動(dòng)物血清是血液凝固后析出的淡黃色透明液體。血清是不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。它主要包括水、白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白、甘油三酯、總膽固醇、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐、葡萄糖、多肽、脂肪、生長(zhǎng)因子、激素、無機(jī)物等物質(zhì)組成。
動(dòng)物血清廣泛應(yīng)用于各種血清學(xué)檢測(cè),如動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)中的動(dòng)物疫病診斷、重大動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫效果評(píng)價(jià)。寵物醫(yī)院對(duì)寵物進(jìn)行血液的生化成分、酶、抗體、病原等項(xiàng)目檢測(cè),大都以寵物血清為樣品,通過檢測(cè)寵物血清中的各種化學(xué)成分,可以判斷各器官衰竭、血液病變的嚴(yán)重程度,進(jìn)而采取相應(yīng)的治療措施。
但在實(shí)驗(yàn)室制備血清的過程中,因采血時(shí)機(jī)不當(dāng)、疾病感染或飼養(yǎng)失調(diào)、采血器材使用處置不妥等因素,制備的血清可能出現(xiàn)膠凍樣狀況,或完全凝結(jié)無血清析出,以及溶血、血脂、黃疸等異常現(xiàn)象,這對(duì)血清學(xué)試驗(yàn)及血清成分檢測(cè)造成嚴(yán)重影響或失敗。因此,確保血清質(zhì)量是血清學(xué)檢測(cè)成立的基礎(chǔ)條件,分析探討血清膠凍樣產(chǎn)生原因及消除方法,具有十分重要的臨床意義。
1.1采血時(shí)機(jī)不當(dāng) 動(dòng)物進(jìn)食后,各器官功能開始運(yùn)作,血中各種成分含量處于不穩(wěn)定狀態(tài),采血后易發(fā)生血清膠凍樣。
1.2病原感染或飼養(yǎng)不當(dāng) 某些病原感染或經(jīng)常飼喂高蛋白質(zhì)高脂肪飼料,造成動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)過剩、高血脂。血清中纖維蛋白和脂肪析出過多,血清呈乳白色膠凍樣。
1.3采血器材使用不妥 使用抗凝血管采血,不利于血液凝固;一次性真空采血器采血后活塞沒拉開一定空間,血清不易析出;使用一次性注射器采血后沒有取下針頭快速注入離心管,引起溶血或血清混濁;采血后放置時(shí)間過短,血液中纖維蛋白沒有完全析出、分層,過早離心。
1.4其他因素 采血后放置的環(huán)境溫度過低,如10 ℃左右,血清析出較差。因采血部位不同,有可能出現(xiàn)血清膠凍樣或混濁。
2.1選擇適宜的采血時(shí)間 通常選擇在早上或午后采血,動(dòng)物空腹或禁食數(shù)小時(shí)后進(jìn)行采血。
2.2加強(qiáng)免疫和科學(xué)飼養(yǎng) 制定各種動(dòng)物的免疫程序進(jìn)行免疫接種,確保動(dòng)物健康成長(zhǎng)。定制科學(xué)的飼喂方案,采用全價(jià)配合飼料,避免品種單一,避免動(dòng)物過于肥胖。
2.3采血操作規(guī)范化 一次性真空采血器采血后,要把采血器活塞往后拉至最大刻度,蓋上針頭帽,針頭朝上自然傾斜放置在燒杯內(nèi),留出空間使血清自然析出;采取的全血都應(yīng)避免陽光直射,在室溫下靜置2 h以上,待血清自然析出。若血清析出良好,可直接將血清轉(zhuǎn)入離心管,按實(shí)驗(yàn)室規(guī)定程序編號(hào)檢測(cè)。若血清析出較差,可放入37 ℃恒溫箱或25~37 ℃水浴1 h進(jìn)行預(yù)處理,再用離心機(jī)1500~2000 rpm作3~5 min離心。
2.4其他措施 如血清完全呈膠凍樣,可用一次性針頭小心地將膠凍樣物質(zhì)取出,再離心或靜置,即可分離出血清。寵物如某一采血部位分離的血清呈膠凍樣或混濁,可換肢采血,可分離到合適的血清,或吃兩周減肥處方糧再采血化驗(yàn)。
采集制備的血清還常出現(xiàn)溶血、黃疸、血脂等異常現(xiàn)象,應(yīng)盡量避免人為因素的影響,注意以下幾個(gè)方面。
3.1避免溶血 使用一次性注射器采血后,取下針頭將全血沿一次性離心管管壁緩慢轉(zhuǎn)注,蓋緊離心管管蓋,避免紅細(xì)胞擠壓破裂出現(xiàn)溶血。采血后使用血液樣品專用運(yùn)輸箱運(yùn)送全血樣品,輕拿輕放,靜置運(yùn)送,避免劇烈震蕩而溶血。
3.2注意溫濕度 分離血清時(shí),實(shí)驗(yàn)室溫度應(yīng)控制在21~25 ℃,相對(duì)濕度30%~70%。環(huán)境溫度在25 ℃以上時(shí),采集的血樣2 h以內(nèi)可以自然析出血清,但在10 ℃左右時(shí),血清很難自然析出,需放置在 37 ℃培養(yǎng)箱中1~2 h,才能析出血清。但血清不宜置于37 ℃太久,易出現(xiàn)渾濁或沉淀,影響血清質(zhì)量。血清在4 ℃冷藏, 時(shí)間最多不能超過1個(gè)月。若長(zhǎng)
時(shí)間保存則應(yīng)在-20 ℃冷凍保存,切忌反復(fù)凍融。血清由室溫轉(zhuǎn)入-20 ℃冷凍保存或由-20 ℃冷凍保存狀態(tài)轉(zhuǎn)入室溫時(shí)未經(jīng)過冷藏并經(jīng)搖勻處理,易出現(xiàn)沉淀。
3.3病原污染 當(dāng)血清被細(xì)菌污染嚴(yán)重,可變成黃色渾濁。采集到全血后,應(yīng)在6 h內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室,分離到血清后應(yīng)盡量在0.5 h內(nèi)操作完成檢測(cè)。
3.4采血量 大中動(dòng)物全血不少于5 mL,寵物不少于1 mL。為確保足夠的血清量,大中動(dòng)物析出的血清量應(yīng)不少于1 mL,禽類及寵物不少于0.5~1 mL。如采血量過少、采血時(shí)出血不連續(xù)、采用抗凝管儲(chǔ)血?jiǎng)t易出現(xiàn)血清量不足或膠凍樣。