山橙莖中非生物堿類化學(xué)成分研究

李玉潔，李 娟，謝 瀾，周俊宇，李秋璇，劉艷萍*，付艷輝*

山橙莖中非生物堿類化學(xué)成分研究

李玉潔1, 2, 3，李 娟2, 3，謝 瀾2, 3，周俊宇2, 3，李秋璇2, 3，劉艷萍2, 3*，付艷輝1, 2, 3*

1. 福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122 2. 海南師范大學(xué) 南藥資源產(chǎn)業(yè)化關(guān)鍵技術(shù)研究海南省工程研究中心，海南 ?？?571158 3. 海南師范大學(xué) 熱帶藥用資源化學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?571158

研究夾竹桃科山橙屬植物山橙莖中的非生物堿類化學(xué)成分。綜合運(yùn)用硅膠柱色譜、ODS柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜以及制備型高效液相色譜等色譜學(xué)方法進(jìn)行系統(tǒng)分離和純化，根據(jù)化合物的理化性質(zhì)及其波譜學(xué)數(shù)據(jù)，并通過(guò)與文獻(xiàn)中報(bào)道的波譜數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)照，鑒定化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。從山橙莖的90%乙醇提取物的石油醚萃取部位中分離得到了18個(gè)非生物堿類化合物，分別鑒定為lyoniresinol（1）、4--larreatricin（2）、curcasinlignan B（3）、pinnatifidanin C I（4）、-guaiacylglycerol- 8--4′-(coniferyl alcohol) ether（5）、cephafortin B（6）、vladinol D（7）、tripterygiol（8）、薔薇酸（9）、30-醛基羽扇豆醇（10）、古柯二醇（11）、β-香樹(shù)酯酮（12）、豆甾-7-烯-3β-醇（13）、豆甾-3,6-二酮（14）、α-波菜甾酮（15）、blumenol A（16）、4,5-dihydroblumenol（17）和去氫催吐蘿芙木醇（18）。其中化合物1～8為木脂素類化合物，化合物9～12為三萜類化合物，化合物13～15為甾體類化合物，16～18為倍半萜類化合物。所有化合物均為首次從山橙屬植物中分離得到。

山橙；木脂素；三萜；甾體；倍半萜；薔薇酸；30-醛基羽扇豆醇；古柯二醇；β-香樹(shù)酯酮；去氫催吐蘿芙木醇

夾竹桃科（Apocynaceae）山橙屬J. R. et G. Forst.植物全世界約有53種，集中分布于亞洲的熱帶、亞熱帶以及大洋洲地區(qū)。分布于我國(guó)的山橙屬植物有11種，主要分布于華南、西南以及臺(tái)灣等省區(qū)。山橙屬植物大多為民間藥用植物，在民間常用于治療腹痛、消化不良、小兒疝氣、小兒疳疾、小兒腦膜炎、睪丸炎、風(fēng)濕性心臟病以及骨折等疾病[1-2]?，F(xiàn)代植物化學(xué)研究表明山橙屬植物中富含結(jié)構(gòu)多樣的單萜吲哚生物堿類化合物，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明山橙屬植物中分離得到單萜吲哚生物堿類化合物具有廣泛的生物活性，包括抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗結(jié)核桿菌、舒張血管以及神經(jīng)保護(hù)活性等多種生物活性[3-10]。山橙Champ. ex Benth.為夾竹桃科山橙屬植物，主要分布于我國(guó)海南、廣東和廣西等地。山橙的果實(shí)具有行氣、除濕、止痛、殺蟲(chóng)等功效，可用于治療腹痛、消化不良、疝氣、小兒疳積以及睪丸炎等[1-2]。山橙的莖和葉為海南黎族民間常用藥，常用于腫瘤和炎癥性疾病的治療。目前有關(guān)山橙的研究主要集中在其所含的單萜吲哚生物堿類化學(xué)成分及其生物活性[8-10]，關(guān)于其所含的非生物堿類化學(xué)成分的研究報(bào)道較少[11-12]，為了進(jìn)一步闡明山橙的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)為了更合理地開(kāi)發(fā)利用該植物資源，充分發(fā)揮其藥用價(jià)值，本課題組對(duì)山橙莖的90%乙醇提取物中的非生物堿類化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，從中分離得到了18個(gè)化合物，分別鑒定為lyoniresinol（1）、4--larreatricin（2）、curcasinlignan B（3）、pinnatifidanin C I（4）、-guaiacylglycerol-8--4′-(coniferyl alcohol) ether（5）、cephafortin B（6）、vladinol D（7）、tripterygiol（8）、薔薇酸（euscaphic acid，9）、30-醛基羽扇豆醇（30-oxo-lupeol，10）、古柯二醇（erythrodiol，11）、β-香樹(shù)酯酮（β- amyrenone，12）、豆甾-7-烯-3β-醇（stigmast-7-en- 3β-ol，13）、豆甾-3,6-二酮（stigmastan-3,6-dione，14）、α-波菜甾酮（α-spinasterone，15）、blumenol A（16）、4,5-dihydroblumenol（17）和去氫催吐蘿芙木醇（dehydrovomifoliol，18）。其中化合物1～8為木脂素類化合物，化合物9～12為三萜類化合物，化合物13～15為甾體類化合物，16～18為倍半萜類化合物。所有化合物均為首次從山橙屬植物中分離得到。

1 儀器與材料

Finnigan LCQ Advantange MAX 質(zhì)譜儀，美國(guó)Thermo Fisher Scientific；Bruker AV-400型超導(dǎo)核磁共振儀，德國(guó)Bruker公司；中低壓制備色譜，瑞士Buchi公司；Agilent1200分析型高效液相色譜儀，美國(guó)Agilent Technologies有限公司；Thermo Fisher UltiMate 3000制備型高效液相色譜儀，美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司；Waters XBridge C18分析型色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）和Waters XBridge C18制備型色譜柱（250 mm×20 mm，5 μm），美國(guó)Waters公司；薄層硅膠GF254和柱色譜硅膠，青島海洋化工廠；Sephadex LH-20凝膠，美國(guó)Amersham Blosclences公司；ODS色譜材料（C18，10～40 μm），德國(guó)Merck公司；YOKO-ZX紫外分析暗箱，武漢藥科新技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司；N-1001型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，日本EYELA公司；4001N型電子天平，上海民橋精密科技儀器有限公司；所用試劑均為西隴化工股份有限公司的色譜純或者分析純?cè)噭?/p>

山橙莖于2019年6月采集于海南省霸王嶺國(guó)家森林公園，經(jīng)海南師范大學(xué)南藥資源產(chǎn)業(yè)化關(guān)鍵技術(shù)研究海南省工程研究中心付艷輝研究員鑒定為夾竹桃科山橙屬植物山橙Champ. ex Benth.的莖，憑證標(biāo)本（HNMESU20190618）保存于海南師范大學(xué)熱帶藥用資源化學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室植物標(biāo)本室。

2 提取與分離

將陰干的山橙莖14.9 kg粉碎后用90%乙醇室溫浸泡提取3次，每次浸泡提取1周，合并提取液，減壓濃縮得總浸膏1.56 kg。浸膏加蒸餾水混懸，依次用石油醚和醋酸乙酯進(jìn)行萃取，減壓濃縮后得石油醚萃取部位216.8 g和醋酸乙酯萃取部位486.3 g。石油醚萃取部位（215.0 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜分離，以石油醚-丙酮體系為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫（95∶5～25∶75），得到7個(gè)流分Fr. 1～7。Fr. 2（38.6 g）經(jīng)反相ODS柱色譜分離，以甲醇-水體系（65∶35～100∶0）為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，得到6個(gè)亞流分（Fr. 2A～2F）。Fr. 2B（3.7 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜進(jìn)行分離，以石油醚-醋酸乙酯體系為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫（95∶5～40∶60），再經(jīng)制備型高效液相制備（乙腈-水75∶25）得到化合物1（12.3 mg）、2（62.3 mg）、8（42.8 mg）和13（67.5 mg）；Fr. 2C （5.3 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜進(jìn)行分離，以石油醚-醋酸乙酯（80∶20～30∶70）為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜純化后，再經(jīng)制備型高效液相色譜制備（甲醇-水82∶18）得到化合物3（6.7 mg）、7（21.5 mg）、11（23.6 mg）、12（9.2 mg）和18（15.6 mg）；Fr. 3（51.6 g）經(jīng)反相ODS柱色譜分離，以甲醇-水體系（55∶45～100∶0）為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，得到7個(gè)亞流分（Fr. 3A～3G）；Fr. 3B（7.2 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜進(jìn)行分離，以石油醚-醋酸乙酯（75∶25～30∶70）體系為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜純化后，再經(jīng)制備型高效液相色譜制備[甲醇-水（68∶32）]得到化合物4（25.8 mg）、5（13.2 mg）、14（7.3 mg）和15（42.1 mg）；Fr. 3C（6.2 g）經(jīng)硅膠柱色譜分離，以石油醚-丙酮（80∶20～40∶60）為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜純化后，再經(jīng)制備型高效液相色譜制備[乙腈-水（58∶32）]得到化合物6（10.6 mg）、9（9.3 mg）、10（33.9 mg）、16（54.8 mg）和17（62.3 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色油狀物；C22H28O8，ESI-MS/: 421 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.52 (1H, s, H-2′), 6.38 (2H, s, H-2, 6), 4.06 (1H, d,= 6.8 Hz, H-7), 3.91 (3H, s, 3′-OCH3), 3.80 (6H, s, 3, 5-OCH3), 3.76 (1H, m, H-9α), 3.72 (1H, m, H-9′α), 3.59 (1H, m, H-9′β), 3.52 (1H, dd,= 11.6, 6.8 Hz, H-9β), 3.29 (3H, s, 5′-OCH3), 2.58 (2H, m, H-7′) 1.88 (1H, m, H-8), 1.69 (1H, m, H-8′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 147.0 (C-3), 146.4 (C-3′), 145.7 (C-5′), 138.5 (C-1), 137.2 (C-4′), 133.1 (C-4), 128.9 (C-1′), 125.4 (C-6′), 105.9 (C-2′), 105.7 (C-6), 66.8 (C-9′), 64.0 (C-9), 59.7 (5′-OCH3), 56.6 (3, 5-OCH3), 55.9 (3′-OCH3), 49.6 (C-8), 43.1 (C-7), 40.3 (C-8′), 33.6 (C-7′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)中報(bào)道基本一致[13]，故鑒定化合物1為lyoniresinol。

化合物2：淡黃色油狀物；C18H20O3，ESI-MS/: 285 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.32 (4H, d,= 7.8 Hz, H-2, 6, 2′, 6′), 6.79 (4H, d,= 7.8 Hz, H-3, 5, 3′, 5′), 2.31 (2H, m, H-8, 8′), 4.48 (2H, d,= 7.8 Hz, H-7, 7′), 0.98 (6H, d,= 7.2 Hz, H-9, 9′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 155.3 (C-4, 4′), 134.6 (C-1, 1′), 127.9 (C-2, 6, 2′, 6′), 115.4 (C-3, 5, 3′, 5′), 87.6 (C-7, 7′), 44.8 (C-8, 8′), 13.1 (C-9, 9′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)中報(bào)道基本一致[14]，故鑒定化合物2為4--larreatricin。

化合物3：淡黃色油狀物；C18H18O6，ESI-MS/: 331 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 9.78 (1H, s, H-7′), 7.52 (1H, d,= 1.6 Hz, H-6′), 7.39 (1H, d,= 1.6 Hz, H-4′), 6.89 (3H, s, H-2, 4, 6), 5.58 (1H, d,= 7.3 Hz, H-7), 3.98 (2H, m, H-9), 3.87 (3H, s, 3′-OCH3), 3.76 (3H, s, 3-OCH3), 3.69 (1H, m, H-8)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 191.8 (C-7′), 153.4 (C-4′), 147.8 (C-3), 146.9 (C-5), 144.4 (C-3′), 131.5 (C-1), 131.0 (C-1′), 127.6 (C-5′), 120.7 (C-6′), 118.9 (C-2), 115.5 (C-4), 112.6 (C-2′), 110.7 (C-6), 88.8 (C-7), 62.6 (C-9), 55.8 (3′-OCH3), 55.6 (3-OCH3), 51.9 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)中報(bào)道基本一致[15]，故鑒定化合物3為curcasinlignan B。

化合物4：淡黃色油狀物；C20H22O7，ESI-MS/: 375 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 7.58 (1H, s, H-6′), 7.46 (1H, s, H-2′), 6.89 (1H, s, H-2), 6.78 (1H, s, H-4), 6.78 (1H, s, H-6), 5.61 (1H, d,= 7.0 Hz, H-7), 3.85 (3H, s, 3-OCH3), 3.81 (2H, t,= 7.0 Hz, H-9′), 3.76 (3H, s, 3′-OCH3), 3.69 (2H, m, H-9), 3.56 (1H, m, H-8), 3.10 (1H, t,= 7.0 Hz, H-8′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 197.2 (C-7′), 151.9 (C-4′), 147.7 (C-3), 146.8 (C-5), 143.5 (C-3′), 131.7 (C-1), 130.9 (C-5′), 129.8 (C-2′), 118.8 (C-6′), 118.4 (C-6), 115.5 (C-4), 112.0 (C-1′), 110.5 (C-2), 88.6 (C-7), 62.8 (C-9), 56.9 (C-9′), 55.8 (3-OCH3), 55.5 (3′-OCH3), 52.4 (C-8), 41.2 (C-8′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[16]，故鑒定化合物4為pinnatifidanin C I。

化合物5：淡黃色油狀物；C20H24O7，ESI-MS/: 377 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.12 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 7.03 (1H, d,= 8.2 Hz, H-5′), 6.99 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.88 (1H, dd,= 8.2, 2.0 Hz, H-6′), 6.84 (1H, dd,= 8.2, 2.0 Hz, H-6), 6.77 (1H, d,= 8.2 Hz, H-5), 6.49 (1H, d,= 16.3 Hz, H-7′), 6.26 (1H, dt,= 16.3, 5.8 Hz, H-8′), 4.91 (1H, d,= 2.8 Hz, H-7), 4.32 (1H, m, H-8), 4.18 (2H, dd,= 5.8, 1.6 Hz, H-9′), 3.87 (3H, s, 3-OCH3), 3.79 (3H, s, 3′-OCH3), 3.72 (1H, dd,= 12.0, 3.8 Hz, H-9α), 3.47 (1H, dd,= 12.0, 5.8 Hz, H-9β)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 152.0 (C-3′), 149.3 (C-4′), 149.0 (C-3), 147.3 (C-4), 133.9 (C-1), 133.3 (C-1′), 131.5 (C-8′), 128.8 (C-7′), 120.9 (C-6′), 120.8 (C-6), 119.0 (C-5′), 116.1 (C-5), 111.9 (C-2), 111.4 (C-2′), 87.2 (C-8), 73.9 (C-7), 63.8 (C-9′), 62.1 (C-9), 56.8 (3-OCH3), 56.3 (3′-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[17]，故鑒定化合物5為- guaiacylglycerol-8--4′-(coniferyl alcohol) ether。

化合物6：淡黃色油狀物；C18H20O6，ESI-MS/: 333 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 9.06 (1H, s, 4-OH), 6.90 (2H, s, H-2, 5), 6.76 (2H, s, H-6, 6′), 6.57 (1H, s, H-3′), 5.41 (1H, d,= 6.8 Hz, H-7), 5.06 (1H, s, 9-OH), 3.76 (3H, s, 3-OCH3), 3.72 (1H, m, H-9), 3.71 (3H, s, 1′-OCH3), 3.67 (3H, m, H-9), 3.66 (3H, s, 2′-OCH3), 3.60 (1H, m, H-8)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 153.6 (C-4′), 149.7 (C-2′), 147.6 (C-3), 146.3 (C-4), 142.9 (C-1′), 133.0 (C-1), 118.5 (C-2), 118.1 (C-5′), 115.4 (C-5), 109.9 (C-6), 109.7 (C-6′), 94.9 (C-3′), 87.0 (C-7), 63.5 (C-9), 56.7 (1′-OCH3), 55.8 (2′-OCH3), 55.5 (3-OCH3), 52.9 (C-8)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[18]，故鑒定化合物6為cephafortin B。

化合物7：淡黃色油狀物；C20H22O7，ESI-MS/: 375 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.86 (1H, brs, H-2), 6.84 (1H, brs, H-2′), 6.81 (1H, overlapped, H-5), 6.80 (1H, overlapped, H-5′), 6.75 (1H, overlapped, H-6′), 6.73 (1H, overlapped, H-6), 4.49 (1H, d,= 7.6 Hz, H-7), 4.12 (1H, m, H-9′β), 4.07 (1H, m, H-7′), 4.02 (1H, m, H-9′α), 3.93 (3H, s, 3-OCH3), 3.90 (3H, s, 3′-OCH3) 3.29 (2H, m, H-9), 2.57 (1H, m, H-8′), 1.98 (1H, m, H-8)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 199.1 (C-7), 151.4 (C-4), 147.4 (C-3), 147.2 (C-4′), 146.0 (C-3′), 132.9 (C-1′), 129.6 (C-1), 124.0 (C-6), 120.6 (C-6′), 114.4 (C-5′), 114.2 (C-5), 110.8 (C-2), 109.6 (C-2′), 84.3 (C-7′), 70.9 (C-9), 62.1 (C-9′), 56.2 (3-OCH3), 55.8 (3′-OCH3), 52.3 (C-8′), 50.0 (C-8)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[19]，故鑒定化合物7為vladinol D。

化合物8：淡黃色油狀物；C22H28O8，ESI-MS/: 421 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 6.53 (2H, brs, H-2′, 6′), 6.39 (2H, brs, H-2, 6), 4.67 (1H, d,= 6.0 Hz, H-7′), 3.91 (1H, t,= 7.3 Hz, H-9α), 3.73 (12H, s, 3, 3′, 5, 5′-OCH3), 3.68 (1H, m, H-9′α), 3.58 (1H, t,= 7.3 Hz, H-9′β), 3.51 (1H, m, H-9β), 2.79 (1H, dd,= 12.8, 4.8 Hz, H-7α), 2.60 (1H, m, H-8), 2.38 (1H, t,= 12.8 Hz, H-7β), 2.18 (1H, m, H-8′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 148.1 (C-3, 5), 147.9 (C-3′, 5′), 134.6 (C-4′), 133.9 (C-1′), 133.7 (C-4), 131.0 (C-1), 106.1 (C-2, 6), 103.3 (C-2′, 6′), 82.0 (C-7′), 71.9 (C-9), 56.0 (3, 3′, 5, 5′-OCH3), 58.8 (C-9′), 52.5 (C-8′), 42.1 (C-8), 32.8 (C-7)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[20]，故鑒定化合物8為tripterygiol。

化合物9：白色無(wú)定形粉末；C30H48O5，ESI-MS/: 489 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, C5D5N): 5.21 (1H, t,= 2.8 Hz, H-12), 3.80 (1H, dt,= 11.2, 3.8 Hz, H-2β), 3.18 (1H, d,= 2.3 Hz, H-3β), 1.22 (3H, s, 27-CH3), 1.08 (3H, s, 29-CH3), 0.89 (3H, s, 23-CH3), 0.86 (3H, s, 26-CH3), 0.79 (3H, d,= 6.8 Hz, 30-CH3), 0.68 (3H, s, 25-CH3), 0.58 (3H, s, 24-CH3)；13C-NMR (100 MHz, C5D5N): 182.8 (C-28), 140.5 (C-13), 130.0 (C-12), 80.1 (C-3), 73.9 (C-19), 67.3 (C-2), 55.4 (C-18), 50.0 (C-5), 49.1 (C-17), 48.3 (C-9), 43.2 (C-20), 43.0 (C-1), 42.8 (C-14), 41.6 (C-8), 39.7 (C-22), 39.5 (C-10), 38.0 (C-4), 34.5 (C-7), 30.0 (C-15), 29.5 (C-23), 27.8 (C-21), 27.4 (C-29), 26.9 (C-16), 25.2 (C-27), 25.0 (C-11), 22.9 (C-24), 20.0 (C-6), 17.9 (C-26), 17.2 (C-30), 16.8 (C-25)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[21]，故鑒定化合物9為薔薇酸。

化合物10：白色無(wú)定形粉末；C30H48O2，ESI-MS/: 441 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 9.48 (1H, brs, H-30), 6.19 (1H, brs, H-29α), 5.88 (1H, brs, H-29β), 3.21 (1H, dd,= 11.2, 4.8 Hz, H-3), 1.00, 0.95, 0.90, 0.81, 0.77, 0.69 (3H×6, s, CH3×6)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 195.1 (C-30), 156.9 (C-20), 133.0 (C-29), 78.9 (C-3), 54.8 (C-5), 51.2 (C-18), 50.1 (C-9), 42.9 (C-17), 42.7 (C-14), 40.8 (C-8), 40.0 (C-22), 39.2 (C-4), 38.9 (C-1), 37.9 (C-13), 37.0 (C-10), 36.6 (C-19), 35.4 (C-16), 34.3 (C-7), 32.9 (C-21), 28.0 (C-23), 27.8 (C-12), 27.4 (C-15), 27.3 (C-2), 21.0 (C-11), 18.8 (C-6), 17.9 (C-28), 16.0 (C-25), 15.6 (C-26), 15.1 (C-24), 13.9 (C-27)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[22]，故鑒定化合物10為30-醛基羽扇豆醇。

化合物11：白色無(wú)定形粉末；C30H50O2，ESI-MS/: 443 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 5.19 (1H, t,= 3.9 Hz, H-12), 3.51 (1H, d,= 10.8 Hz, H-18α), 3.19 (1H, m, H-3), 3.15 (1H, d,= 10.8 Hz, H-18β), 1.19, 0.99, 0.95, 0.92, 0.88, 0.85, 0.77 (3H×7, s, CH3×7)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 143.9 (C-13), 122.0 (C-12), 78.9 (C-3), 70.1 (C-28), 54.8 (C-5), 47.4 (C-17), 47.1 (C-9), 46.6 (C-19), 42.3 (C-18), 41.8 (C-14), 40.2 (C-8), 38.9 (C-4), 38.5 (C-1), 37.0 (C-10), 33.9 (C-21), 32.9 (C-29), 32.5 (C-7), 31.0 (C-22), 30.8 (C-20), 27.9 (C-23), 27.2 (C-2), 26.0 (C-27), 25.2 (C-15), 24.0 (C-11), 23.5 (C-30), 21.9 (C-16), 18.2 (C-6), 17.0 (C-26), 15.8 (C-24), 15.4 (C-25)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[23]，故鑒定化合物11為古柯二醇。

化合物12：白色無(wú)定形粉末；C30H48O，ESI-MS/: 425 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 5.38 (1H, t,= 3.9 Hz, H-12), 1.19, 1.11, 1.09, 1.03, 0.99, 0.96, 0.90, 0.85 (3H×8, s, CH3×8)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 217.9 (C-3), 145.8 (C-13), 122.0 (C-12), 56.2 (C-5), 48.0 (C-4), 47.5 (C-18), 46.9 (C-9), 46.7 (C-19), 42.0 (C-14), 39.9 (C-8), 39.1 (C-1), 37.4 (C-22), 37.0 (C-10), 34.5 (C-21), 34.1 (C-2), 33.8 (C-29), 32.7 (C-17), 32.3 (C-7), 31.0 (C-20), 29.2 (C-28), 26.9 (C-16 ), 26.6 (C-23), 26.4 (C-15), 26.0 (C-27), 24.1 (C-11), 23.9 (C-30), 21.6 (C-24), 20.2 (C-6), 17.7 (C-26), 15.8 (C-25)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[24]，故鑒定化合物12為β-香樹(shù)酯酮。

化合物13：白色無(wú)定形粉末；C29H50O，ESI-MS/: 415 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 5.18 (1H, m, H-7), 3.59 (1H, m, H-3), 1.00 (3H, d,= 7.2 Hz, H-21), 0.88 (3H, t,= 7.2 Hz, H-29), 0.83 (3H, d,= 7.2 Hz, H-26), 0.79 (3H, d,= 7.2 Hz, H-27), 0.76 (3H, s, H-19), 0.58 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 139.9 (C-8), 117.6 (C-7), 70.9 (C-3), 55.9 (C-17), 55.0 (C-14), 50.0 (C-9), 46.1 (C-24), 43.3 (C-13), 40.7 (C-5), 40.0 (C-12), 37.9 (C-4), 37.1 (C-1), 36.8 (C-20), 35.0 (C-10), 33.9 (C-22), 31.4 (C-2), 30.1 (C-6), 28.9 (C-25), 28.0 (C-16), 25.9 (C-23), 23.0 (C-15), 22.8 (C-28), 21.6 (C-11), 20.0 (C-27), 18.9 (C-26), 18.3 (C-21), 12.4 (C-19), 12.1 (C-29), 11.6 (C-18)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[25]，故鑒定化合物13為豆甾-7-烯-3β-醇。

化合物14：白色無(wú)定形粉末；C29H48O2，ESI-MS/: 429 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3):1.02 (3H, s, H-19), 0.89 (3H, d,= 6.6 Hz, H-21), 0.80～0.84 (3H×3, m, H-26, 27, 29), 0.68 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 210.9 (C-3), 208.8 (C-6), 57.0 (C-5), 56.1 (C-17), 56.0 (C-14), 53.2 (C-9), 46.0 (C-7), 45.2 (C-24), 43.2 (C-13), 41.1 (C-10), 38.9 (C-2), 38.2 (C-12), 38.0 (C-1), 37.0 (C-8), 35.8 (C-20), 35.1 (C-4), 33.3 (C-22), 29.3 (C-25), 27.9 (C-16), 26.1 (C-23), 24.2 (C-15), 23.2 (C-28), 21.5 (C-11), 19.9 (C-26), 19.2 (C-27), 18.7 (C-21), 12.4 (C-18), 11.9 (C-19), 11.7 (C-29)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[26]，故鑒定化合物14為豆甾-3,6-二酮。

化合物15：白色無(wú)定形粉末；C29H46O，ESI-MS/: 411 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3):: 5.17 (1H, brs, H-7), 5.18 (1H, dd,= 15.2, 8.2 Hz, H-22), 5.02 (1H, dd,= 15.2, 8.2 Hz, H-23), 1.06 (3H, d,= 7.0 Hz, H-21), 1.02 (3H, s, H-19), 0.91 (3H, d,= 7.0 Hz, H-27), 0.85 (3H, d,= 7.0 Hz, H-26), 0.81 (3H, t,= 7.0 Hz, H-29), 0.60 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 212.0 (C-3), 140.3 (C-8), 138.3 (C-22), 130.4 (C-23), 117.0 (C-7), 56.0 (C-17), 55.1 (C-14), 51.1 (C-24), 49.0 (C-9), 44.4 (C-4), 43.3 (C-13), 42.7 (C-5), 40.8 (C-20), 39.9 (C-12), 39.0 (C-1), 37.9 (C-2), 34.4 (C-10), 32.0 (C-25), 30.0 (C-6), 28.9 (C-16), 25.5 (C-28), 22.9 (C-15), 21.8 (C-11), 21.6 (C-27), 21.4 (C-21), 20.2 (C-26), 12.9 (C-19), 12.3 (C-29), 11.9 (C-18)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[27]，故鑒定化合物15為α-波菜甾酮。

化合物16：無(wú)色油狀物；C13H20O3，ESI-MS/: 225 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 5.92 (1H, s, H-4), 5.81 (1H, d,= 15.8, 6.0 Hz, H-8), 5.69 (1H, d,= 15.8 Hz, H-7), 4.37 (1H, m, H-9), 2.41 (1H, d,= 17.2 Hz, H-2α), 2.14 (1H, d,= 17.2 Hz, H-2β), 1.88 (3H, d,= 1.2 Hz, H-13), 1.25 (3H, d,= 7.0 Hz, H-10), 0.99 (3H, s, H-12), 0.95 (3H, s, H-11)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 199.0 (C-3), 164.1 (C-5), 135.9 (C-8), 128.8 (C-7), 127.0 (C-4), 79.2 (C-6), 67.9 (C-9), 49.9 (C-2), 41.4 (C-1), 24.2 (C-10), 23.9 (C-12), 22.9 (C-11), 19.3 (C-13)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[28]，故鑒定化合物16為blumenol A。

化合物17：無(wú)色油狀物；C13H22O3，ESI-MS/: 227 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 5.81 (1H, dd,= 16.0, 6.0 Hz, H-8), 5.72 (1H, d,= 16.0 Hz, H-7), 4.39 (1H, m, H-9), 2.79 (1H, d,= 14.2 Hz, H-2α), 2.41 (1H, d,= 12.8 Hz, H-4α), 2.25 (1H, m, H-5), 2.18 (1H, d,= 12.8 Hz, H-4β), 1.87 (1H, d,= 14.2 Hz, H-2β), 1.29 (3H, d,= 6.8 Hz, H-10), 1.00 (3H, s, H-12), 0.97 (3H, s, H-11), 0.90 (3H, d,= 6.8 Hz, H-13)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 211.2 (C-3), 135.2 (C-8), 131.9 (C-7), 77.2 (C-6), 68.4 (C-9), 51.7 (C-2), 45.4 (C-4), 42.8 (C-1), 36.6 (C-5), 24.9 (C-12), 24.6 (C-11), 23.9 (C-10), 15.8 (C-13)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[29]，故鑒定化合物17為4,5-dihydroblumenol A。

化合物18：無(wú)色油狀物；C13H18O3，ESI-MS/: 223 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-d): 7.01 (1H, d,= 16.3 Hz, H-7), 6.28 (1H, d,= 16.3 Hz, H-8), 5.91 (1H, s, H-4), 2.66 (1H, d,=17.2 Hz, H-2α), 2.28 (3H, s, H-10), 2.21 (1H, d,= 17.2 Hz, H-2β), 1.79 (3H, s, H-11), 1.01 (3H, s, H-12), 0.93 (3H, s, H-13)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d): 197.9 (C-3), 197.0 (C-9), 161.7 (C-5), 146.9 (C-7), 130.3 (C-8), 126.6 (C-4), 77.9 (C-6), 49.3 (C-2), 40.9 (C-1), 27.3 (C-10), 23.9 (C-12), 22.9 (C-13), 18.3 (C-11)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[30]，故鑒定化合物18為催吐蘿芙木醇。

4 討論

本研究綜合運(yùn)用多種現(xiàn)代色譜分離技術(shù)和波譜鑒定方法對(duì)夾竹桃科山橙屬植物山橙莖的90%乙醇提取物中的非生物堿類化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，從中分離鑒定了18個(gè)化合物，包括8個(gè)木脂素類化合物，4個(gè)三萜類化合物，3個(gè)甾體類化合物以及3個(gè)倍半萜類化合物，所有化合物均為首次從山橙屬植物中分離得到。本研究豐富了山橙作為民間藥用植物的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)可為山橙這種民間藥用植物資源的合理開(kāi)發(fā)與利用提供重要科學(xué)依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Non-alkaloid constituents from stems of

LI Yu-jie1, 2, 3, LI Juan2, 3, XIE Lan2, 3, ZHOU Jun-yu2, 3, LI Qiu-xuan2, 3, LIU Yan-ping2, 3, FU Yan-hui1, 2, 3

1. School of Pharmacy, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350122, China 2. Engineering Research Center for Industrialization of Southern Medicinal Plants Resources of Hainan Province, Hainan Normal University, Haikou 571158, China 3. Key Laboratory of Tropical Medicinal Resource Chemistry of Ministry of Education, Hainan Normal University, Haikou 571158, China

To study the non-alkaloid constituents from the stems of Shancheng ().The non-alkaloid constituents from the stems ofwere separated and purified by silica gel, ODS, Sephadex LH-20 gel column chromatographies and preparative HPLC. Their structures were identified by physicochemical properties, spectroscopic analysis, as well as the comparisons with the data reported in literature.A total of 18 compounds were isolated from the petroleum ether extract of the 90% ethanol extract of the stems of, which were identified as lyoniresinol (1), 4--larreatricin (2), curcasinlignan B (3), pinnatifidanin C I (4),-guaiacylglycerol-8--4′-(coniferyl alcohol) ether (5), cephafortin B (6), vladinol D (7), tripterygiol (8), euscaphic acid (9), 30-oxo-lupeol (10), erythrodiol (11), β-amyrenone (12), stigmast-7-en-3β-ol (13), stigmastan-3, 6-dione (14), α-spinasterone (15), blumenol A (16), 4, 5-dihydroblumenol (17) and dehydrovomifoliol (18). Among these isolated compounds, compounds 18 are lignans, compounds 9—12 are triterpenoids, compounds 13—15 are steroids, and 16—18 are sesquiterpenes.All compounds are isolated from the genusfor the first time.

Champ. ex Benth.; lignans; triterpenes; steroids; sesquiterpenes;30-oxo-lupeol; erythrodiol;β-amyrenone; dehydrovomifoliol

R284.1

A

0253 - 2670(2021)07 - 1884 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.07.004

2020-12-27

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（21662011）；國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（202011658003，202011658012）；海南省級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（S202011658009，S202011658029）；?？谑兄攸c(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2020054）

李玉潔，女，在讀碩士，主要從事活性天然產(chǎn)物的發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用研究工作。E-mail: 1847225741@163.com

劉艷萍，研究員，主要從事天然活性物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)及其作用機(jī)制研究工作。E-mail: liuyanpinghs@163.com

付艷輝，研究員，博士生導(dǎo)師，主要從事天然活性物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用研究工作。E-mail: fuyanhui80@163.com

[責(zé)任編輯 王文倩]