王嵩 黃思捷 郤慶

摘 要 查閱國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，目前含黃芪的中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的含量測(cè)定方法較多，其中以高效液相色譜法為主，為中藥復(fù)方復(fù)雜成分中定量定性分析提供了有效地幫助。本文對(duì)含黃芪的中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷含量的各種測(cè)定方法進(jìn)行綜述。

關(guān)鍵詞 黃芪 中藥復(fù)方制劑 黃芪甲苷 含量測(cè)定

中圖分類號(hào)：R286； R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2021）05-0064-05

*基金項(xiàng)目：全國(guó)中藥特色技術(shù)傳承人才培訓(xùn)項(xiàng)目（國(guó)中醫(yī)藥人教函〔2019〕43號(hào)）；上海市“醫(yī)苑新星”青年醫(yī)學(xué)人才培養(yǎng)計(jì)劃（滬衛(wèi)計(jì)人事〔2019〕72號(hào)）；上海市衛(wèi)計(jì)委科研課題青年項(xiàng)目（20174Y0160）；上海市虹口區(qū)衛(wèi)健委中醫(yī)藥科研項(xiàng)目（HKQ-ZYY-2020-16）

Advances in the determination of astragaloside Ⅳin compound prescriptions containing astragalus*

WANG Song**， HUNAG Sijie， XI Qing***

（Shanghai TCM-Integrated Hospital， Shanghai University of TCM， Shanghai 200082， China）

ABSTRACT There are various methods for the determination of astragaloside Ⅳ in TCM compound preparations containing astragalus in domestic and foreign literatures. These methods are mainly involved in high performance liquid chromatography， which can provide effective results for qualitative and quantitative determination of the TCM compound prescriptions. In this article， the various methods for the determination of astragaloside Ⅳ in TCM compound preparations containing astragalus are reviewed.

KEY WORDS astragalus； traditional Chinese medicine compound prescriptions； astragaloside Ⅳ； content determination

黃芪是常用的補(bǔ)益類中藥，臨床主要用于氣虛自汗、久咳虛喘、肺氣虛證、脾氣虛弱之中氣下陷及浮腫、瘡瘍潰難斂等癥的治療。近年來的研究發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷對(duì)于呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)及循環(huán)系統(tǒng)等疾病有一定的治療作用。現(xiàn)代研究已經(jīng)從黃芪中提取、分離了包括黃酮、皂苷、生物堿類等多種化合物，其中黃芪甲苷是黃芪成分中最主要的活性物質(zhì)。黃芪甲苷在黃芪中的含量較低，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，對(duì)于黃芪甲苷的含量測(cè)定的相關(guān)研究也取得了較大的進(jìn)步，逐步由薄層法等轉(zhuǎn)向靈敏度更高、分離度更好的高效液相色譜法及超高效液相色譜法等。本文對(duì)近年來中藥復(fù)方中黃芪甲苷的含量測(cè)定方法做一概述。

1 薄層掃描法

薄層掃描法包括薄層吸收掃描和薄層熒光掃描兩種方法。在各種分析技術(shù)中，因其分析時(shí)間短、操作簡(jiǎn)便、成本低等優(yōu)點(diǎn)而成為相關(guān)研究的理想選擇[1]。

1.1 補(bǔ)陽(yáng)還五膠囊

補(bǔ)陽(yáng)還五膠囊由《醫(yī)林改錯(cuò)》中補(bǔ)陽(yáng)還五湯加減而成，由當(dāng)歸尾、赤芍、川芎、紅花等6味中藥組成。劉世軍等[2]建立硅膠G薄層板，氯仿-甲醇-水（13∶6∶2）10 ℃以下放置過夜的下層溶液展開，選擇530 nm與700 nm兩種波長(zhǎng)，有良好的專屬性。線性范圍在0.980～6.860 mg之間，平均回收率為99.49%。3批樣品黃芪甲苷的含量在1.493～1.532 mg/g之間。該方法能有效地控制補(bǔ)陽(yáng)還五膠囊的質(zhì)量。

1.2 六味補(bǔ)氣膠囊

六味補(bǔ)氣膠囊由黃芪、生曬參等六味中藥組成。周晶[3]采用硅膠G板，以氯仿-甲醇-水（65∶35∶10）下層溶液為展開劑，檢測(cè)波長(zhǎng)為510 nm。在0.988～4.940 mg范圍內(nèi)線性良好，平均加樣回收率為98.3%，RSD=1.42%。該方法測(cè)得的黃芪甲苷平均含量為2.306 mg/g。解決了末端吸收，紫外檢測(cè)不穩(wěn)定，重復(fù)性差的缺點(diǎn)。

1.3 升胃沖劑

院內(nèi)制劑升胃沖劑由黃芪、黨參、陳皮等中藥組成。黃芪為該方的君藥，對(duì)其主要成分黃芪甲苷的含量研究能有效地對(duì)該制劑進(jìn)行質(zhì)量控制。張昌文等[4]采用雙波長(zhǎng)薄層掃描法（λS=515 nm，λR=700 nm）對(duì)升胃顆粒劑中黃芪甲苷進(jìn)行定量。黃芪甲苷在0.948～4.740 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為96.46%，將0.25 mg/g作為升胃顆粒黃芪甲苷含量測(cè)定的最低標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 芪黃通秘軟膠囊

芪黃通秘軟膠囊是從醫(yī)院制劑研發(fā)而成的一款中藥6類新藥，由黃芪、首烏等十多味中藥組成。常用于老年性便秘、習(xí)慣性便秘證屬氣血兩虛、大腸失潤(rùn)者的治療?？椎聭椀萚5]在試用高效液相色譜法效果不理想的情況下采用薄層色譜掃描法，波長(zhǎng)λS=515 nm，λR=700 nm，氯仿-甲醇-水（13∶6∶2）作為展開劑。發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷在1.00～5.00 mg的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為98.7%，樣品的平均含量為0.099 mg/粒。

2 高效液相色譜法

2.1 蒸發(fā)光散射檢測(cè)（ELSD）

蒸發(fā)光散射檢測(cè)主要用于檢測(cè)含有弱色團(tuán)的非揮發(fā)性化合物的定量分析和定性分析，作為非特異性通用檢測(cè)器與高效液相色譜聯(lián)用具有較高的分析通量，重復(fù)性好，結(jié)果精確，彌補(bǔ)了常規(guī)紫外檢測(cè)無法檢測(cè)或只有紫外末端吸收的缺陷。因此HPLC-ELSD聯(lián)用是目前中藥復(fù)方中測(cè)定黃芪甲苷含量的主要方法。近年來利用HPLC-ELSD檢測(cè)含黃芪中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷含量的情況見表1。

2.2 質(zhì)譜檢測(cè)（MS）

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)具有分離效果好、特異性和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，是最常用的藥物分析方法。中藥成分復(fù)雜、分離困難，色譜法有時(shí)很難對(duì)中藥成分做出分析檢測(cè)。而高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用可避免復(fù)雜的樣品預(yù)處理，同時(shí)得到化合物特征結(jié)構(gòu)碎片等信息，尤其適用于含量較低成分的檢測(cè)[20]。目前對(duì)于黃芪甲苷檢測(cè)的質(zhì)譜條件多采用電噴霧離子源，用于定量分析的檢測(cè)離子及液相色譜檢測(cè)條件會(huì)有所不同。使用該方法檢測(cè)含黃芪中藥復(fù)方中黃芪甲苷含量見表2。

2.3 電霧式檢測(cè)（CAD）

電霧式檢測(cè)是基于霧化-氣溶膠的HPLC檢測(cè)器，通過將液相洗脫液霧化蒸發(fā)后對(duì)溶質(zhì)顆粒進(jìn)行檢測(cè)，主要用于無或者弱紫外吸收的化合物的檢測(cè)，解決了電離檢測(cè)或蒸發(fā)光散射檢測(cè)等在精確度及靈敏度等方面的局限性。

2.3.1 歸脾丸

歸脾丸是臨床治療心脾兩虛、脾不統(tǒng)血所致的心悸、失眠、健忘等疾病的經(jīng)典方，出自《醫(yī)學(xué)六要》。為了更好地控制該復(fù)方的質(zhì)量，保證臨床療效，高海濤等[25]在傳統(tǒng)的HPLC-ELSD法的基礎(chǔ)上，選擇電霧式檢測(cè)器，霧化溫度為35 ℃，載氣：N2，壓強(qiáng)63.2 pa，黃芪甲苷含量在0.416～2.496 mg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率為96.4%，為歸脾丸的質(zhì)量控制提供了新方法。

2.3.2 其他中藥復(fù)方制劑

由于中藥復(fù)方成分復(fù)雜，含量較低不易分離，故常在樣品制備的過程中采用不同的萃取方式，利用電霧式檢測(cè)器的高靈敏度等特點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。廖強(qiáng)等[26]以水飽和正丁醇為溶劑，100 ℃，5 min，循環(huán)3次作為快速溶劑萃取的條件，以HPLC-CAD法對(duì)補(bǔ)中益氣丸、通竅鼻炎顆粒、醒腦再造膠囊、玉屏風(fēng)顆粒四種中成藥中的黃芪甲苷含量進(jìn)行檢測(cè)。在26.62～665.5 mg/ml內(nèi)線性良好，回收率為98.80%～100.80%，與藥典方法的結(jié)果差異不大，但檢測(cè)效率明顯提高。李效寬等[27]采用在線固相萃取高效液相色譜法，結(jié)合電霧式檢測(cè)器，以雙三元液相色譜作為上樣凈化泵和分析泵，測(cè)得黃芪甲苷在4.0～80 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為97.6%。

3 超高效液相色譜法

超高效液相色譜（UPLC）柱效速度明顯加快，檢測(cè)時(shí)間縮短，近年來應(yīng)用越來越廣泛，尤其在中藥復(fù)方研究中有獨(dú)特的應(yīng)用價(jià)值。使用UPLC-PDA進(jìn)行定量分析，可同時(shí)測(cè)定不同結(jié)構(gòu)的多種化合物[28]。

3.1 復(fù)方扶芳藤合劑

復(fù)方扶芳藤合劑屬國(guó)家中藥保護(hù)品種的保健品口服液。在《中國(guó)藥典》中其質(zhì)量控制的方法是測(cè)定其有效成分黃芪甲苷的含量。蔣湘等[29]通過建立UPLC-QExactive方法對(duì)該制劑中的13個(gè)成分進(jìn)行了分析，測(cè)得黃芪甲苷的含量符合《中國(guó)藥典》的標(biāo)準(zhǔn)，精密度、重復(fù)性等指標(biāo)均符合要求。該方法的應(yīng)用能系統(tǒng)、全面地反應(yīng)復(fù)方扶芳藤合劑的質(zhì)量。

3.2 心衰寧顆粒（無糖型）

心衰寧顆粒由黃芪等8味常用中藥組成。曾真等[30]采用Waters超高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)。以乙腈-水（32∶68）為流動(dòng)相，柱溫30 ℃、流速0.5 ml/min的作為檢測(cè)條件。黃芪甲苷的回收率為98.45%，三批中試樣品中的含量為0.839～0.888 mg/g。該方法提高了測(cè)試效率，為該制劑推向市場(chǎng)提供了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)。

3.3 漢養(yǎng)生精口服液

漢養(yǎng)生精口服液是由院內(nèi)制劑研發(fā)而成，由黃芪、枸杞等中藥組成，已被列為非物質(zhì)文化遺產(chǎn)，具有提高人體免疫力、抗衰老、抗腫瘤等作用。尚慶霞等[31]采用Waters Acquity UPLC C18色譜柱（2.1 mm×50 mm，1.7 mm），以乙腈-0.1%甲酸水溶液（15∶85）為流動(dòng)相、流速0.2 ml/min 對(duì)該制劑中的黃芪甲苷等5種成分進(jìn)行含量測(cè)定。通過電噴霧離子源多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式正離子模式檢測(cè)離子對(duì)m/z 807.3→627.30測(cè)定黃芪甲苷的平均含量為37.88 mg/ml，測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定可靠，重復(fù)性好，實(shí)用性強(qiáng)，為該藥的全面質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

3.4 疏肝健脾顆粒

疏肝健脾顆粒由黃芪、熟地黃、枸杞等中藥組成，具有疏肝健脾，調(diào)經(jīng)活血的功效。羅靜霞等[32]采用Agilent Poroshell C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，2.7 mm），乙腈-0.1%甲酸水溶液（40∶60）為流動(dòng)相，流速0.2 ml/min，進(jìn)樣量2 ml，柱溫35 ℃，漂移管溫度100 ℃，氮?dú)?.0 ml/min，所測(cè)定的10批樣品中黃芪甲苷含量在1.236～2.576 mg/g之間。較傳統(tǒng)的HPLC法，該研究采用的UPLC-ELSD法洗脫更快，分離效率更高。

3.5 舒筋活血顆粒

舒筋活血顆粒由黃芪、葛根等中藥組成，對(duì)頸肩臂疼痛等有一定的療效。為了有效地解決同時(shí)檢測(cè)黃芪甲苷與葛根素的問題，陳昭等[33]采用UHPLC-MS-MS法進(jìn)行同時(shí)測(cè)定，以Agilent Poroshell C18為色譜柱、0.2%甲酸-乙腈（40∶60）為流動(dòng)相，在4 min內(nèi)洗脫，10批次供試品中黃芪甲苷的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.028 mg/g，準(zhǔn)確性和重復(fù)性均良好。該方法的應(yīng)用解決了含黃芪的中藥復(fù)方制劑在同時(shí)檢測(cè)含黃芪甲苷等多成分含量時(shí)的不便。

4 近紅外光譜法

近紅外光與可見光相比，能穿透生物組織，具有較少的散射和吸收，從而為定量檢測(cè)提供了幫助[34]。近紅外光譜（NIRS）技術(shù)是近年來逐步應(yīng)用于各類食品、藥品等定性及定量分析的方法，具有快速、高效、無損、用量低等特點(diǎn)。目前運(yùn)用于中藥復(fù)方分析的研究較少，而由黃芪、丹參等中藥組成的精芪雙參膠囊是其中之一，其有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、活血化瘀、養(yǎng)心安神的功效。傳統(tǒng)的HPLC-ELSD檢測(cè)周期較長(zhǎng)，蘇婷等[35]采用聲光可調(diào)-近紅外光譜法，首次建立了精芪雙參膠囊混合過程的近紅外光（NIR）在線監(jiān)測(cè)模型，黃芪甲苷定量模型的主成分維數(shù)為9，R2為0.954 9，校正均方根偏差（RMSEC）為0.039 2，預(yù)測(cè)均方根偏差（RMSEP）為0.042 6，預(yù)測(cè)平均值為11.74 mg/g，HPLC-ELSD法實(shí)測(cè)平均值為11.38 mg/g，平均偏差為3.16%。任緒華等[36]收集了80批次精芪雙參膠囊，運(yùn)用偏最小二乘法（PLS）建立各指標(biāo)分析值的NIR多元校正模型，各模型RMSEC為0.062 4，RMSEP為0.010 3，決定系數(shù)（correlation）為0.977 1，實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值的偏差為2.02%。結(jié)果都顯示該方法可快速判斷精芪雙參膠囊的混合終點(diǎn)，并能夠快速測(cè)定精芪雙參膠囊中黃芪甲苷的含量，可提高其質(zhì)量控制的水平及縮短周期。

5 其他方法

除上述方法外，對(duì)于中藥復(fù)方中黃芪甲苷含量測(cè)定的研究還利用其它相關(guān)技術(shù)，如反相色譜法、毛細(xì)管電泳法、近紅外漫反射光譜法等，在原有檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上有一定改善，并取得了良好的效果。

6 展望

隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷進(jìn)步，對(duì)于黃芪甲苷的檢測(cè)方法也在不斷改良，伴隨著新型檢測(cè)器的不斷出新，操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好、靈敏度高等特點(diǎn)是研究者選擇的方向。黃芪是臨床常用的中藥之一，也是眾多中藥復(fù)方制劑的主要組成，檢測(cè)技術(shù)的不斷更新將有助于進(jìn)一步完善這些制劑的質(zhì)量控制和提高。

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