邱雪 劉宜鑫 崔魴

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，重慶 400010)

肺癌是我國(guó)發(fā)病率、死亡率最高的惡性腫瘤[1-2]。肺腺癌是肺癌的主要病理類(lèi)型，占比達(dá)40.9%[3]。盡管肺腺癌在治療方面取得了許多成就，但其總生存期不到5年。肺腺癌對(duì)常規(guī)放化療和靶向治療的高耐藥性，是導(dǎo)致患者疾病惡化，生存率不高的原因之一。腫瘤免疫治療則是應(yīng)對(duì)肺腺癌廣泛耐藥的新策略。因此，研究腫瘤微環(huán)境中與肺腺癌腫瘤免疫機(jī)制相關(guān)的細(xì)胞因子，對(duì)尋找腫瘤免疫靶點(diǎn)或腫瘤生物標(biāo)志物是有益的。

胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(Thymic Stromal Lymphopoietin，TSLP)是一種多功能細(xì)胞因子[4]。近十年來(lái)，TSLP在腫瘤中的作用逐漸為人所知，在各種實(shí)體瘤[6-8]，包括肺癌[5-9]。進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)和臨床研究結(jié)果表明，TSLP和/或其受體在多種腫瘤類(lèi)型中高表達(dá)，并且TSLP與腫瘤的進(jìn)展、預(yù)后相關(guān)，是前景廣闊的腫瘤免疫監(jiān)測(cè)點(diǎn)。Bcl-2和IL-1α是與肺癌進(jìn)展有關(guān)的重要細(xì)胞因子，且在肺癌腫瘤組織中也存在過(guò)表達(dá)現(xiàn)象[10-12]。另有研究證據(jù)表明，TSLP促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的機(jī)制與IL-1α和Bcl-2相關(guān)[13-14]。因此，推測(cè)TSLP調(diào)控肺癌的機(jī)制或與Bcl-2和IL-1α相關(guān)。本研究擬檢測(cè)肺腺癌患者血清TSLP蛋白表達(dá)水平，分析血清TSLP濃度在肺腺癌中的臨床意義，進(jìn)一步檢測(cè)肺腺癌患者血清Bcl-2和IL-1α濃度，探討TSLP、IL-1α及Bcl-2在肺腺癌患者血清水平上的關(guān)系，初步分析TSLP對(duì)肺腺癌的腫瘤免疫機(jī)制與IL-1α、Bcl-2是否相關(guān)，為肺腺癌腫瘤免疫機(jī)制研究提供參考依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2019年9月～2020年6月我院呼吸內(nèi)科、胸心外科的69例肺腺癌患者為研究對(duì)象，其中男性37例，女性32例，年齡32～82歲，平均(60.70±9.29)歲。按照第8版腫瘤-淋巴結(jié)-轉(zhuǎn)移(Tumor-Node-Metastasis，TNM)分期[15]，將患者分為I期32例，Ⅱ期和Ⅲ期共13例，IV期24例。納入標(biāo)準(zhǔn)：通過(guò)病理組織檢查或細(xì)胞學(xué)檢測(cè)已經(jīng)確診的初診未治療肺腺癌癌患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：6個(gè)月內(nèi)使用過(guò)影響免疫功能的藥物，存在自身免疫性疾病、過(guò)敏性疾病、其他惡性腫瘤或免疫缺陷疾病。另選取我院2020年7月健康體檢中心的健康人群31名為對(duì)照組。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)審核并批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集 收集患者性別、年齡、病理學(xué)檢查、腫瘤大小、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、患者已測(cè)定的血清肺癌腫瘤標(biāo)志物(CYFRA211、proGPR、SCC、CEA、NSE)濃度相關(guān)數(shù)據(jù)。

1.2.2 標(biāo)本采集及檢測(cè) 所有患者采集標(biāo)本前均未進(jìn)行手術(shù)治療、放化療、靶向治療，無(wú)菌抽取外周靜脈血3 mL加入促凝管中, 室溫靜置20 min, 3000 r/min離心10 min, 分離血清, 置于1.5 mL EP管, 于-80℃低溫冰箱凍存, 嚴(yán)格按照試劑和說(shuō)明書(shū)，使用雙抗體夾心ELISA法定量檢測(cè)血清中TSLP、IL-1α及Bcl-2濃度?；颊叻伟┠[瘤標(biāo)志物采用雙試劑夾心磁性粒子化學(xué)發(fā)光法，羅氏公司自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀, 由重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)科進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.3 儀器和試劑 酶標(biāo)儀(型號(hào)：Epoch)；TSLP ELISA試劑盒(武漢云客隆科技股份有限公司，批號(hào)：L200612375)；IL-1α ELISA試劑盒(武漢云客隆科技股份有限公司，批號(hào)：L20051926)；Bcl-2 ELISA試劑盒(武漢云客隆科技股份有限公司，批號(hào)：L200612399)。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料情況 69例肺腺癌患者一般資料，見(jiàn)表1。對(duì)照組中，男性17例，女性14例；年齡28～79歲，平均(51.39±9.88)歲。

表1 肺腺癌患者臨床資料[n(×10-2)]

2.2 兩組血清TSLP、IL-1α、Bcl-2濃度的比較 與對(duì)照組相比，肺腺癌患者的血清TSLP濃度更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而血清IL-1α濃度在兩組中水平相似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；肺腺癌患者的血清Bcl-2濃度較對(duì)照組降低(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 TSLP、IL-1α、Bcl-2在肺腺癌組和對(duì)照組的血清濃度

2.3 肺腺癌患者血清TSLP、IL-1α、Bcl-2濃度與臨床病理資料分析 對(duì)肺腺癌患者血清TSLP、IL-1α、Bcl-2濃度與臨床病理資料進(jìn)行單因素分析發(fā)現(xiàn), Ⅱ+Ⅲ期、Ⅳ期肺腺癌患者較I期肺腺癌患者血清TSLP濃度升高，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(N1-N3)的患者較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(N0)的患者血清TSLP濃度增加，而且腫瘤直徑≥3 cm的肺腺癌患者血清TSLP表達(dá)比腫瘤直徑<3 cm者增加(均P<0.05)。然而，腺癌患者的血清Bcl-2、 IL-1α與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑并無(wú)顯著相關(guān)性，且組間濃度沒(méi)有顯著差異(均P>0.05)，見(jiàn)表3。

表3 肺腺癌患者血清TSLP、IL-1α、Bcl-2水平與臨床資料分析

2.4 血清TSLP、IL-1α、Bcl-2濃度與臨床病理特征的相關(guān)性 肺腺癌患者血清TSLP濃度與腫瘤TNM分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與CYFRA21-1、CEA存在顯著正相關(guān)，見(jiàn)表4。肺腺癌患者血清Bcl-2濃度亦與血清CEA濃度呈正相關(guān)，與腫瘤分期、肺癌標(biāo)志物等均無(wú)明顯相關(guān)性，見(jiàn)表4。

表4 肺腺癌患者血清TSLP、Bcl-2、IL-1α濃度與臨床病理特征相關(guān)性

2.5 肺腺癌患者血清TSLP、IL-1α和Bcl-2濃度間的相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)性分析顯示，肺腺癌患者的血清TSLP濃度與血清IL-1α及Bcl-2無(wú)相關(guān)性，見(jiàn)表5。

表5 肺腺癌患者血清TSLP濃度與血清IL-1α和Bcl-2濃度相關(guān)性

3 討論

TSLP參與了乳腺癌[16-18]、胰腺癌[19-20]、肺癌[9]或胃癌[21-22]等多種實(shí)體瘤腫瘤微環(huán)境中的腫瘤免疫過(guò)程，它通過(guò)Th2依賴型或非Th2依賴型機(jī)制，直接促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移或促腫瘤血管生成發(fā)揮促腫瘤的作用[5]?；A(chǔ)研究表明[9]，TSLP蛋白在肺腫瘤組織中表達(dá)增加，通過(guò)上調(diào)腫瘤微環(huán)境中CD4+CD25+FOXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，進(jìn)而抑制淋巴細(xì)胞的活性幫助腫瘤細(xì)胞逃脫宿主的免疫監(jiān)視，且TSLP表達(dá)與肺癌病理類(lèi)型、TNM分期、腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。趙華[8]等的臨床研究進(jìn)一步證實(shí)，肺癌組織TSLP蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于肺良性病變和非瘤肺上皮，且與腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究也發(fā)現(xiàn)，肺腺癌患者的血清TSLP濃度亦顯著高于健康人群，并且血清TSLP水平與腫瘤TNM分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有獨(dú)立相關(guān)關(guān)系，TSLP在中晚期(Ⅱ-Ⅳ期)或有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌患者中血清濃度更高，提示血清TSLP水平與肺腺癌病情密切相關(guān)，可能是肺腺癌進(jìn)展的促進(jìn)因子。高血清TSLP濃度可能預(yù)示肺腺癌處于中晚期或存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，可能預(yù)示不良臨床結(jié)局，是評(píng)估肺腺癌疾病進(jìn)展和預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物，并且血清TSLP濃度檢測(cè)是一種方便且無(wú)創(chuàng)的檢測(cè)手段。

血清腫瘤標(biāo)志物在肺癌腫瘤的早期篩查、病理分型及預(yù)后判斷等方面具有重要價(jià)值[23]，研究進(jìn)一步分析了肺腺癌患者血清TSLP濃度與肺癌腫瘤標(biāo)志物之間的關(guān)系。結(jié)果顯示, 血清TSLP濃度與腫瘤標(biāo)志物CEA、CYFRA21-1具有良好相關(guān)性。CEA和CYFRA21-1是診斷非小細(xì)胞肺癌的重要生物標(biāo)志物[24]，血清CYFRA21-1水平還與腫瘤分期、病程及預(yù)后有關(guān)[25-26]，CEA在肺腺癌中陽(yáng)性率有明顯升高[27]。肺腺癌患者血清TSLP濃度與血清CEA、CYFRA21-1的相關(guān)性表明，血清TSLP濃度有作為肺癌病理分型預(yù)測(cè)的生物標(biāo)志物的潛力。

TSLP可由肺上皮細(xì)胞組成性表達(dá)[4]，但肺癌組織中TSLP表達(dá)上調(diào)的機(jī)制及促腫瘤生長(zhǎng)機(jī)制尚不完全清楚。TSLP表達(dá)可由促炎性刺激物誘導(dǎo)，如IL-1[28-29]。IL-1α是IL-1的一種亞型[30]，Kuan等[13]研究報(bào)道腫瘤細(xì)胞來(lái)源的IL-1α誘導(dǎo)腫瘤微環(huán)境中TSLP表達(dá)[13-14]，而TSLP進(jìn)一步誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞高表達(dá)Bcl-2來(lái)支持腫瘤細(xì)胞生存及轉(zhuǎn)移[13]。Brunetto等[14]也指出拮抗IL-1α可以下調(diào)TSLP水平并改善胰腺癌總體存活率。這些研究證據(jù)提示，在肺癌腫瘤環(huán)境中IL-1α可能會(huì)誘導(dǎo)TSLP表達(dá)上調(diào)，并可能通過(guò)Bcl-2蛋白發(fā)揮促腫瘤活性。因此，研究初步檢測(cè)了肺腺癌患者血清中IL-1α濃度，結(jié)果表明，血清IL-1α水平在肺腺癌患者及健康人群中無(wú)顯著差異。血清TSLP濃度與IL-1α的相關(guān)性分析結(jié)果提示，TSLP與IL-1α無(wú)相關(guān)關(guān)系。Behrens等[30]的研究結(jié)果表明，在肺腺癌組織中的IL-1α以胞質(zhì)型為主，而胞質(zhì)型IL-1α需要在細(xì)胞壞死性凋亡后大量分泌，所以在體液中通常難以檢測(cè)到[31]，這可能是影響肺腺癌患者血清IL-1α水平的原因，進(jìn)而影響了血清TSLP濃度與血清IL-1α水平相關(guān)性的分析。本研究也測(cè)定了肺腺癌患者血清Bcl-2水平，結(jié)果表明，血清Bcl-2濃度在肺腺癌患者中有顯著降低，亦與血清TSLP濃度不存在相關(guān)性。這一結(jié)果提示，在腫瘤微環(huán)境中TSLP可能并不通過(guò)調(diào)節(jié)Bcl-2蛋白表達(dá)發(fā)揮促腫瘤作用。本研究的細(xì)胞因子檢測(cè)局限在血清水平，無(wú)法肯定腫瘤微環(huán)境中TSLP與IL-1α及Bcl-2的關(guān)系，要明確肺腺癌腫瘤微環(huán)境中TSLP與IL-1α及Bcl-2的確切機(jī)制還有待后續(xù)體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步論證。

4 結(jié)論與啟示

血清TSLP濃度與肺腺癌疾病進(jìn)展密切相關(guān)，可作為肺腺癌病情的評(píng)估指標(biāo)，是潛在的腫瘤預(yù)后預(yù)測(cè)和標(biāo)志。血清TSLP濃度與血清肺癌腫瘤標(biāo)志物CYFRA21-1和CEA有明顯正相關(guān)性，提示TSLP在肺腺癌診斷方面具有潛在價(jià)值。本研究通過(guò)檢測(cè)血清TSLP與 IL-1α和Bcl-2水平，初步驗(yàn)證了TSLP在血清水平上與IL-1α和Bcl-2不相關(guān)，但肺癌的發(fā)生發(fā)展和腫瘤免疫涉及多種因素和細(xì)胞因子， TSLP與 IL-1α和Bcl-2在腫瘤微環(huán)境中的來(lái)源及作用機(jī)制尚不肯定，有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。研究細(xì)胞因子在肺癌中的生物學(xué)效應(yīng)，還應(yīng)考慮在病理組織亞型中的差異，這有助于未來(lái)制定更有針對(duì)性的治療策略。