狹果茶藨子果實(shí)多糖提取及其抗氧化和流變特性

喬楊波，蔡庭秀，劉 哲，趙永珍，哈生云，葉 英,3*

1青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院，西寧 810016；2青海圣航農(nóng)牧科技開發(fā)有限公司，尖扎 811200；3青海省青藏高原農(nóng)產(chǎn)品加工重點(diǎn)試驗(yàn)室，西寧 810016

狹果茶藨子(RibesstenocarpumMaxim，RSM)屬虎耳草科茶藨子屬植物，生于海拔2 800 m以下的山坡灌叢、雜木林下或山溝中，是原產(chǎn)于起北歐的一種木本灌木。在中國(guó)主要分布于四川、甘肅、陜西、青海等地。全世界約有160種，中國(guó)有59種30變種，僅青海就有11種1個(gè)變種[1-3]?！毒е楸静荨分杏涊d茶藨子屬植物具有滋補(bǔ)止瀉、斂毒、除黃水之效，并能收斂各種脈管病，與樹莓、藍(lán)莓、山葡萄、沙棘等尚未被完全開發(fā)的野生山果一起并稱為第三代水果[4]。茶藨子屬植物中富含維生素C，總酚、黃酮、多糖、多糖等多種生物活性物質(zhì)，具有多種生物活性，如調(diào)節(jié)腸道菌群平衡[5]，提高機(jī)體抗氧化能力，抑菌[6]等。同時(shí)還可降低患心血管疾病[3]、癌癥、神經(jīng)退化性疾病、免疫系統(tǒng)疾病[5]、糖尿病、慢性風(fēng)濕病、關(guān)節(jié)炎和炎癥性等疾病的風(fēng)險(xiǎn)[7]。

研究表明，植物源多糖具有較強(qiáng)的親水性[8]、較高的熱穩(wěn)定性[9]以及優(yōu)良的流變學(xué)性質(zhì)[10]，致使其具有良好的加工性能，因而廣泛的應(yīng)用于食品加工當(dāng)中。同時(shí)因植物源多糖具有多種重要的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗病毒、抗癌、降血糖，提高機(jī)體免疫力[11-14]等，因而在保健品和醫(yī)藥工業(yè)中也具有潛在的應(yīng)用前景。青海地區(qū)狹果茶藨子資源豐富，但是均為野生狀態(tài)[4]。多糖作為狹果茶藨子果實(shí)中一類重要的生物活性物質(zhì)，尚未見有關(guān)其研究的相關(guān)報(bào)道。本研究采用青海當(dāng)?shù)鬲M果茶藨子果實(shí)為原料，采用超聲輔助提取法，設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn)對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，具有提取時(shí)間短、操作簡(jiǎn)單、原料利用率高、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)[15]。同時(shí)就提取后的狹果茶藨子果實(shí)多糖的體外抗氧化活性及流變特性予以探討，旨在從狹果茶藨子果實(shí)中開發(fā)新型的天然抗氧化劑和增稠劑，進(jìn)一步擴(kuò)大狹果茶藨子在食品領(lǐng)域當(dāng)中的應(yīng)用，發(fā)揮其潛在的生物價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

狹果茶藨子(采摘自青?；ブ楣锑l(xiāng))；抗壞血酸、DPPH試劑(南京奧多福尼生物科技有限公司)；ABTS試劑(北京酷爾化學(xué)科技有限公司)；D101大孔吸附樹脂(東鴻化工有限公司)；無(wú)水乙醇、氯仿、正丁醇、氫氧化鈉、濃鹽酸、濃硫酸、苯酚等均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

HH-4S數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市友聯(lián)儀器研究所)；SB-3200DT超聲波清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)；HJ-4A數(shù)顯恒溫多頭磁力攪拌器(崢嶸儀器)；KC-130小型粉碎機(jī)(北京開創(chuàng)同和科技發(fā)展有限公司)；UV-2 600紫外可見分光光度計(jì)(島津企業(yè)管理有限公司)；電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；GS55-9冷凍干燥機(jī)(基因有限公司)；來(lái)美ETT CP 5000 流變儀(廣州來(lái)美科技有限公司)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 狹果茶藨子果實(shí)多糖的提取

狹果茶藨子果實(shí)干燥粉碎后過(guò)60目篩，去除籽粒。準(zhǔn)確稱取一定量的果粉，按料液比1∶10加入95%的乙醇溶液靜置過(guò)夜。收集沉淀后在55 ℃烘箱中干燥。準(zhǔn)確稱取干燥后的狹果茶藨子果實(shí)粉末，按料液比1∶30 g/mL，溫度40 ℃，時(shí)間30 min，對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖進(jìn)行超聲輔助提取。將提取后的多糖濾液濃縮至原體積的三分之一，按體積比3∶1加入Sevege試劑進(jìn)行除蛋白處理，重復(fù)上述過(guò)程，直到無(wú)蛋白析出。使用D101大孔吸附樹脂對(duì)脫蛋白后的多糖溶液進(jìn)行脫色，將脫色后溶液濃縮至原體積的三分之一，加入4倍體積的無(wú)水乙醇使多糖沉淀。在4 ℃冰箱中靜置過(guò)夜，對(duì)沉淀進(jìn)行真空冷凍干燥即得狹果茶藨子果實(shí)粗多糖提取物(R.stenocarpumpolysaccharides，RPs)。

1.3.2 狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量的計(jì)算

參考文獻(xiàn)[16]，采用苯酚-硫酸法繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。以吸光值y與葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品濃度x(μg/mL)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：y=0.057 2x-0.112，R2=0.999，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中多糖濃度，按公式計(jì)算多糖提取量。

式中：C為標(biāo)準(zhǔn)曲線查得得樣品多糖濃度(μg/mL)；V為多糖液體積(mL)；n為稀釋倍數(shù)；m為狹果茶藨子果實(shí)粉末質(zhì)量(g)。

1.3.3 狹果茶藨子果實(shí)多糖提取工藝優(yōu)化

1.3.3.1 狹果茶藨子果實(shí)多糖提取單因素試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取1.0 g狹果茶藨子果實(shí)粉末，以超聲輔助熱水浸提法對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖進(jìn)行提取，超聲功率為300 W。固定其他因素及相應(yīng)水平，以狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量為考察指標(biāo)，研究提取溫度、時(shí)間、料液比對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量的影響。設(shè)計(jì)各因素水平為：提取時(shí)間：20、30、40、50、60 min；料液比：1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50 g/mL。提取溫度：30、40、50、60、70 ℃。

1.3.3.2 狹果茶藨子果實(shí)多糖提取響應(yīng)面試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，以狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量為響應(yīng)值(Y)，以提取溫度(A)、提取時(shí)間(B)、提取料液比(C)為試驗(yàn)因素，利用Design-Expert 7.0.0軟件設(shè)計(jì)三因素三水平Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。因素水平表見表1。

表1 因素水平表Table 1 Fctors and levels

1.3.4 狹果茶藨子果實(shí)多糖的流變特性研究

1.3.4.1 多糖濃度對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖表觀粘度的影響

參考文獻(xiàn)[10]，將RPs配制成0.1%、0.5%、1.0%(W/V)的溶液，以0.1%(W/V)的羧甲基纖維素鈉溶液作為對(duì)照。設(shè)置剪切溫度為30 ℃，剪切速率掃描范圍為150～1 000 s-1，研究不同多糖濃度對(duì)表觀粘度的影響。

1.3.4.2 剪切溫度對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖表觀粘度的影響

參考文獻(xiàn)[17]，將RPs配制成0.1%、0.5%、1.0%(W/V)的溶液，以0.1%(W/V)的羧甲基纖維素鈉溶液作為對(duì)照。設(shè)置剪切溫度范圍為30～80 ℃，剪切速率為500 s-1，研究剪切溫度對(duì)多糖表觀粘度的影響。

1.3.4.3 pH對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖表觀粘度的影響

參考文獻(xiàn)[18]，以1.0%(W/V)RPs溶液為研究對(duì)象，用0.1 M HCl與0.1 M NaOH調(diào)節(jié)pH至3、7、11，設(shè)置剪切溫度為40 ℃，剪切速率掃描范圍為150～1 000 s-1，研究pH對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖表觀粘度的影響。

1.3.5 狹果茶藨子果實(shí)多糖的抗氧化活性研究

1.3.5.1 DPPH自由基清除率的測(cè)定

參考文獻(xiàn)[19]，精確稱取DPPH，用無(wú)水乙醇將其配置為0.2 mM。精確稱取RPs，用蒸餾水將其稀釋到不同的質(zhì)量濃度(1.00～0.03 mg/mL)，與上述DPPH溶液按體積比1∶1混合，室溫下避光靜置30 min后，在517 nm處測(cè)定吸光度值，以抗壞血酸為陽(yáng)性對(duì)照，并按公式計(jì)算DPPH自由基清除率。

式中Asample為DPPH溶液的吸光值；Acontrol為樣品加DPPH溶液的吸光值。

1.3.5.2 羥自由基清除率測(cè)定

參考文獻(xiàn)[19]，精確稱取RPs，用蒸餾水將其稀釋到不同的質(zhì)量濃度(1.00～0.03 mg/mL),精確吸取0.1 mL待測(cè)樣液，依次加入2 mL FeSO4(6 mM)與2 mL H2O2(6 mM)，混勻后在室溫下靜置10 min，加入2 mL水楊酸-乙醇溶液(6 mM)，于50 ℃水浴30 min后，在510 nm處測(cè)定吸光值，以抗壞血酸為陽(yáng)性對(duì)照，按公式計(jì)算羥自由基清除率。

式中：A1為樣品吸光值；A2為不含H2O2時(shí)樣品的吸光值；A0為空白對(duì)照的吸光值。

1.3.5.3 總還原能力測(cè)定

參考文獻(xiàn)[19]，精確稱取RPs，用蒸餾水將其稀釋到不同的質(zhì)量濃度(1.00～0.03 mg/mL),精確吸取0.5 mL待測(cè)樣液，依次加入2 mL 0.2 M pH 6.6 的PBS緩沖液與2.5 mL 1%(W/V)的K3Fe(CN)6，50 ℃水浴20 min，后加入2.5 mL 10%(W/V)三氯乙酸，3 000 rpm離心10 min后取上清液2.5 mL，依次加入2.5 mL蒸餾水與0.5 mL 0.1%(W/V)的FeCl3，室溫靜置10 min后于700 nm處測(cè)定吸光值。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 狹果茶藨子果實(shí)多糖提取單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 料液比對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量的影響

固定提取時(shí)間40 min，提取溫度為40 ℃，研究料液比對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量的影響，試驗(yàn)結(jié)果見圖1。由圖1可知，當(dāng)料液比為1∶30 g/mL時(shí)，狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量達(dá)到最大值。此后隨著料液比的不斷增大，狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。推測(cè)這可能是由于料液比的不斷增大，水分與狹果茶藨子果實(shí)粉末的濃度差越大，傳質(zhì)驅(qū)動(dòng)力越強(qiáng)，多糖可以有效的從原料中溶解出來(lái)。然而隨著料液比的進(jìn)一步增大，此時(shí)由于多糖不斷從果實(shí)中溶出，溶劑的粘度也隨之加強(qiáng)，導(dǎo)致超聲波的空化效應(yīng)減弱，也會(huì)降低多糖提取量。因此選取料液比1∶30 g/mL作為狹果茶藨子果實(shí)多糖最佳提取條件。

圖1 料液比對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量的影響Fig.1 Effect of material-liquid ratio on the content of polysaccharides in R.stenocarpum

2.1.2 提取時(shí)間對(duì)對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量的影響

固定提取溫度40 ℃，料液比1∶30 g/mL，研究提取時(shí)間對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量的影響，試驗(yàn)結(jié)果見圖2。由圖2可知，在提取時(shí)間為30 min時(shí)，狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量達(dá)到最大值。此后隨著溫度的不斷上升，多糖提取量逐漸下降，推測(cè)這可能是由于提取時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致多糖降解以及多糖分子結(jié)構(gòu)的變化，致使多糖提取量降低。因此選取30 min作為狹果茶藨子果實(shí)多糖最佳提取時(shí)間以進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

圖2 提取時(shí)間對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量的影響Fig.2 Effect of extraction time on the content of polysaccharides in R.stenocarpum

2.1.3 提取溫度對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量的影響

固定提取時(shí)間30 min，料液比1∶30 g/mL，研究提取溫度對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量的影響，試驗(yàn)結(jié)果見圖3。由圖3可知，當(dāng)提取溫度為40 ℃時(shí)，狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量達(dá)到最大。此后隨著溫度的不斷上升，多糖提取量逐漸下降。推測(cè)這可能是由于提取溫度的不斷增大，水的電離常數(shù)變大，水當(dāng)中H+與OH-離子的濃度上升，導(dǎo)致水的極性下降，進(jìn)而會(huì)致使多糖提取量下降[14]，故選取40 ℃作為狹果茶藨子果實(shí)多糖的最佳提取溫度。

圖3 提取溫度對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量的影響Fig.3 Effect of extraction temperature on the content of polysaccharides in R.stenocarpum

2.2 超聲法提取狹果茶藨子果實(shí)多糖提取響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果表Table 2 The table of response surface test result

續(xù)表2(Continued Tab.2)

外部融資是采用企業(yè)之外的資金來(lái)進(jìn)行并購(gòu)活動(dòng)，一般采用債券融資和股權(quán)融資兩種形式進(jìn)行。債券融資可以帶來(lái)一定的節(jié)稅效果。借款利息可以在上稅之前進(jìn)行扣除。但是負(fù)債會(huì)使得企業(yè)有還款壓力，負(fù)債越多，企業(yè)壓力越大，最后可能會(huì)使得企業(yè)資金周轉(zhuǎn)困難。股權(quán)融資是指企業(yè)通過(guò)增發(fā)等方式出售自己的股份。股票回購(gòu)沒有固定的期限，企業(yè)暫時(shí)沒有還款的壓力。但是會(huì)影響到之前股東所持有的比例，損失股東的權(quán)益。分配利潤(rùn)之后企業(yè)還需要支付股息，股息不可以在繳納企業(yè)所得稅之前扣除。

表3 方差分析結(jié)果Table 3 ANOVA results

表4 冪律模型擬合參數(shù)Table 4 Fitting parameters for the power law model

經(jīng)Design-Expert 7.0.0軟件進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)，得到圖4。由圖4a可知，響應(yīng)曲面隨著提取溫度和時(shí)間的不斷增大，狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量先快速上升而后快速降低，由此可知，適當(dāng)控制提取時(shí)間與料液比可提高狹果茶藨子果實(shí)多糖的提取量。此外，等高線圖呈橢圓形，說(shuō)明兩者交互作用明顯，說(shuō)明兩因素的交互作用對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量具有顯著性影響，這與表3方差分析結(jié)果一致。由圖4b可知，改變提取溫度和料液比，多糖提取量緩緩升高后緩慢下降，響應(yīng)曲面較為平緩，且顏色變化不明顯，等高線圖近似圓形，說(shuō)明兩者交互作用不顯著，與表3結(jié)果一致。由圖4c可知，隨著提取時(shí)間和料液比的不斷增加，多糖提取量升高后緩慢下降，響應(yīng)曲面較為平緩，且等高線圖呈橢圓形，故兩者對(duì)于狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量影響顯著。

圖4 各因素交互作用對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量的影響Fig.4 Effect of the interaction of various factors on the polysaccharides content of R.stenocarpum

2.2.2 最優(yōu)條件確定

根據(jù)響應(yīng)面優(yōu)化得到狹果茶藨子果實(shí)多糖提取最佳工藝條件為：提取溫度41.20 ℃、料液比1∶29.86、提取時(shí)間29.98 min，為方便試驗(yàn)操作修正為提取溫度40 ℃、料液比1∶30 g/mL、提取時(shí)間30 min，對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)得到狹果茶藨子果實(shí)多糖提取量為115.32±1.01 mg/g，與預(yù)測(cè)值114.88 mg/g無(wú)顯著差異。

2.3 狹果茶藨子果實(shí)多糖流變特性研究

2.3.1 多糖濃度對(duì)表觀粘度的影響

設(shè)置剪切溫度為30 ℃，剪切速率掃描范圍為150～1 000 s-1，多糖濃度對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖表觀粘度的影響見圖5。由圖5a可知，在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，隨著多糖濃度的不斷上升，狹果茶藨子果實(shí)多糖的表觀粘度不斷加大。同時(shí)隨著剪切速率的不斷增大，多糖溶液的表觀粘度不斷下降，溶液呈現(xiàn)剪切

圖5 狹果茶藨子果實(shí)多糖溶液的表觀粘度η(a)和應(yīng)力σ(b)對(duì)剪切速率的依賴性Fig.5 Shear rate dependence of apparent viscosity (a) and stress (b) of RPs

變稀的特性，表現(xiàn)出假塑性流體的特征。當(dāng)多糖濃度為1.0%(W/V)時(shí)，其表觀粘度與0.1%(W/V)羧甲基纖維素鈉表觀粘度接近，兩曲線趨勢(shì)也近乎一致，說(shuō)明多糖溶液在水相中形成了相互交織的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，改變了水溶液原有的性質(zhì)，使溶液表現(xiàn)出非牛頓流體行為的特征[20]。此外隨著剪切速率的增加，剪切應(yīng)力變化曲線(5b)顯示出與粘度曲線相反的趨勢(shì)，在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，狹果茶藨子果實(shí)多糖的濃度隨著剪切速率的增加而增加，同樣也表明了剪切稀化的特性。

將上述曲線擬合為冪律方程η=kγn-1，其中，η為剪切黏度，k為一致性指數(shù)，γ為剪切速率，n為流動(dòng)行為指數(shù)。n為0～1的流體被歸類為假塑性流體；如果n=1，則流體為牛頓流體。如表3所示，系統(tǒng)的n值范圍在0.472～0.543之間，且n值隨著多糖濃度的增大而不斷升高，顯示出更大的剪切稀化的能力，表明狹果茶藨子果實(shí)多糖為假塑性流體。

2.3.2 剪切溫度對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖表觀粘度的影響

設(shè)置剪切速率為500 s-1，設(shè)置剪切溫度范圍為30～80 ℃，研究剪切溫度對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖表觀粘度的影響，試驗(yàn)結(jié)果見圖6。由圖可知，隨著剪切溫度的不斷增加，多糖溶液的表觀粘度不斷降低，表現(xiàn)出假塑性流體的特征。推測(cè)這可能是由于高溫使得多糖分子結(jié)構(gòu)發(fā)生熱膨脹，分子間距離增大，弱化了多糖分子間的相互纏結(jié)，進(jìn)而致使多糖的表觀粘度呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)[20]。

圖6 剪切溫度對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖表觀粘度的影響Fig.6 Effect of shear temperature on the apparent viscosity of RPs

2.3.3 pH對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖表觀粘度的影響

設(shè)置剪切溫度40 ℃，研究不同剪切速率下pH對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖表觀粘度的影響，試驗(yàn)結(jié)果見圖7。狹果茶藨子果實(shí)多糖原有pH為4.8，推測(cè)這可能是由于樣品中單糖所含的官能團(tuán)所致，使溶液呈現(xiàn)弱酸性。同時(shí)由圖7可知，隨著pH的不斷降低，狹果茶藨子多糖表觀粘度呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，酸性環(huán)境提高了狹果茶藨子果實(shí)多糖的表觀粘度，堿性環(huán)境弱化了樣品原有的表觀粘度。推測(cè)這可能是由于H+與溶液當(dāng)中的負(fù)電荷結(jié)合，從而引起了絮凝反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致溶液的粘度上升。綜合圖5與圖7，發(fā)現(xiàn)過(guò)酸過(guò)堿的環(huán)境均能解離狹果茶藨子果實(shí)多糖的結(jié)構(gòu)，對(duì)溶液的表觀粘度造成一定影響。但由表5可知，過(guò)酸過(guò)堿的環(huán)境均不會(huì)改變狹果茶藨子果實(shí)多糖的假塑性流體的特征，其溶液具有較好的穩(wěn)定性，因而據(jù)此優(yōu)良的特性，可將RPs應(yīng)用于果蔬汁及乳制品飲料的加工過(guò)程當(dāng)中，在提高產(chǎn)品品質(zhì)穩(wěn)定性的同時(shí)亦可提高產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。

表5 冪律模型擬合參數(shù)Table 5 Fitting parameters for the power law model

圖7 pH對(duì)狹果茶藨子果實(shí)多糖表觀粘度的影響Fig.7 Effect of pH on the apparent viscosity of RPs

2.4 狹果茶藨子果實(shí)多糖的體外抗氧化活性研究

2.4.1 DPPH自由基清除率

DPPH作為一種穩(wěn)定且定性良好的固體自由基，廣泛的應(yīng)用于抗氧化能力的定量測(cè)定當(dāng)中。多糖中含有許多羥基，它們大多能提供氫來(lái)還原DPPH自由基，進(jìn)而達(dá)到清除自由基的作用。RPs與抗壞血酸對(duì)DPPH自由基的清除率如圖8所示。RPs清除DPPH自由基的IC50值為0.245 mg/mL。此外，在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，RPs對(duì)于DPPH自由基的清除率(y)與RPs的質(zhì)量濃度(x)呈三次依賴關(guān)系，表達(dá)式為：y=-19.397X3+3.900 0X2-0.267X2+77.013(R2=0.951 0)。當(dāng)多糖質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL時(shí)，樣品對(duì)于DPPH自由基的清除率達(dá)到最大，為61.32%±0.91%。

圖8 DPPH自由基清除率Fig.8 DPPH radical scavenging rate

2.4.2 羥自由基清除能力測(cè)定

羥自由基是一種反應(yīng)性極強(qiáng)的化學(xué)分子，作為損傷作用最強(qiáng)的自由基，能夠很容易的穿過(guò)生物的細(xì)胞膜，與多種生物分子發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致組織損傷或細(xì)胞死亡，因此清除羥自由基對(duì)于維持生命系統(tǒng)的正常工作起著十分重要的作用。RPs對(duì)羥自由基的清除率如圖9所示，在試驗(yàn)多糖質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著多糖質(zhì)量濃度的不斷降低，RPs對(duì)于羥自由基的清除能力呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)，且RPs對(duì)于羥自由基的清除率大于陽(yáng)性對(duì)照抗壞血酸。當(dāng)多糖質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL時(shí)，RPs對(duì)于羥自由基的清除能力均達(dá)到最大值，為40.27%±0.42%。RPs對(duì)羥自由基具有較強(qiáng)的清除能力，推測(cè)這可能是由于RPs改善了自由基的供氫能力，從而終止了自由基的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。但RPs對(duì)于羥自由基的清除作用機(jī)理尚不明確，還需進(jìn)一步的研究來(lái)闡明其可能的抗氧化機(jī)制。

圖9 羥自由基清除能力測(cè)定Fig.9 Determination of hydroxyl radical scavenging ability

2.4.3 總還原能力測(cè)定

抗氧化物質(zhì)具有還原能力，還原能力通常用于評(píng)估多糖潛在的抗氧化活性。通過(guò)測(cè)量700 nm下普魯士藍(lán)的形成來(lái)測(cè)定還原力，700 nm處的吸光度值越高，還原力越強(qiáng)。RPs的還原能力測(cè)定結(jié)果如圖10所示。由圖可知，RPs還原能力具有一定的劑量依賴性，即隨著多糖質(zhì)量濃度的不斷降低，樣品的還原能力呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，同時(shí)其還原能力明顯低于陽(yáng)性對(duì)照抗壞血酸。RPs還原能力的測(cè)定結(jié)果在某種程度上也代表了其潛在的抗氧化活性。

圖10 還原能力測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果Fig.10 Test result of reducing ability

3 結(jié)論

青藏高原野生茶藨子種類繁多，資源豐富，但缺少對(duì)其系統(tǒng)的研究與開發(fā)利用，此次試驗(yàn)對(duì)青藏高原地區(qū)狹果茶藨子果實(shí)多糖的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，并對(duì)其流變特性及體外抗氧化活性予以探討。通過(guò)響應(yīng)面法建立狹果茶藨子果實(shí)多糖提取工藝的回歸方程，得到最佳提取條件為：提取溫度40 ℃，料液比1∶30 g/mL，超聲浸提30 min。在此條件下可極大地提高多糖的得率，其提取量最高可達(dá)115.32 mg/g；通過(guò)流變學(xué)研究發(fā)現(xiàn)狹果茶藨子果實(shí)多糖溶液屬非牛頓流體，具有剪切稀化的特性，溶液的粘度隨著多糖濃度的升高而不斷增大，且過(guò)酸過(guò)堿的環(huán)境均不會(huì)對(duì)多糖溶液的流變特性造成巨大影響，溶液具有良好的穩(wěn)定性。說(shuō)明狹果茶藨子果實(shí)多糖具有良好的流變特性，有望從中開發(fā)新型的食品天然增稠劑或穩(wěn)定劑，拓寬狹果茶藨子果實(shí)多糖的應(yīng)用范圍；此外，體外抗氧化試驗(yàn)表明，狹果茶藨子果實(shí)多糖具有潛在的抗氧化活性，對(duì)DPPH自由基與羥自由基均具有一定的清除作用。此次試驗(yàn)可為青藏高原地區(qū)狹果茶藨子果實(shí)功能性食品的開發(fā)提供一定的理論依據(jù)，從而促進(jìn)茶藨子屬植物資源的開發(fā)利用。