馬 銳，湯道權(quán)

（徐州醫(yī)科大學(xué)，江蘇 徐州221000）

枸櫞酸舒芬太尼作為一種強效的阿片類鎮(zhèn)痛藥，因起效快、鎮(zhèn)痛作用強、毒性低、安全范圍廣，而被廣泛應(yīng)用于各類疼痛及術(shù)后鎮(zhèn)痛[1,2]。目前，2015版《中國藥典》仍采用非水滴定法測定其原料藥含量[3]，由于滴定法專屬性存在一定不足[4,5]，可能使得藥物中其它共存雜質(zhì)對結(jié)果造成干擾。因此，為提高檢測方法的專屬性，采用高效液相色譜法測定枸櫞酸舒芬太尼的含量，以期完善本品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，進而更好控制相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量。

1 儀器與試劑

安捷倫1260型高效液相色譜系統(tǒng)（Agilent公司）；ME104E型電子天平（梅特勒-特利多公司）。

枸櫞酸舒芬太尼對照品（中國藥品食品檢定研究院）；枸櫞酸舒芬太尼供試品1（批號：200402）、枸櫞酸舒芬太尼供試品2（批號：200601），均由生產(chǎn)企業(yè)提供；NH4Ac、HAc均為分析純，上海阿拉丁試劑有限公司；甲醇、乙腈為色譜純，Merck公司；試驗用水為高純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent HC C18色譜柱（250mm×4.6mm,5μm）；流動相：0.13mol·L-1NH4Ac溶液-甲醇-乙腈（31∶45∶24），采用HAc調(diào)節(jié)溶液pH值至7.2；流速1.0mL·min-1，檢測波長：228nm，柱溫：40℃，進樣體積：10μL。

2.2 溶液配制

供試品溶液 精密稱取枸櫞酸舒芬太尼，采用流動相稀釋至每毫升中約含0.05mg舒芬太尼，待用。

對照品溶液 精密稱取對照品適量，配制供試品相同濃度的對照溶液，待用。

2.3 系統(tǒng)適用性與專屬性試驗

準(zhǔn)確稱取對照品10mg，加入1mol·L-1HCl 10mL溶解后，水浴回流4h，繼續(xù)加入1mol·L-1NaOH調(diào)節(jié)至中性，水浴蒸干，冷卻至室溫后，加入10mL甲醇溶解殘渣，過濾，精密量取1mL濾液，置于10mL量瓶內(nèi)，加入流動相，稀釋定容，作為系統(tǒng)適用性溶液，同時以流動相作空白溶液。精密量取系統(tǒng)適用性溶液、空白溶液、對照品溶液和供試品溶液各10μL，按照“2.1”項所述色譜條件分別進樣，相關(guān)色譜圖，詳見圖1。

圖1 專屬性試驗色譜圖Fig.1 Liquid chromatograms of specificity tests

由圖1可知，舒芬太尼與各雜質(zhì)峰的分離度均大于2.0，可保證完全分離，且其它成分在舒芬太尼的保留時間處，無色譜峰出現(xiàn)，因此，可知該色譜條件對舒芬太尼的含量測定專屬性較好。

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取對照品適量后，加入流動相配制成濃度為100.14μg·mL-1的對照品儲備溶液，分別精密移取1、2、3、5、10mL對照品儲備溶液至10mL容量瓶，加入流動相稀釋定容至刻度，搖勻后，配制成不同系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照“2.1”項所述色譜條件分別進樣，以對照品溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y=1.029x+0.012（r=0.9998），表明舒芬太尼在10.14～100.14μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 定量限與檢測限

精密稱取對照品適量，采用流動相溶解并逐級稀釋，按照“2.1”項所述色譜條件分別進樣，以基線噪聲的3倍響應(yīng)值作為檢測限，基線噪聲的10倍響應(yīng)值作為定量限，試驗結(jié)果顯示，舒芬太尼的檢測限與定量限分別為1.22ng·mL-1與4.15ng·mL-1。

2.6 穩(wěn)定性考察

分別移取系統(tǒng)適用性溶液、供試品溶液及對照品溶液于不同時間（0、1、2、4、6、8、12、24h）下，按照“2.1”項所述色譜條件進樣。試驗結(jié)果表明，系統(tǒng)適用性溶液于24h內(nèi)符合相應(yīng)要求，同時供試品、對照品溶液測定結(jié)果穩(wěn)定，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均低于2%。

2.7 精密度考察

準(zhǔn)確移取“2.2”對照品溶液10μL，按照“2.1”項所述色譜條件進樣，記錄峰面積。試驗結(jié)果顯示，舒芬太尼的峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差僅為0.59%（n=6），表明該檢測設(shè)備具有較好的精密度。

2.8 重復(fù)性考察

準(zhǔn)確移取“2.2”中對照品溶液與6份供試品溶液1各10μL，按照“2.1”項所述色譜條件進樣，記錄峰面積后，計算供試品溶液1中舒芬太尼的含量。試驗結(jié)果顯示，測定供試品中舒芬太尼的含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.63%（n=6），表明該方法具有較好的重復(fù)性。

2.9 回收率試驗

精密稱取枸櫞酸舒芬太尼供試品1適量，置于100mL容量瓶內(nèi)，加入流動相稀釋定容配制成51.36μg·mL-1供試品溶液，另配制濃度為50.19μg·mL-1的對照品儲備溶液后，分別移取2、3、4mL至10mL容量瓶內(nèi)，每個體積各移取3份，分別加入供試品溶液稀釋至刻度，制得不同濃度的加樣回收溶液，測定結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果Tab.1 Results of recovery tests（n＝9）

由表1可見，不同濃度的加樣回收溶液的結(jié)果回收率均在98.6%～101.3%之間，表明該分析方法測定舒芬太尼的結(jié)果準(zhǔn)確度較好。

2.10 耐用性試驗

精密量取供試品溶液1適量，分別于不同流速（±0.2mL·min-1）、柱溫（±5℃）、pH值（±0.2）、檢測波長（±5nm）、流動相比例（±2）及不同品牌C18色譜柱的條件下，按照“2.1”項所述色譜條件進樣，記錄峰面積，測定供試品溶液中舒芬太尼的含量。試驗結(jié)果表明，舒芬太尼與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于2.0，同時測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均低于2.0%，表明本方法的耐用性較好。

2.11 樣品含量測定

精密量取供試品溶液1、2與對照品溶液適量，以流動相作為空白溶液，按照“2.1”項所述色譜條件進樣，記錄峰面積，測定不同供試品溶液中舒芬太尼的含量，同時以藥典規(guī)定的非水滴定法所測結(jié)果作為參照。試驗結(jié)果顯示，高效液相色譜法測定供試品溶液1、2中舒芬太尼濃度分別為51.41、52.63μg·mL-1，與非水滴定法測定結(jié)果相近（52.86、53.77μg·mL-1），因此，適用于相關(guān)藥品的質(zhì)量控制。

3 結(jié)論

本研究建立了高效液相色譜法測定枸櫞酸舒芬太尼的含量。在該色譜條件下，舒芬太尼與相鄰色譜峰分離度均大于2.0，測定結(jié)果無干擾，方法具有較好的專屬性，與藥典規(guī)定方法相比，可真實反映藥物的含量水平，同時該方法測定結(jié)果的重復(fù)性與準(zhǔn)確度良好。綜上所述，適用用于枸櫞酸舒芬太尼原料藥的含量測定。