā)酵、去味及腐熟后制得的一類有機(jī)肥料[3]。該肥料包含多種植物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)元素，并能改善土壤理化性狀及施用化肥造成的土壤板結(jié)，增強(qiáng)土壤的保水、供肥、保肥能力[4]。因此，生物有機(jī)肥作為化肥的替代品在蔬菜生產(chǎn)中具有廣泛的應(yīng)用前景。

銀杏葉作為中藥材，由銀杏(Ginkgo bilobaL．)的葉片干燥制得，有效成分主要包括銀杏黃酮醇苷、銀杏萜內(nèi)酯、銀杏多糖[5]。其黃酮與萜內(nèi)酯化合物對(duì)高血脂癥、冠心病和心絞痛等中老年心血管疾病療效顯著[6]。在生產(chǎn)該中成藥過程中會(huì)產(chǎn)生大量銀杏葉殘?jiān)?，大部分被直接丟棄，且缺乏回收利用技術(shù)，造成了環(huán)境污染與資源浪費(fèi)。本試驗(yàn)以銀杏葉殘?jiān)鼮樵希捎脝我蛩?正交試驗(yàn)優(yōu)化 EM ( effective microorganisms)菌種發(fā)酵制備生物有機(jī)肥的工藝條件，分析肥料的品質(zhì)，并探究以該肥料為配方的水浸液對(duì)小白菜種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)的影響，以期為銀杏葉渣的二次開發(fā)以及價(jià)值提升提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與試驗(yàn)地概況

銀杏葉渣為工業(yè)提取黃酮和內(nèi)酯后得到的殘?jiān)珊虾銈ニ帢I(yè)提供，將其烘干后粉碎，密封保存。EM 菌種來源于中國(guó)普通微生物管理中心；EM 培養(yǎng)基為南京宏遠(yuǎn)生物科技有限公司生產(chǎn)；小白菜種子購(gòu)自湖南省永州市種子管理站。

試驗(yàn)地位于湖南科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)園區(qū)(26°12′43．31"N，111°35′48．71"E)，海拔122．45 m，處于溫、熱帶線合部，屬熱帶季風(fēng)氣候，氣候溫和，雨量充沛，土地肥沃，年降水量1 290 ～1 900 mm，年均日照1 873．7 h，年均無(wú)霜期285 ～311 d，年均氣溫17．6 ～18．6℃。土壤有機(jī)質(zhì)含量14．36 g.kg-1、全氮含量0．84 g.kg-1、硝態(tài)氮含量573．26 mg.kg-1、銨態(tài)氮含量10．64 mg.kg-1、全磷含量0．42 g.kg-1、速效磷含量15．03 mg.kg-1、全鉀含量16．99 g.kg-1、速效鉀含量60．37 mg.kg-1。試驗(yàn)前風(fēng)干、磨細(xì)、過40 目篩備用。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1．2．1 EM 菌種的活化 用超純水將EM 培養(yǎng)基稀釋10 倍，將其以50 mL/瓶均勻分裝至250 mL 錐形瓶中，于立式壓力蒸汽滅菌器筒中進(jìn)行滅菌處理，于室溫自然冷卻至40℃以下備用。在超凈工作臺(tái)下用接種環(huán)挑取適量EM 菌接種至50 mL 經(jīng)滅菌的EM培養(yǎng)基中，將錐形瓶口用棉花和報(bào)紙包扎緊且混勻后，于37℃恒溫培養(yǎng)箱中以200 r.min-1振蕩培養(yǎng)3 d。培養(yǎng)結(jié)束后，于4℃、10 000 r.min-1離心5 min，以無(wú)菌生理鹽水充分洗滌后制成約1010CFU.mL-1的菌懸液備用。

1．2．2 制肥工藝的單因素試驗(yàn) 稱取一定量的銀杏葉渣，置于250 mL 錐形瓶中，依次加入無(wú)菌水、葡萄糖，調(diào)節(jié)pH 值為7．20。放進(jìn)高壓滅菌鍋中進(jìn)行滅菌處理，待其自然冷卻至室溫后接入1．2．1 中制得的EM菌懸液1．00 mL，然后在37℃條件下進(jìn)行恒溫發(fā)酵，以腐殖酸含量作為衡量發(fā)酵程度的指標(biāo)。固定初始條件為發(fā)酵時(shí)間2 d、液料比1 mL.g-1、銀杏葉渣添加量10．00 g、葡萄糖添加量0．50 g，研究發(fā)酵時(shí)間(2、4、6、8、10 d)、液料比(1．0、1．5、2．0、2．5、3．0 mL.g-1)、銀杏葉渣添加量(10、15、20、25、30 g)、葡萄糖添加量(0．5、1．0、1．5、2．0、2．5 g)的變化對(duì)腐殖酸含量的影響。根據(jù)公式計(jì)算腐殖酸含量[7]：

式中，A1表示空白組消耗的硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液體積，mL；A2表示樣品消耗的硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，mL；C 表示硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，mol.L-1；K 表示純腐殖酸中碳的系數(shù)，參考泥炭腐殖酸約為0．51；M 為樣品質(zhì)量，g；A0為風(fēng)干樣品的含水量，%。

1．2．3 制肥工藝的正交試驗(yàn) 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以發(fā)酵時(shí)間、液料比、銀杏葉渣添加量、葡萄糖添加量設(shè)置4 因素3 水平正交試驗(yàn)，根據(jù)腐殖酸的含量確定銀杏葉渣制肥的最適發(fā)酵參數(shù)。隨后對(duì)最適發(fā)酵參數(shù)進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證。正交試驗(yàn)的因素水平見表1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表Table 1 Factor and level of orthogonal test

1.3 測(cè)定項(xiàng)目與方法

1．3．1 生物有機(jī)肥的相關(guān)成分測(cè)定 銀杏葉渣制肥相關(guān)成分的測(cè)定按《NY 884-2012 生物有機(jī)肥》[8]執(zhí)行，測(cè)定其有效活菌數(shù)和有機(jī)質(zhì)含量，以及砷、鎘、鉛、鉻、汞5 種重金屬含量。

1．3．2 種子發(fā)芽率的測(cè)定 將銀杏葉渣制肥和去離子水制成水浸液等份放入3 個(gè)培養(yǎng)皿中，設(shè)置0．1、0．2、0．4、0．8、1．6 g.mL-15 個(gè)濃度梯度，以去離子水為對(duì)照(CK)，將小白菜種子分別于不同濃度水浸液中浸泡8 h 后統(tǒng)一取出。每個(gè)發(fā)芽床上各放置50 粒種子，然后用鑷子將小白菜種子的腹溝朝下，再將其整齊的排列在發(fā)芽床上，以避免相互之間接觸，防止發(fā)霉的種子感染健康種子。之后蓋上培養(yǎng)皿蓋，將其置于28±1℃恒溫光照條件下培養(yǎng)3 d。發(fā)芽期間每天觀察發(fā)芽情況以及發(fā)芽床的濕潤(rùn)情況，并及時(shí)補(bǔ)充缺失的水分，以胚根達(dá)到或超過種子長(zhǎng)度、胚芽達(dá)到種子長(zhǎng)度1/2判定為發(fā)芽，測(cè)定根長(zhǎng)，根據(jù)公式計(jì)算種子發(fā)芽指數(shù)[9]：

1．3．3 幼苗生長(zhǎng)測(cè)定 設(shè)置0．1、0．2、0．4、0．8 g.mL-14 個(gè)濃度梯度的銀杏葉渣肥制水浸液，以去離子水為對(duì)照(CK)，將其加至瓶底鋪有2 張濾紙的圓柱玻璃瓶中，選取5 顆萌發(fā)程度相當(dāng)?shù)姆N子放入瓶?jī)?nèi)，定時(shí)補(bǔ)充水浸液，5 d 后分別測(cè)定小白菜幼苗的苗長(zhǎng)和根長(zhǎng)。平行試驗(yàn)3 次。

1．3．4 根系酶活測(cè)定 將1．3．3 中水培5 d 后的小白菜幼苗從培養(yǎng)瓶中取出，轉(zhuǎn)移過程中注意保護(hù)其根部，將根部用超純水洗凈后用吸水紙吸干，加入相應(yīng)體積提取液，于冰水浴環(huán)境下制成組織勻漿。根系脫氫酶活性的測(cè)定采用TTC 法[10]，硝酸還原酶活性的測(cè)定采用α-萘胺法[11]。

1．3．5 品質(zhì)指標(biāo)的測(cè)定 取適量1．3．4 中采集的小白菜幼苗，洗凈后于70℃電熱鼓風(fēng)干燥箱中干燥至恒重備用?？扇苄蕴呛康臏y(cè)定采用蒽酮比色法[12]，游離脯氨酸含量的測(cè)定采用茚三酮顯色法[13]。

1．3．6 盆栽出苗率及生物量的測(cè)定 設(shè)置生物有機(jī)肥添加量10%為底肥(T1)、氮肥-生物有機(jī)肥復(fù)合處理為底肥(N 施入量為100 mg.kg-1，生物有機(jī)肥添加量為5%，T2)，以不施肥的土壤(CK1)和以氮肥為底肥(N 施入量為200 mg.kg-1，以NH4H2PO4和尿素的形式加入，CK2)的土壤作為對(duì)照。每盆裝培養(yǎng)土2 kg，均勻播種50 粒小白菜種子，重復(fù)3 次。播種后灑水至土壤濕潤(rùn)，之后視土壤狀況適時(shí)補(bǔ)水。1 周后計(jì)算出苗率并間苗，每盆留長(zhǎng)勢(shì)均勻的小白菜幼苗15 株。20 d 后取樣，將小白菜根部用超純水洗凈后用吸水紙吸干，測(cè)定小白菜生物量(包括根鮮重、莖葉鮮重和總鮮重)。

1.4 數(shù)據(jù)分析

各試驗(yàn)組均平行3 次，取其平均值。利用Origin 2018 作圖，并用SPSS 19．0 采用Duncan 法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)(P＜0．05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 銀杏葉渣制肥的單因素試驗(yàn)

由圖1-A 可知，初期腐殖酸含量隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，當(dāng)發(fā)酵時(shí)間達(dá)到6 d 后其含量開始降低。銀杏葉廢渣中的無(wú)機(jī)鹽和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)隨著發(fā)酵的進(jìn)行不斷被釋放，6 d 后已趨于飽和，繼續(xù)延長(zhǎng)發(fā)酵時(shí)間腐殖酸會(huì)逐漸被代謝分解。因此確定發(fā)酵時(shí)間6 d 附近為正交試驗(yàn)研究區(qū)間。

由圖1-B 可知，隨著液料比的增加，樣品中的腐殖酸含量呈先升后降的趨勢(shì)。當(dāng)液料比過小時(shí)，樣品發(fā)酵產(chǎn)生的腐殖酸溶出不充分。而當(dāng)液料比大于2．0 mL.g-1后，腐殖酸的溶出達(dá)到飽和，其在水相中的溶解量也會(huì)增加，使得樣品的實(shí)測(cè)值有一定降低。因此確定液料比2．0 mL.g-1附近為正交試驗(yàn)研究區(qū)間。

由圖1-C 可知，樣品中腐殖酸的含量隨著銀杏葉渣用量的增加先升高后降低。當(dāng)銀杏葉渣用量超過25 g 后，體系中的發(fā)酵菌種數(shù)量和營(yíng)養(yǎng)不足以支持發(fā)酵底物的增加，實(shí)測(cè)腐殖酸的含量隨之降低。故確定銀杏葉渣用量25 g 附近為正交試驗(yàn)研究區(qū)間。

由圖1-D 可知，葡萄糖用量對(duì)樣品中腐殖酸的含量影響較大。隨著葡萄糖用量的增加，樣品中的腐殖酸含量迅速提升，當(dāng)葡萄糖添加量超過1．5 g 后，腐殖酸的含量開始下降。這可能是由于添加過多的葡萄糖以后，其在水中的溶解度達(dá)到了飽和，影響了銀杏葉渣中其他有機(jī)成分的溶出，進(jìn)而減少了腐殖酸的生成。

圖1 發(fā)酵時(shí)間(A)、液料比(B)、銀杏葉渣用量(C)和葡萄糖用量(D)對(duì)腐殖酸含量的影響Fig.1 Effects of fermentation time(A), solid-liquid ratio(B), addition amount of residue of Ginkgo biloba L.(C) and addition amount of glucose(D) on contents of humic acids

2.2 銀杏葉渣制肥的正交試驗(yàn)

正交試驗(yàn)和方差分析結(jié)果如表2 所示。通過極差分析發(fā)現(xiàn)，各因素對(duì)腐殖酸含量影響大小的排序?yàn)椋浩咸烟怯昧?D)＞銀杏葉渣用量(C)＞發(fā)酵時(shí)間(A)＞液料比(B)，液料比與方差分析的結(jié)果一致；且銀杏葉渣用量(C)和葡萄糖用量(D)對(duì)試驗(yàn)影響顯著(P＜0．05)。進(jìn)一步比較均值篩選出最優(yōu)水平為A2B3C2D2，即發(fā)酵時(shí)間6 d、液料比2．5 mL.g-1、銀杏葉渣用量25 g、葡萄糖用量1．5 g。在該條件下進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，平行3 次，測(cè)定腐殖酸平均含量為39．36%。將配方統(tǒng)一換算為百分?jǐn)?shù)表示，即銀杏葉渣添加比例26．95%、去離子水添加比例71．43%、葡萄糖添加比例1．62%。

2.3 銀杏葉渣肥的相關(guān)成分的測(cè)定

由表3 可知，與《NY 884-2012 生物有機(jī)肥》[8]相比，以銀杏葉渣為基質(zhì)通過微生物發(fā)酵所制有機(jī)肥樣品的有效活菌數(shù)和有機(jī)質(zhì)含量指標(biāo)明顯優(yōu)越，且砷、鎘、鉛、鉻和汞均處于安全限量標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)，表明該有機(jī)肥樣品具有良好的應(yīng)用前景。

表2 發(fā)酵工藝優(yōu)化正交試驗(yàn)直觀分析表Table 2 Visual analysis table of orthogonal experiment for fermentation process optimization

表3 有機(jī)肥的相關(guān)成分(以干基計(jì))Table 3 Related components of organic fertilizer (dry basis)

2.4 銀杏葉渣制肥對(duì)小白菜種子萌發(fā)的影響

由圖2 可知，銀杏葉渣有機(jī)肥濃度的改變對(duì)小白菜種子發(fā)芽指數(shù)有顯著影響。在一定范圍內(nèi)隨其濃度的增加，小白菜種子發(fā)芽指數(shù)逐漸升高，當(dāng)濃度超過0．4 g.mL-1后，發(fā)芽指數(shù)開始下降，濃度超過0．8 g.mL-1后下降幅度明顯增加。綜合來看，該銀杏葉渣生物有機(jī)肥使用量在0．1 ～0．8 g.mL-1范圍內(nèi)具有顯著的促生潛力。

2.5 銀杏葉渣制肥對(duì)小白菜幼苗生長(zhǎng)的影響

根長(zhǎng)和苗長(zhǎng)(地上部高)是體現(xiàn)植物初期生長(zhǎng)狀態(tài)的直觀指標(biāo)，反映當(dāng)前生境對(duì)植物生長(zhǎng)的適宜性。由圖3 可知，與CK 相比，隨著銀杏葉渣有機(jī)肥濃度(0～0．4 g.mL-1)的提升，小白菜幼苗的根長(zhǎng)和苗長(zhǎng)顯著提高。當(dāng)濃度達(dá)到0．4 g.mL-1時(shí)，根長(zhǎng)和苗長(zhǎng)分別增加約39．25%和68．50%。繼續(xù)提高肥料濃度時(shí)，根長(zhǎng)和苗長(zhǎng)變化不顯著?？梢?，制得的生物有機(jī)肥對(duì)小白菜幼苗的根系擴(kuò)散和植株生長(zhǎng)具有明顯的正向促進(jìn)作用。

根系脫氫酶和硝酸還原酶是對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用的酶類[14]。由圖4 可知，與CK 相比，銀杏葉渣生物有機(jī)肥明顯提高了小白菜幼苗的根系脫氫酶和硝酸還原酶活性。當(dāng)水浸液中有機(jī)肥濃度為0．4 g.mL-1時(shí)，小白菜幼苗的根系脫氫酶和硝酸還原酶活性分別較CK 提升約33．48%和27．84%，繼續(xù)提高有機(jī)肥濃度則對(duì)兩種酶的活性影響不大。可見，銀杏葉渣制肥對(duì)植物生長(zhǎng)有關(guān)的主要酶類具有正向調(diào)控作用。

圖2 不同處理水平對(duì)小白菜種子發(fā)芽指數(shù)的影響Fig.2 Effects of different treatment levels on germination index from seeds of Brassica chinensis L.

圖3 不同處理水平對(duì)小白菜幼苗根長(zhǎng)和苗長(zhǎng)的影響Fig.3 Effects of different treatment levels on root and seedling length from seedlings of Brassica chinensis L.

脯氨酸和可溶性糖是植物生長(zhǎng)過程中重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，其累積量與植物的抗逆性呈相關(guān)[15]。黃酮類化合物和有機(jī)酸是植物中重要的次生代謝產(chǎn)物，也是對(duì)人體健康有益的活性成分，其含量與蔬菜品質(zhì)密切相關(guān)[16-17]。由圖5 可知，銀杏葉渣制肥對(duì)小白菜幼苗中脯氨酸、可溶性糖、總黃酮和可滴定酸的積累均有促進(jìn)作用。當(dāng)有機(jī)肥濃度為0．4 g.mL-1時(shí)，小白菜幼苗中脯氨酸、可溶性糖、總黃酮和可滴定酸含量比CK，分別顯著提升約47．95%、213．10%、42．93%和69．75%，繼續(xù)增加有機(jī)肥濃度則對(duì)其含量影響不顯著。

圖4 不同處理水平對(duì)根系脫氫酶和硝酸還原酶活性的影響Fig.4 Effects of different treatment levels on activities of root dehydrogenase and nitrate reductase

2.6 銀杏葉渣制肥對(duì)小白菜出苗率及幼苗生物量的影響

由表4 可知，施用不同底肥對(duì)盆栽小白菜的出苗率和生物量有較大影響。T1(以生物有機(jī)肥為底肥)的平均出苗率和生物量顯著高于CK1(空白土壤)和CK2(以氮肥為底肥)，平均出苗率分別提高14．00 和6．66 個(gè)百分點(diǎn)，莖葉鮮重和根鮮重依次分別提升85．86%、43．76%(CK1、CK2)和71．43%、20．00%。相比T2(以生物有機(jī)-氮復(fù)合肥為底肥)，T1的平均出苗率和根鮮重?zé)o顯著差異，但莖葉鮮重顯著提高11．13%，總鮮重顯著提高10．77%。表明銀杏葉渣生物有機(jī)肥對(duì)小白菜的促生作用明顯，且優(yōu)于傳統(tǒng)氮肥。

3 討論

利用農(nóng)業(yè)廢棄物發(fā)酵制備生物有機(jī)肥是實(shí)現(xiàn)其綜合利用的有效途徑之一。相關(guān)研究表明，以豆粕、杜仲葉、菠蘿葉等為原料所制備生物有機(jī)肥對(duì)蔬菜具有明顯的促生效果[18-21]，而銀杏葉渣中富含氮、磷、鉀等多種微量元素，可將其作為制備優(yōu)質(zhì)有機(jī)肥的原料[22]。基于此，本研究以腐殖酸含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)優(yōu)化EM 菌種發(fā)酵銀杏葉渣制備生物有機(jī)肥的工藝參數(shù)，確定該有機(jī)肥最適固態(tài)發(fā)酵工藝為：銀杏葉渣添加比例26．95%、去離子水添加比例71．43%、葡萄糖添加比例1．62%、發(fā)酵時(shí)間6 d。肥效驗(yàn)證結(jié)果表明，采用最適固態(tài)發(fā)酵工藝制備得到的銀杏葉渣生物有機(jī)肥可有效提高小白菜種子的發(fā)芽指數(shù)，促進(jìn)小白菜幼苗根系和植株的發(fā)育，其主要品質(zhì)指標(biāo)符合《NY 884-2012 生物有機(jī)肥》標(biāo)準(zhǔn)[8]。

圖5 不同處理水平對(duì)脯氨酸、可溶性糖、總黃酮和可滴定酸含量的影響Fig.5 Effects of different treatment levels on contents of proline, soluble sugar, total flavonoids and titratable acid

表4 不同底肥對(duì)小白菜出苗率及幼苗生物量的影響Table 4 Effect of different base fertilizers on the emergence rate and biomass of Brassica chinensis L.

植物種子萌發(fā)過程中，胚乳中所含的蛋白質(zhì)、淀粉等發(fā)生水解生成氨基酸、單糖等小分子化合物，然后再經(jīng)過合成作用構(gòu)建植物體[23]。范倩等[24]使用由混合菌劑腐熟紫莖澤蘭所制備的有機(jī)肥(EDA)處理小麥種子，使種子發(fā)芽率、苗高、發(fā)芽指數(shù)及活力指數(shù)均得到有效提高，并觀察到EDA 對(duì)小麥種子胚乳中的蛋白質(zhì)、淀粉和六磷酸肌醇等大分子物質(zhì)水解表現(xiàn)出明顯的促進(jìn)作用。本試驗(yàn)中，有機(jī)肥處理組小白菜幼苗體內(nèi)的脯氨酸、可溶性糖含量均顯著高于CK，推測(cè)該有機(jī)肥也是通過加速種子胚乳中大分子物質(zhì)的水解，增強(qiáng)構(gòu)建植物體所需基礎(chǔ)物質(zhì)的供應(yīng)，從而提高了小白菜種子的發(fā)芽指數(shù)和幼苗生長(zhǎng)速率。

此外，根系中所含的多種呼吸酶對(duì)植物的生長(zhǎng)也具有關(guān)鍵調(diào)控作用，酶的活性與植物體內(nèi)物質(zhì)轉(zhuǎn)換、能量代謝等過程密切相關(guān)[25-26]。研究發(fā)現(xiàn)根系脫氫酶的活性可直接影響植株地上部的營(yíng)養(yǎng)累積狀況，而硝酸還原酶活性是反映植株對(duì)生境中NO-3-N 同化速率的直觀指標(biāo)[27]，參與了植物氮素代謝通路中催化硝酸鹽還原成亞硝酸鹽的反應(yīng)[28]。本試驗(yàn)中，隨著銀杏葉渣生物有機(jī)肥濃度的增加，受試小白菜幼苗的根系脫氫酶、硝酸還原酶活性和總黃酮、可滴定酸含量均呈升高趨勢(shì)，與上述研究相互補(bǔ)充、相互驗(yàn)證。推測(cè)是因?yàn)槲⑸镌诎l(fā)酵銀杏葉渣的過程中生成的腐植酸等促生因子，促使相關(guān)酶的活性發(fā)生改變，最終影響植物養(yǎng)分吸收、營(yíng)養(yǎng)積累等過程。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)銀杏葉渣生物有機(jī)肥的水浸液對(duì)小白菜種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)具有顯著的促進(jìn)作用，小白菜幼苗根系脫氫酶和硝酸還原酶得到激活，幼苗體內(nèi)總黃酮、可滴定酸含量提高，改善了小白菜的發(fā)育水平和品質(zhì)。本研究為回收利用制藥工業(yè)產(chǎn)生的銀杏葉殘?jiān)峁┝诵滤悸?，但有關(guān)該肥料對(duì)食用農(nóng)產(chǎn)品促生作用的田間試驗(yàn)以及工業(yè)化制肥還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

本研究采用正交試驗(yàn)方法確定了銀杏葉渣制備有機(jī)肥的最佳工藝為：銀杏葉渣添加比例26．95%、去離子水添加比例71．43%、葡萄糖添加比例1．62%、EM菌發(fā)酵時(shí)間為6 d，該條件下肥料的腐殖酸含量為39．27%，有效活菌數(shù)、有機(jī)質(zhì)和重金屬含量指標(biāo)符合《NY 884-2012 生物有機(jī)肥》標(biāo)準(zhǔn)。所制銀杏葉渣生物有機(jī)肥使用量在0．1 ～0．8 g.mL-1范圍內(nèi)具有顯著的促生潛力，其水浸液顯著提高了小白菜種子的發(fā)芽指數(shù)，促進(jìn)了小白菜幼苗根系和植株的發(fā)育；小白菜幼苗根際脫氫酶和硝酸還原酶得到激活，幼苗體內(nèi)總黃酮、可滴定酸含量提高，改善了小白菜的發(fā)育水平和品質(zhì)。