楊 潔，劉 冰，李玉卡，陳素梅，趙永坡，趙 博

（1.石家莊市畜產(chǎn)品和獸藥飼料質(zhì)量檢測(cè)中心 050000；2.石家莊市農(nóng)林科學(xué)研究院 050000；3.石家莊市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 050000）

喹乙醇（Olaquindox），也叫倍育諾、快育靈，是德國(guó)拜耳公司于1967年研制合成的一種化學(xué)藥物，是喹啉的衍生物。其在常溫下為淡黃色結(jié)晶粉末，味苦、無(wú)臭。溶于熱水，冷水微溶，幾乎不溶于氯仿、甲醇和乙醇。在高溫下性質(zhì)穩(wěn)定，光照會(huì)引起其氧化。

喹乙醇能抑制革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌的生長(zhǎng)，可作抑菌劑使用。還能促進(jìn)蛋白質(zhì)同化，提高飼料轉(zhuǎn)化率，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，加入飼料中使用。但喹乙醇能在動(dòng)物體中富集，具有生物毒性，能造成染色體變異，動(dòng)物受刺激時(shí)，會(huì)應(yīng)激出血引發(fā)死亡。由于喹乙醇的這些特性，我國(guó)農(nóng)業(yè)部（現(xiàn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部）在2001年168號(hào)公告中規(guī)定，喹乙醇能用于體重35kg以下的仔豬，在豬飼料中添加量低于100mg/kg；家禽和水產(chǎn)禁用，在雞料和魚(yú)料中不得檢出。2002年農(nóng)業(yè)部（現(xiàn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部）發(fā)布《無(wú)公害食品漁藥使用準(zhǔn)則》中規(guī)定，喹乙醇是禁用漁藥。2005版《中國(guó)獸藥典》也明確規(guī)定，家禽和水產(chǎn)養(yǎng)殖禁用喹乙醇。GB 31650-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》中規(guī)定，喹乙醇在動(dòng)物（豬）體內(nèi)的最大殘留限量為4g/kg（肌肉）、50μg/kg（肝）。喹乙醇在美國(guó)和歐盟都被禁止用作飼料添加劑。但由于喹乙醇的促生長(zhǎng)效果較好，我國(guó)有些養(yǎng)殖從業(yè)人員不遵守國(guó)家有關(guān)規(guī)定，私自增加喹乙醇添加量，在禽類(lèi)、水產(chǎn)飼料中添加喹乙醇。造成動(dòng)物體內(nèi)喹乙醇?xì)埩?，在食用者體內(nèi)富集從而對(duì)健康造成危害。

由于喹乙醇及其代謝產(chǎn)物對(duì)人體有較大危害，對(duì)于飼料中喹乙醇含量的檢測(cè)就尤為重要。飼料中喹乙醇的檢測(cè)方法主要包括：膠體金免疫層析法、酶聯(lián)免疫吸附法、高效液相色譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。

1 飼料中喹乙醇的檢測(cè)方法

1.1 膠體金免疫層析法

將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標(biāo)記試劑(抗體或單克隆抗體)吸附在結(jié)合墊上，將樣品溶液加到試紙條一端的樣本墊上后，通過(guò)毛細(xì)作用向前移動(dòng)，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，再移動(dòng)至固定的抗原或抗體的區(qū)域時(shí)，待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測(cè)帶上，可通過(guò)肉眼觀察到顯色結(jié)果。

膠體金免疫層析法操作簡(jiǎn)便、快捷，不需檢測(cè)儀器，對(duì)檢測(cè)人員要求不高，特異性和敏感性都較高，適合在基層現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)時(shí)使用。

1.2 酶聯(lián)免疫吸附法

還可以用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)喹乙醇。制作酶聯(lián)免疫試劑盒時(shí)，用純化的抗體包被微孔板，然后微孔中加入抗原，再與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，洗滌后加底物TMB顯色。TMB加HRP酶的催化作用變成藍(lán)色，最后加酸變成黃色。黃色深淺與樣品中的喹乙醇含量呈正相關(guān)。在450nm波長(zhǎng)條件下，用酶標(biāo)儀測(cè)定微孔板中樣品的吸光度值，然后對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中喹乙醇的濃度。

酶聯(lián)免疫吸附法實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)便，用時(shí)短，所需儀器較少，主要是酶標(biāo)儀，所用實(shí)驗(yàn)試劑主要是酶聯(lián)免疫試劑盒中的試劑。如果樣品中喹乙醇濃度超出最高檢出限，要稀釋到檢測(cè)范圍才能進(jìn)行檢測(cè)。酶聯(lián)免疫吸附法能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行快速批量檢測(cè)，適合檢測(cè)任務(wù)較大作初篩方法使用，對(duì)待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行定性。但酶聯(lián)免疫吸附法還存在交叉反應(yīng)，可能產(chǎn)生假陽(yáng)性和假陰性，其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度還有待提高。

1.3 高效液相色譜法

液相色譜法是用液體作流動(dòng)相的色譜法，其分離原理是混合物中各組分對(duì)兩相親和力不同。高效液相色譜法是指在液相柱色譜系統(tǒng)加上高壓液流系統(tǒng)，流動(dòng)相在高壓作用下快速流動(dòng)，提高分離效率的方法。不同組分分離出來(lái)后，在特定紫外吸收波長(zhǎng)下，與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行比較來(lái)確定組分成分。

GB/T 8381.7-2009《飼料中喹乙醇的測(cè)定 高效液相色譜法》中規(guī)定，此法適用于檢測(cè)配合飼料、濃縮飼料和添加劑預(yù)混合飼料中的喹乙醇含量，最低定量限為1mg/kg，檢出限為0.1mg/kg。待檢樣品中的喹乙醇用甲醇溶液提取，固相萃取小柱凈化，反相液相色譜柱分離測(cè)定，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，用外標(biāo)法定量分析。

高效液相色譜法檢測(cè)速度快、靈敏、選擇性好，可同時(shí)測(cè)定多組分。但因飼料中成分復(fù)雜，可能會(huì)干擾喹乙醇出峰，所以對(duì)于疑似陽(yáng)性樣品，需要用其他方法進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)。

1.4 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法是以高效液相色譜為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測(cè)系統(tǒng)。樣品中的各組分在高效液相色譜中分離出來(lái)后，在質(zhì)譜中和流動(dòng)相分離，成為離子。離子被質(zhì)量分析器按質(zhì)量數(shù)分開(kāi)，檢測(cè)器分析得到質(zhì)譜圖。

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法靈敏度高、選擇性強(qiáng)、分離能力強(qiáng)、分析速度快。適合多組分復(fù)雜樣品，沸點(diǎn)高，不易揮發(fā)和熱不穩(wěn)定化合物的檢測(cè)。如果用高效液相色譜法在飼料樣品中檢出喹乙醇，可以用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)。但此法樣品前處理過(guò)程繁瑣，費(fèi)用較高。

2 結(jié)論

飼料中喹乙醇的幾種檢測(cè)方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，適合不同情況、不同場(chǎng)合使用。膠體金免疫層析法適合在抽樣現(xiàn)場(chǎng)，進(jìn)行快速檢測(cè)。酶聯(lián)免疫分析法適合在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，對(duì)大量樣品進(jìn)行初篩。高效液相色譜法可以對(duì)酶聯(lián)免疫分析法測(cè)出的陽(yáng)性樣品進(jìn)行檢測(cè)，如有必要，可以用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)分析。