龔詩琦劉宏彬宋慧娟黎 豪梁少華楚 簫姜 波戴思慧熊 程孫小武,*
(1 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院,湖南長(zhǎng)沙 410128;2 湖南雪峰種業(yè)有限公司,湖南邵陽 422001;3 湖南懷化國(guó)家農(nóng)業(yè)科技園區(qū)管理委員會(huì),湖南懷化 418005)
西瓜(Citrullus lanatus)是葫蘆科西瓜屬(Citrullus)一年生草本植物,是我國(guó)夏季主要的消暑食品,深受人們的歡迎。西瓜中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分,比如類胡蘿卜素、瓜氨酸、VC 和多糖等(高美玲 等,2012),對(duì)人體可以起到保健作用,能降低膽固醇、降血壓、降血脂、調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)環(huán)境(季秀芹 等,2014)。西瓜花有雄花、雌花、兩性花3 種類型,大多數(shù)西瓜都是著生雄花和雌花2 種單性花,在連續(xù)開放4~5 朵雄花后開放1 朵雌花。在傳統(tǒng)的制種過程中,繁瑣的母本去雄和父本去雌是用工最多的程序,占整個(gè)制種過程用工的很大一部分。隨著勞動(dòng)力成本的不斷增加,西瓜制種成本也大大提高,嚴(yán)重制約了西瓜產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展。調(diào)控西瓜開花可以為西瓜制種過程中利用新型授粉技術(shù)奠定基礎(chǔ),從而降低制種成本。探究溫度與生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)西瓜開花的影響并掌握其規(guī)律,可以調(diào)控西瓜開花順序,從而簡(jiǎn)化西瓜雜交制種過程中的去雄或者去雌工作,對(duì)西瓜制種和育種產(chǎn)業(yè)具有重要的理論和應(yīng)用價(jià)值。
有研究指出,一些環(huán)境因子在瓜類作物雌雄器官分化表達(dá)過程中起著重要的作用,包括光照強(qiáng)度、光周期和溫度等,可以改變其性型分化表達(dá)。短日照、低光照強(qiáng)度和低溫促進(jìn)雌花的產(chǎn)生,長(zhǎng)日照、高光照強(qiáng)度和高溫促進(jìn)雄花的產(chǎn)生(Wien,1997;Pe?aranda et al.,2007;史建廷 等,2016)。低溫短日照有利于黃瓜、苦瓜、絲瓜、節(jié)瓜、西葫蘆等葫蘆科瓜類作物的雌花發(fā)育,高溫長(zhǎng)日照則有利于雄花的發(fā)育,且雄花數(shù)顯著增加(李明珠 等,2008)。低溫可以增強(qiáng)短日效應(yīng),即促進(jìn)雌花表達(dá),高溫則抑制苦瓜的生殖生長(zhǎng)(汪俏梅 等,1997)。汪本里和曹宗巽(1963)在黃瓜莖尖無菌培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn),在高溫下培養(yǎng),雄花的數(shù)量比雌花的數(shù)量顯著增加,并占據(jù)絕對(duì)優(yōu)勢(shì);在低溫下培養(yǎng),雌花增加占據(jù)絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。任吉君等(2007)發(fā)現(xiàn)低溫能顯著降低飛碟瓜第1 雌花節(jié)位、增加雌花數(shù)。
植物的內(nèi)源激素水平與其性型分化表達(dá)密切相關(guān),外施植物激素和硝酸銀、硫代硫酸銀(STS)、縮節(jié)胺等化學(xué)藥劑可通過改變植物內(nèi)源激素水平從而達(dá)到影響其性型分化的目的。Adhikari 等(2012)研究顯示,赤霉素與雄花表達(dá)相關(guān),細(xì)胞分裂素與雌花表達(dá)相關(guān)。然而不同作物對(duì)激素的響應(yīng)機(jī)制不同,導(dǎo)致相同激素在不同的物種間有相反的作用。比如赤霉素對(duì)西瓜、黃瓜、絲瓜、瓠瓜等具有誘雄作用,然而對(duì)苦瓜來說卻是誘雌劑,此外對(duì)玉米也具有促雌作用(壽森炎和汪俏梅,2000;丁一和徐啟江,2014)。乙烯作為一種重要的植物激素,對(duì)不同作物性型分化的作用效果也有差異,研究發(fā)現(xiàn)外施乙烯能促進(jìn)黃瓜(楊聲澉 等,2011)、甜瓜(Manzano et al.,2011)等的雌花表達(dá),卻促進(jìn)西瓜雄花的發(fā)育(Manzano et al.,2011)??s節(jié)胺是一種用于調(diào)節(jié)植物營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑,在棉花生產(chǎn)上較為常見,能促進(jìn)棉花葉片同化物向生殖器官轉(zhuǎn)移,縮小葉片氣孔面積,抑制棉花植株氨揮發(fā)(唐光木 等,2010),主要有延緩植物生長(zhǎng),縮短節(jié)間,提高抗逆性的作用;也有研究表明縮節(jié)胺可誘導(dǎo)黃瓜雌花發(fā)育,對(duì)性型表達(dá)也有一定的影響(崔輝梅 等,2002),但其對(duì)瓜類性型分化的調(diào)控還未見深入研究。本試驗(yàn)探究不同溫度和外施不同濃度乙烯利、縮節(jié)胺對(duì)西瓜性型分化的影響,以期為調(diào)控西瓜的開花提供參考。
供試西瓜品種為雪龍1 號(hào),由湖南雪峰種業(yè)有限公司提供。
試驗(yàn)于2019 年4—8 月在湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)蔬菜瓜類研究所內(nèi)進(jìn)行。
1.2.1 種子消毒處理 配制2%的硫酸銅溶液,將種子浸泡10 min 后取出,用清水沖洗干凈后自然晾干,然后用消毒后的濕毛巾將種子包住,放入恒溫干燥箱內(nèi)30~33 ℃恒溫催芽。
1.2.2 幼苗處理 種子出芽以后將每粒種子單獨(dú)播種于直徑10 cm 的營(yíng)養(yǎng)缽內(nèi)育苗,將營(yíng)養(yǎng)缽整齊擺放入溫度設(shè)置為30 ℃的育苗機(jī)并蓋上薄膜保濕,使種子在相同環(huán)境下出苗,出苗后將幼苗放入人工氣候箱中生長(zhǎng),待幼苗子葉平展后在人工氣候箱內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)處理:晝/夜溫度分別設(shè)置為30 ℃/25℃、25 ℃/20 ℃、20 ℃/15 ℃,光照為30 000 lx、濕度為65%、光周期為晝12 h/夜12 h。使用乙烯利與縮節(jié)胺2 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑,濃度設(shè)為50、200、400 mg·L-1等3 個(gè)梯度。西瓜幼苗在不同溫度下生長(zhǎng),分別在幼苗二葉一心期和四葉一心期噴施不同濃度的乙烯利、縮節(jié)胺以及乙烯利+縮節(jié)胺,同時(shí)以噴施清水作為對(duì)照。待幼苗生長(zhǎng)至五葉一心后,從各處理中選取生長(zhǎng)勢(shì)較一致的幼苗移栽到人工氣候室內(nèi),并按照不同處理分區(qū)擺放讓其正常生長(zhǎng),統(tǒng)計(jì)不同處理西瓜第1 雄花節(jié)位、第1 雌花節(jié)位和前30 節(jié)雌花數(shù)目。每處理統(tǒng)計(jì)10 株,3次重復(fù)。
另外,選擇30 ℃/25 ℃下噴施乙烯利處理的西瓜為測(cè)定對(duì)象,當(dāng)幼苗生長(zhǎng)到五葉一心期時(shí)取西瓜幼苗莖尖2 cm 左右的部位為試驗(yàn)材料,每3 個(gè)莖尖為1 組,3 次生物學(xué)重復(fù),取樣后用液氮速凍,然后放入-80 ℃冰箱中保存,利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(杜維 等,2018)進(jìn)行多種內(nèi)源激素(生長(zhǎng)素IAA,茉莉酸甲酯JA,脫落酸ABA,赤霉素GA1、GA3、GA4)含量測(cè)定。
采用SPSS 22.0 和Excel 軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,運(yùn)用Duncan’s 新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較分析。
由圖1、2 可知,在晝/夜溫度25 ℃/20 ℃下噴施50 mg·L-1的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑,西瓜幼苗噴施乙烯利以后,莖尖葉片皺縮畸形,節(jié)間距離縮短,莖稈變粗,而噴施縮節(jié)胺后西瓜幼苗形態(tài)與噴施清水無明顯區(qū)別。
對(duì)不同處理后的西瓜幼苗進(jìn)行性型分化統(tǒng)計(jì),從表1 可以看出,在30 ℃/25 ℃處理下噴施縮節(jié)胺,與對(duì)照相比,西瓜第1 雄花節(jié)位、第1 雌花節(jié)位顯著降低,第1 雄花提早4.2~5.4 節(jié),第1 雌花提早5.1~7.3 節(jié),雌花數(shù)目也顯著增多。從3 種縮節(jié)胺濃度來看,隨著縮節(jié)胺濃度增大,第1 雄花節(jié)位和第1 雌花節(jié)位均上升,雌花數(shù)目減少。噴施50 mg·L-1縮節(jié)胺對(duì)西瓜有著最好的效果,與其他2 種濃度相比第1 雄花和第1 雌花均提早分化表達(dá);雌花數(shù)目也最多,并且顯著多于噴施400 mg·L-1縮節(jié)胺的處理。在25 ℃/20 ℃處理下噴施縮節(jié)胺,與對(duì)照相比也均能降低西瓜的第1 雄花節(jié)位和第1雌花節(jié)位,第1 雄花節(jié)位降低2.1~4.9 節(jié),第1 雌花節(jié)位降低2.4~5.1 節(jié),還能促進(jìn)西瓜雌性表達(dá),30 節(jié)內(nèi)雌花數(shù)目顯著增加。隨著縮節(jié)胺濃度增大,第1 雄花節(jié)位和第1 雌花節(jié)位均降低,雌花數(shù)目基本不變。3 種濃度的縮節(jié)胺中噴施400 mg·L-1對(duì)西瓜有最佳的調(diào)控效果,200 mg·L-1次之,噴施50 mg·L-1縮節(jié)胺效果最差。在20 ℃/15 ℃處理下噴施3 種濃度的縮節(jié)胺,發(fā)現(xiàn)在該溫度下縮節(jié)胺卻表現(xiàn)出對(duì)西瓜性型表達(dá)的抑制效果,西瓜第1 雄花節(jié)位和第1 雌花節(jié)位均顯著升高,第1 雄花節(jié)位升高4.5~6.7 節(jié),第1 雌花節(jié)位升高5.2~8.4 節(jié),雌花數(shù)目顯著降低。因此,總的來看,在25 ℃/20℃下噴施400 mg·L-1縮節(jié)胺對(duì)第1 雄花和第1 雌花節(jié)位的促進(jìn)以及對(duì)雌花數(shù)目的增加效果最好。
值得注意的是,如表2 所示,在3 種溫度下不管是噴施乙烯利還是噴施乙烯利+縮節(jié)胺2 種調(diào)節(jié)劑,西瓜前30 節(jié)均沒有雌花分化表達(dá)而且只在第19 節(jié)之后才開始有雄花分化表達(dá)。
表1 不同溫度下噴施縮節(jié)胺對(duì)西瓜性型表達(dá)的影響
由表2 可知,噴施乙烯利后西瓜第1 雄花節(jié)位較對(duì)照大幅度升高,隨著乙烯利濃度增加,西瓜第1 雄花節(jié)位進(jìn)一步升高。在30 ℃/25 ℃下噴施乙烯利后,第1 雄花平均節(jié)位為第22.9 節(jié),在25℃/20 ℃下噴施乙烯利后,第1 雄花平均節(jié)位為第21.7 節(jié),在20 ℃/15 ℃下噴施乙烯利后,第1 雄花平均節(jié)位為第24.1 節(jié)。3 個(gè)溫度下噴施3 種濃度乙烯利后西瓜第1 雄花節(jié)位均在19 節(jié)以后,較對(duì)照均升高7.8 節(jié)以上,變化十分明顯。噴施乙烯利+縮節(jié)胺后,與單獨(dú)噴施乙烯利一樣,第1 雄花節(jié)位大幅度推遲,平均推遲10 節(jié)左右,隨著調(diào)節(jié)劑濃度增大,推遲節(jié)數(shù)也進(jìn)一步增多。在30 ℃/25℃下,乙烯利+縮節(jié)胺處理平均第1 雄花節(jié)位為第24.1 節(jié),在25 ℃/20 ℃下,平均第1 雄花節(jié)位為第21.6 節(jié),20 ℃/15 ℃下,平均第1 雄花節(jié)位為第24.3 節(jié),遠(yuǎn)高于對(duì)照。
表2 不同溫度下噴施乙烯利或者乙烯利+縮節(jié)胺對(duì)西瓜性型表達(dá)的影響
由于噴施乙烯利的處理西瓜前30 節(jié)均只有雄花而沒有雌花分化表達(dá),因此選取30 ℃/25 ℃下噴施乙烯利處理后的西瓜五葉一心期莖尖2 cm 的部位進(jìn)行內(nèi)源激素含量測(cè)定。由表3 可以看出,噴施3 種濃度乙烯利后西瓜莖尖內(nèi)源IAA、JA、GA1含量均低于噴施清水的對(duì)照,內(nèi)源ABA、GA4、GA3含量均顯著低于對(duì)照。內(nèi)源IAA、ABA 和GA4含量隨著噴施乙烯利濃度的增加而降低,說明高濃度的乙烯可能抑制了西瓜內(nèi)源IAA、ABA、GA4的合成。內(nèi)源JA 和GA3含量處于一個(gè)波動(dòng)狀態(tài),而內(nèi)源GA1含量隨著噴施乙烯利濃度的升高基本保持穩(wěn)定。
表3 不同濃度乙烯利處理后西瓜莖尖內(nèi)源激素的含量對(duì)比
縮節(jié)胺是一種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑,主要作用是延緩植株生長(zhǎng),縮短節(jié)間,使得植株株型緊湊,增強(qiáng)植株抗逆性,同時(shí)也有促進(jìn)黃瓜雌花發(fā)生的作用(楊貴先 等,2016),生產(chǎn)上也利用縮節(jié)胺處理南瓜,從而誘導(dǎo)出雌花(屈長(zhǎng)榮和張雪梅,2015)。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)植株的作用在不同溫度下可能會(huì)存在差異,楊超臣等(2019)研究表明在適當(dāng)溫度下噴施油菜素內(nèi)酯可以促進(jìn)香椿幼苗的生長(zhǎng),提高抗逆性。而本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)縮節(jié)胺對(duì)西瓜幼苗形態(tài)幾乎沒有影響,其對(duì)西瓜性型分化的影響與溫度有關(guān),在25 ℃/20 ℃下噴施濃度為400 mg·L-1的縮節(jié)胺對(duì)第1 雄花和第1 雌花發(fā)生的促進(jìn)以及對(duì)雌花數(shù)目的增加效果最好;30 ℃/25 ℃和25 ℃/20 ℃溫度下噴施縮節(jié)胺均可促進(jìn)西瓜雄花和雌花的發(fā)生,更有利于西瓜雌花的分化表達(dá),跟對(duì)照相比西瓜第1雄花和第1 雌花均提早發(fā)生,雌花數(shù)目顯著增多。但是在20 ℃/15 ℃的溫度下,噴施3 種濃度的縮節(jié)胺卻均對(duì)西瓜花的發(fā)生有推遲作用,跟對(duì)照相比第1 雄花節(jié)位和第1 雌花節(jié)位均顯著升高,雌花數(shù)目顯著減少。試驗(yàn)結(jié)果表明在適宜的較高溫度下噴施縮節(jié)胺能取得更好的效果。此外,在不同溫度下縮節(jié)胺的效果隨濃度變化也存在差異:在30 ℃/25℃下,隨著濃度增大,縮節(jié)胺對(duì)西瓜花表達(dá)的促進(jìn)效果逐漸減弱,雌花數(shù)目也逐漸減少,而在25℃/20 ℃下,隨著濃度增大,縮節(jié)胺對(duì)西瓜第1 雄花節(jié)位和第1 雌花節(jié)位的提前作用逐漸增強(qiáng),但是雌花數(shù)目卻變化不大,這更進(jìn)一步說明了縮節(jié)胺對(duì)西瓜作用效果的復(fù)雜性??s節(jié)胺對(duì)西瓜性型分化的作用效果可為實(shí)際制種過程提供參考,對(duì)于母本材料,在30 ℃/25 ℃下噴施低濃度縮節(jié)胺,可增加雌花數(shù)量、降低雌花開花節(jié)位;對(duì)于自交系材料,在25 ℃/20 ℃下噴施高濃度縮節(jié)胺,雌雄花節(jié)位均可提前,可提前收瓜??偟膩碚f,縮節(jié)胺處理對(duì)西瓜開花有著顯著影響,在生產(chǎn)上可以利用縮節(jié)胺提前或推遲母本和父本開花時(shí)間,使得母本和父本盛花期較一致,而縮節(jié)胺的這種調(diào)控作用也為后續(xù)精確調(diào)控西瓜開花順序提供了一定的參考。
乙烯是植物生長(zhǎng)發(fā)育和性型表達(dá)過程中不可或缺的一種激素,乙烯利是一種乙烯釋放劑,與乙烯具有相同的生理作用,是一種重要的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。乙烯與瓜類作物的性型分化息息相關(guān),外施乙烯利可以對(duì)其性型分化起到一定的調(diào)控作用。用乙烯利處理苦瓜,可以增加雌雄比,增加雌花數(shù)量(嚴(yán)良文 等,2017)。在黃瓜、南瓜上也發(fā)現(xiàn)乙烯利能夠誘導(dǎo)出雌花,促進(jìn)雌花的分化(楊聲澉 等,2011;楊曉霞,2015)。但是乙烯利在西瓜上的作用卻有所不同,Manzano 等(2011)發(fā)現(xiàn)乙烯利對(duì)西瓜雌雄花的誘導(dǎo)作用跟其他瓜類不一樣,乙烯利促進(jìn)了西瓜的雄花發(fā)育。胡寶剛(2010)也發(fā)現(xiàn)乙烯對(duì)西瓜有明顯的抑雌作用,且高濃度的乙烯(300、500 mg·L-1)在抑雌的同時(shí)還會(huì)對(duì)西瓜幼苗產(chǎn)生藥害作用,使得西瓜莖尖變粗,節(jié)間縮短,葉片皺縮。本試驗(yàn)結(jié)果表明,3 種濃度的乙烯利(50、200、400 mg·L-1)均使植株矮化,使西瓜幼苗莖尖葉片皺縮畸形,節(jié)間縮短,莖稈變粗,這一現(xiàn)象與胡寶剛(2010)的研究一致。噴施乙烯利極大地推遲了西瓜雌花的發(fā)育,在前30 節(jié)內(nèi)無一朵雌花發(fā)育表達(dá),同時(shí)乙烯利也推遲了西瓜第1 雄花的發(fā)生,使第1 雄花節(jié)位大幅度升高。在3 個(gè)溫度下噴施乙烯利后,西瓜第1 雄花節(jié)位的變化規(guī)律一致,均是隨著乙烯利濃度的增大而升高,這與噴施縮節(jié)胺后不一樣,說明乙烯利對(duì)西瓜性型分化表達(dá)的影響更穩(wěn)定。在制種過程中,噴施乙烯利可以達(dá)到對(duì)父本去雌的目的。通過3 個(gè)溫度下噴施縮節(jié)胺+乙烯利這2 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑,可以發(fā)現(xiàn)乙烯利對(duì)西瓜的影響比縮節(jié)胺更大,噴施乙烯利所產(chǎn)生的效果會(huì)掩蓋噴施縮節(jié)胺產(chǎn)生的效果。夏仁學(xué)(1996)認(rèn)為脫落酸跟細(xì)胞分裂素、赤霉素對(duì)植株的生理效應(yīng)正好相反,當(dāng)它們配合施用的時(shí)候,脫落酸會(huì)將后兩者的作用抑制。本試驗(yàn)結(jié)果與此類似,這可能是由于2 種不同的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑競(jìng)爭(zhēng)性地與植株體內(nèi)的特異性受體結(jié)合,而脫落酸與受體特異性結(jié)合的能力強(qiáng)于細(xì)胞分裂素和赤霉素,乙烯利與受體特異性結(jié)合的能力高于縮節(jié)胺。
通過測(cè)定噴施乙烯利后西瓜幼苗莖尖的內(nèi)源激素含量,發(fā)現(xiàn)不論是高水平下有利于西瓜雌花分化表達(dá)的內(nèi)源IAA,還是高水平下有利于西瓜雄花分化表達(dá)的內(nèi)源ABA、JA、GA3和GA1,其含量均低于對(duì)照。Manzano 等(2016)的試驗(yàn)也得到類似的結(jié)果,他們發(fā)現(xiàn)西瓜的乙烯調(diào)控合成基因CitACS4突變會(huì)減少雌蕊花芽中乙烯的產(chǎn)生,乙烯的量過少不能抑制其雄蕊的發(fā)育,從而產(chǎn)生了兩性花。因此筆者推測(cè)可能是西瓜幼苗噴施乙烯利以后其體內(nèi)某些與性型分化相關(guān)的激素合成量不夠,沒有達(dá)到西瓜雄花和雌花表達(dá)的一個(gè)閾值,從而導(dǎo)致其開花節(jié)位大幅度推遲,雌花的分化表達(dá)更是嚴(yán)重受阻。今后可以進(jìn)一步測(cè)定乙烯利處理后2 個(gè)西瓜性型分化最主要的基因CitACS4和CIWIP1的相對(duì)表達(dá)量,分析其表達(dá)情況,深入探究乙烯利對(duì)西瓜性型分化的作用機(jī)理。值得注意的是,在噴施乙烯利后西瓜莖尖內(nèi)源ABA 含量也有一定程度的降低。ABA 作為一種植物生長(zhǎng)抑制劑,可促使植物葉片脫落,施用外源ABA 可以通過改變植物體內(nèi)激素間的平衡來誘導(dǎo)抗寒基因的表達(dá),增強(qiáng)抗寒力(盧少云 等,2003),但也可促進(jìn)一些果樹(如蘋果)的花芽分化,以及促使一些短日植物(如黑醋栗)在長(zhǎng)日條件下開花(王鏡巖 等,2002),因此噴施乙烯利后西瓜莖尖內(nèi)源ABA 含量下降,可能是導(dǎo)致西瓜前30 節(jié)無雌花生成,且雄花開花節(jié)位升高的一個(gè)原因。
本試驗(yàn)結(jié)果可運(yùn)用于實(shí)際西瓜雜交制種中,用熊蜂授粉等技術(shù)代替人工授粉,能將制種程序簡(jiǎn)化、省時(shí)省力、降低成本,有效提高制種效率及種子質(zhì)量,對(duì)西瓜制種和育種工作有著重要的意義。