乳腺間質(zhì)CD34和平滑肌肌動(dòng)蛋白免疫組化檢測(cè)在乳腺癌診斷中的應(yīng)用

劉 麗 白春俠 曹美榮

（營(yíng)口市中心醫(yī)院，遼寧 營(yíng)口 115000）

乳腺疾病分為乳腺炎癥、乳腺病變、乳腺癌等，需要將惡性腫瘤、良性腫瘤、乳腺病變等進(jìn)行區(qū)分，但是在診斷過(guò)程中由于患者病情復(fù)雜，導(dǎo)致原位癌、浸潤(rùn)性癌、腫瘤間質(zhì)重塑等鑒別工作難以開展[1]。蛋白免疫組化診斷是臨床常見的診斷方法，通過(guò)分析病灶組織中蛋白免疫指標(biāo)陽(yáng)性情況，分析其病灶性質(zhì)，有利于后續(xù)治療。CD34、平滑肌肌動(dòng)蛋白是臨床常見的免疫組化指標(biāo)，研究顯示，在乳腺癌疾病呈顯著表達(dá)，具有較高的診斷價(jià)值[2]。本文主要針對(duì)乳腺間質(zhì)CD34和平滑肌肌動(dòng)蛋白免疫組化檢測(cè)乳腺癌價(jià)值進(jìn)行分析，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 在2018年5月至2019年5月，對(duì)我院收治的150例乳腺疾病患者進(jìn)行回顧性對(duì)比分析，排除精神異常、患有重大疾病、診斷前服用或采取其他輔助治療的患者。根據(jù)患者病變情況將其分為觀察組與對(duì)比組。觀察組是乳腺癌患者，共90例；對(duì)照組是乳腺良性病變患者，共60例。其中，觀察組年齡34～59歲，平均年齡為（41.25±4.21）歲；病程1～9年，平均病程為（4.34±1.23）年；絕經(jīng)患者39例，未絕經(jīng)患者51例；病理類型：51例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，25例浸潤(rùn)性小葉癌，13例單純導(dǎo)管癌，其他1例。對(duì)照組年齡35～58歲，平均年齡為（40.85±4.35）歲；病程1～9年，平均病程為（4.39±1.11）年；絕經(jīng)患者21例，未絕經(jīng)患者39例；病理類型：24例硬化性乳腺病變、36例纖維腺瘤。在一般資料比較方面，兩組差異不大（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 試劑與設(shè)備 采用的試劑為丹科醫(yī)療器械技術(shù)服務(wù)（上海）有限公司生產(chǎn)的乳腺間質(zhì)CD34測(cè)定試劑盒和平滑肌肌動(dòng)蛋白試劑盒。主要采用的設(shè)備為酶標(biāo)儀和血液分析儀，酶標(biāo)儀的型號(hào)為美國(guó)Awareness Stat Fax-210酶標(biāo)儀，血液分析儀的生產(chǎn)廠家和型號(hào)為Sysmex公司SF-3000自動(dòng)血液分析儀。

1.2.2 方法 本文150例乳腺疾病患者采用乳腺間質(zhì)CD34和平滑肌肌動(dòng)蛋白免疫組化進(jìn)行檢測(cè)。①制作樣本：觀察患者病變組織，測(cè)量患者病變組織、腫瘤、癌癥物病變大小、周圍病變情況，描述病變組織、腫物性狀，采用細(xì)胞活檢方式將病變組織、腫物多切面切開，若病變組織、腫物距切緣較遠(yuǎn)，取具有代表性的切緣進(jìn)行細(xì)胞活檢，采用濃度為4%中性甲醛對(duì)組織進(jìn)行固定，制片方法為常規(guī)石蠟制片法，對(duì)樣本進(jìn)行HE染色，并將樣本保存?zhèn)溆谩＂诿庖呓M化檢測(cè)：對(duì)所有樣本進(jìn)行免疫組化染色，采用過(guò)氧化酶SP檢測(cè)法，藥劑為過(guò)氧化酶采用鏈霉素抗生物素蛋白，同時(shí)將樣本進(jìn)行脫蠟、水化處理，采用濃度為10%過(guò)氧化氫阻斷過(guò)氧化酶活性，在無(wú)菌環(huán)境下嚴(yán)格按照試劑盒的適用說(shuō)明進(jìn)行操作，乳腺間質(zhì)CD34按1∶80比例配比，平滑肌肌動(dòng)蛋白按1∶50配比，每張切片上滴加配比后的乳腺間質(zhì)CD34和平滑肌肌動(dòng)蛋白，室溫下培育2 h。滴加酶生物素，觀察DAB顯示情況，并采用蘇木青對(duì)樣本染色，最后封片對(duì)比染色情況。

1.3 評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)乳腺間質(zhì)CD34和平滑肌肌動(dòng)蛋白免疫組化檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判定，對(duì)比兩組患者乳腺間質(zhì)CD34和平滑肌肌動(dòng)蛋白的染色結(jié)果。將不著色細(xì)胞定義為陰性，用（-）表示；陽(yáng)性細(xì)胞位于乳腺間質(zhì)內(nèi)部，呈黃棕色，形狀為長(zhǎng)梭形。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于25%為弱陽(yáng)性，用（+）表示，陽(yáng)性細(xì)胞25%～50%為陽(yáng)性，用（++）表示，陽(yáng)性細(xì)胞大于50%為強(qiáng)陽(yáng)性，用（+++）表示。選取乳腺間質(zhì)呈現(xiàn)清晰黃棕色顆粒部分，采用40倍低倍顯微鏡觀察乳腺間質(zhì)中陽(yáng)性細(xì)胞最密集區(qū)域，換用100以上高倍鏡對(duì)該區(qū)域進(jìn)行放大，由兩名以上醫(yī)師分別進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞占總癌癥細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，并觀察細(xì)胞染色情況與形態(tài)。其中，差率10%以內(nèi)可采用，反之重新檢測(cè)。陽(yáng)性率=（強(qiáng)陽(yáng)性例數(shù)+陽(yáng)性例數(shù)）/總例數(shù)×100.00%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究有關(guān)數(shù)據(jù)采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，組間結(jié)果比較行χ2檢測(cè)，應(yīng)用logistic回歸分析CD34、平滑肌肌動(dòng)蛋白與患者疾病發(fā)展相關(guān)性分析。P＜0.05表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者CD34、平滑肌肌動(dòng)蛋白陽(yáng)性診出率比較 觀察組患者CD34、平滑肌肌動(dòng)蛋白陽(yáng)性診出率均高于對(duì)照組，數(shù)據(jù)差異顯著（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組患者CD34、平滑肌肌動(dòng)蛋白陽(yáng)性診出率比較[n（%）]

2.2 CD34與患者疾病發(fā)展相關(guān)性分析 logistic回歸分析顯示，CD34與患者TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、超聲BI-RADS分級(jí)呈正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。見表2。

表2 CD34與患者疾病發(fā)展相關(guān)性分析

2.3 平滑肌肌動(dòng)蛋白與患者疾病發(fā)展相關(guān)性分析 logistic回歸分析顯示，平滑肌肌動(dòng)蛋白與患者TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、超聲BI-RADS分級(jí)呈正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。見表3。

表3 平滑肌肌動(dòng)蛋白與患者疾病發(fā)展相關(guān)性分析

3 討論

乳腺疾病是女性常見疾病，乳腺癌是女性最常見的浸潤(rùn)性癌癥，致死率僅次于肺癌。若治療不及時(shí)，乳腺癌細(xì)胞隨血液、淋巴液擴(kuò)散，轉(zhuǎn)移到患者全身，嚴(yán)重危及女性患者生命安全[3]。

CD34是一種高度糖基化的穿膜糖蛋白，具有選擇性，表達(dá)在人類及其他哺乳動(dòng)物造血干細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、乳腺未分化間葉細(xì)胞表面，CD34分子表達(dá)隨著細(xì)胞成熟逐漸削弱[4]。根據(jù)孔丹青等[5]研究結(jié)果表明，CD34分子在介導(dǎo)細(xì)胞間黏附作用中具有重要作用，能有效參與人體、動(dòng)物造血干細(xì)胞運(yùn)輸，參與炎性反應(yīng)。肌動(dòng)蛋白屬于球狀多功能蛋白質(zhì)，存在于真核細(xì)胞中。平滑肌動(dòng)蛋白中的細(xì)絲是組成肌細(xì)胞收縮裝置的一部分，以游離單體形式存在，具有移動(dòng)和收縮功能，屬于細(xì)胞功能中必不可少的一部分[6]。根據(jù)張亮等[7]研究結(jié)果表明，腫瘤間質(zhì)在腫瘤、癌癥疾病演變過(guò)程中起著重要作用，腫瘤、癌癥實(shí)質(zhì)細(xì)胞與未分化間葉細(xì)胞相互作用，促進(jìn)良性腫瘤疾病向惡性腫瘤、癌癥發(fā)展。因此，乳腺癌間質(zhì)發(fā)生改變可能與腫瘤間質(zhì)的演變有關(guān)，腫瘤間質(zhì)在演變過(guò)程中CD34失去表達(dá)，轉(zhuǎn)化為平滑肌動(dòng)蛋白出現(xiàn)表達(dá)[8-9]。裴蓓等[10]認(rèn)為該過(guò)程和表達(dá)體現(xiàn)了患有乳腺癌患者的原位癌細(xì)胞向浸潤(rùn)性癌轉(zhuǎn)移過(guò)程,間質(zhì)纖維細(xì)胞獲得平滑肌肌動(dòng)蛋白，失去乳腺間質(zhì)CD34纖維細(xì)胞，可能是癌細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)的標(biāo)志或者先兆，或者該癌癥本身就是一種早期的浸潤(rùn)癌，只是該細(xì)胞陽(yáng)性表現(xiàn)為弱陽(yáng)性或者假陽(yáng)性，常規(guī)染色技術(shù)不能對(duì)其進(jìn)行分辨。本次研究結(jié)果顯示，觀察組患者CD34指標(biāo)、平滑肌肌動(dòng)蛋白指標(biāo)陽(yáng)性診出率明顯高于對(duì)照組，且CD34、平滑肌肌動(dòng)蛋白陽(yáng)性表達(dá)與患者TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、超聲BI-RADS分級(jí)呈正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05），說(shuō)明分析乳腺間質(zhì)CD34、平滑肌肌動(dòng)蛋白陽(yáng)性表達(dá)情況，能夠輔助診斷患者乳腺癌疾病，為主治醫(yī)師提供科學(xué)的診斷依據(jù)。

綜上所述，免疫組化法檢測(cè)乳腺癌組織中乳腺間質(zhì)CD34、平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)情況具有重要意義，能夠有效提高乳腺癌患者和乳腺良性病變患者診斷效率和陽(yáng)性檢出率。因此，該檢測(cè)法在臨床醫(yī)學(xué)中具有推廣意義。