陳寶輝

(江蘇省宿遷市鐘吾醫(yī)院 檢驗(yàn)科，江蘇 宿遷 223800)

0 引言

輸血治療是一項(xiàng)重要的臨床治療手段，在病員救治的過程中發(fā)揮著不可替代的作用，隨著醫(yī)療水平的發(fā)展，輸血安全已日益受到關(guān)注。臨床輸血前需要做ABO、RHD 血型復(fù)檢及交叉配血試驗(yàn)，以保證供血者和受血者的血型一致且供受雙方紅細(xì)胞和血漿之間不存在抗原抗體反應(yīng)，保證臨床輸血安全、有效。但實(shí)際工作中，往往會發(fā)生交叉配血不相合的情況，即主側(cè)或次側(cè)出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集。今對1 例用凝聚胺法及生理鹽水法交叉配血時(shí)主側(cè)不合但經(jīng)微柱凝膠抗人球蛋白卡式法配血主次側(cè)均相合的案例進(jìn)行分析并探討預(yù)防措施。

1 臨床資料

患者蘇某謀，男，76 歲，因股骨粗隆間骨折入住我院骨科，住院號1851420. 患者于2019 年11 月15 日手術(shù)，術(shù)前備懸浮少白細(xì)胞的紅細(xì)胞4U，血型正定型為B 型RHD 陽性，反定型患者血清與Ac、Bc、Oc 的反應(yīng)分別為4+、2+、2+，考慮為不規(guī)則抗體干擾遂用O 型紅細(xì)胞對患者血清吸收后再次檢測，正反定型一致，為B 型RHD 陽性。給以同型血進(jìn)行交叉配血時(shí)主側(cè)凝集(2+)，次側(cè)陰性；凝聚胺法、鹽水法兩種方主側(cè)均凝集，但微柱凝膠抗人球蛋白卡式法主次側(cè)均不凝集，患者無輸血史，否認(rèn)其它重大疾病及傳染病，適齡婚配，子女健全，為查明原因遂做進(jìn)一步檢查。

2 材料和方法

血清學(xué)檢查試劑與方法：血型試劑抗A、抗B 及A、B 標(biāo)準(zhǔn)抗原反定型紅細(xì)胞、不規(guī)則抗體檢測試劑(人血紅細(xì)胞)、微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡均由長春博訊生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)；凝聚胺試劑由珠海(合資)貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；抗D、抗C、抗c、抗E、抗e、抗M、抗N、抗P、抗H 及普細(xì)胞由上海血液生物醫(yī)藥責(zé)任有限公司生產(chǎn)；MN 型的B 和O 型紅細(xì)胞由本實(shí)驗(yàn)室篩選獻(xiàn)血者紅細(xì)胞自制，以上所有試劑均在有效期內(nèi)。血清學(xué)離心機(jī)為長春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)。血型鑒定、唾液試驗(yàn)、不規(guī)則抗體篩查、抗體效價(jià)測定、吸收與放散試驗(yàn)等血清學(xué)技術(shù)均按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第4 版[1]118--138 頁及試劑說明書操作。

3 血清學(xué)檢查結(jié)果

3.1用患者血清分別在生理鹽水介質(zhì)及微柱凝膠抗人球蛋白卡上做抗體篩查試驗(yàn)，凝集強(qiáng)度見表1，生理鹽水介質(zhì)中患者血清與OI、OII、OIII 不規(guī)則抗體篩查檢測試劑(人血紅細(xì)胞)均呈陽性反應(yīng)，在微柱凝膠抗人球蛋白卡中患者血清與OI、OII、OIII 不規(guī)則抗體篩查檢測試劑(人血紅細(xì)胞)均成陰性反應(yīng)。

表1 患者血清在生理鹽水介質(zhì)及微柱凝膠抗人球蛋白卡上抗篩試驗(yàn)?zāi)瘡?qiáng)度

3.2患者紅細(xì)胞與標(biāo)準(zhǔn)抗血清及患者血清與標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞在不同溫度下生理鹽水介質(zhì)中的反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)果及凝集強(qiáng)度見表2，患者血型為B,M,CCDEe，自身細(xì)胞對照試驗(yàn)在不同溫度下均成陰性反應(yīng)。

3.3唾液中A、B、H 物質(zhì)測定 未測出A 物質(zhì)，測得B 及H 物質(zhì)效價(jià)分別為32 和16。

3.4患者血清在鹽水介質(zhì)中與1,3,4,5,6,8,9,10 號普細(xì)胞均成陽性反應(yīng)，與2,7 號普細(xì)胞呈陰性反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)格局見表3，提示存在抗N。

3.5為進(jìn)一步證實(shí)患者血清中抗N 的存在，將患者血清與不同的MN 的B 和O 型供血者紅細(xì)胞在生理鹽水介質(zhì)中不同溫度下進(jìn)行反應(yīng)，4℃和室溫時(shí)患者血清與含N 抗原紅細(xì)胞呈不同程度的凝集反應(yīng)，37℃呈陰性反應(yīng)，結(jié)果見表4，患者血清經(jīng)稀釋后室溫測得抗N 效價(jià)1:32。為了確定抗體性質(zhì)，將患者血清用2-me 液處理60min 后與N 抗原陽性紅細(xì)胞反應(yīng)，結(jié)果無論在鹽水介質(zhì)還是在微柱凝膠抗人球蛋白卡中都不凝集，說明該抗體屬于IgM 類抗體，而非IgG 抗體。

表2 患者血型鑒定及自身細(xì)胞對照實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 普細(xì)胞反應(yīng)格局表

表4 患者血清與不同的MN 的B 和O 型供血者紅細(xì)胞在生理鹽水介質(zhì)中不同溫度下的反應(yīng)凝集強(qiáng)度

3.6 吸收放散實(shí)驗(yàn)

患者血清用ON 細(xì)胞經(jīng)4℃吸收1h 后，在56℃對ON 細(xì)胞進(jìn)行放散，放散液可被ON 細(xì)胞凝集，吸收后的血清不再與ON細(xì)胞發(fā)生凝集，進(jìn)一步證實(shí)患者血清中含N 抗體。

4 討論

通過以上實(shí)驗(yàn)可知該患者血型為B,M,CCDEe，直抗陰性說明此抗體為同種抗體而非自身抗體。血清中除有抗-A 抗體外還含有抗-N，稀釋后室溫測得抗N 效價(jià)1:32，為確定此抗體性質(zhì)，患者血清經(jīng)2-me 液37℃處理60min 后，與N 抗原陽性紅細(xì)胞在鹽水介質(zhì)和微柱凝膠抗人球蛋白卡中都不凝集，說明該抗體屬于IgM 類抗體，而非IgG 抗體，從反應(yīng)情況來看，其血清中抗N 在4℃和室溫反應(yīng)活性強(qiáng)，在37℃活性消失。本次配血所用的微柱凝膠抗人球蛋白卡式試驗(yàn)需37℃孵育15min，N 抗體為冷抗體，溫度升高活性減弱，所以本次抗人球蛋白卡式法配血呈陰性反應(yīng)。鹽水配血法和凝聚胺配血法沒有37℃孵育過程加之寒冷季節(jié)室溫較低故呈陽性反應(yīng)。

在MNS 血型系統(tǒng)中，血型抗體抗N 較抗M 少見，且多為IgM 型，可引起血型鑒定困難和交叉配血不合[2]。雖然抗N 活性在37℃時(shí)活性較小，但在臨床輸血過程中由于輸血速度過快、輸血量過大、環(huán)境溫度較低、術(shù)中麻醉等原因可導(dǎo)致患者體溫或局部體溫下降，從而使抗N 活性升高，可引起嚴(yán)重的輸血反應(yīng)。發(fā)生冷抗體反應(yīng)的溫度范圍對于臨床癥狀的出現(xiàn)往往比冷凝集的程度更重要。本例患者男性，無輸血史，子女健全，且為IgM 類抗體，考慮其血清中抗體應(yīng)為非紅細(xì)胞刺激天然產(chǎn)生的，篩選N 抗原陰性的獻(xiàn)血者紅細(xì)胞用生理鹽水法、凝聚胺法及微柱凝膠抗人球蛋白卡式法交叉配血主次側(cè)均無凝集，給予該患者輸注，注意保暖，輸血過程密切觀察沒有發(fā)生輸血不良反應(yīng)。

綜上，在血型鑒定及交叉配血過程中，當(dāng)正反定型結(jié)果與Landsteriner 規(guī)則不符時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行血清學(xué)檢驗(yàn)，應(yīng)從不同角度思考，選擇有價(jià)值的鑒別試驗(yàn)如復(fù)核血型、吸收試驗(yàn)、放散試驗(yàn)等多方面地排除、鑒定，也可采用分泌型測定、蛋白電泳分析、血型家系遺傳學(xué)調(diào)查等[3]。血型鑒定單做正定型是不安全、不完美的，一定要加做反定型，且做反定型時(shí)一定要加做 O細(xì)胞，O 細(xì)胞對正確的血型鑒定 、發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體及稀有血型等方面都有重要意義[4]。交叉配血主側(cè)不合時(shí)，確認(rèn)血型無誤前提下要用多種方法進(jìn)行配血如生理鹽水法、抗人球蛋白法、凝聚胺法、酶法等，注意不同溫度的反應(yīng)強(qiáng)度，進(jìn)行凝集強(qiáng)度比較，辨別冷抗體和溫抗體，以便發(fā)現(xiàn)更多的不完全抗體，分析抗體性質(zhì)，尋找解決對策，確保輸血治療的安全性和有效性，提升救治水平。輸血工作任重而道遠(yuǎn)，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)，認(rèn)真求實(shí)的精神才是尊重生命敬畏生命的體現(xiàn)。