李 莉,劉云凌,張樹東,王 雪,菅玉霞,高鳳祥,潘 雷,郭 文,胡發(fā)文*
(1.山東省海洋生物研究院,青島市海洋生物種質(zhì)資源挖掘與利用工程實(shí)驗(yàn)室,青島市淺海底棲漁業(yè)增殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 青島 266104;2.青島市即墨區(qū)海洋發(fā)展服務(wù)中心,山東 青島 266200;3.日照市水產(chǎn)集團(tuán)總公司,山東 日照 276800)
大瀧六線魚(Hexagrammosotakii)隸屬于鲉形目(Scorpaeniformes)、六線魚科(Hexagrammidate)、六線魚屬(Hexagrammos),又名歐氏六線魚,主要分布于我國山東和遼寧近海多巖礁海區(qū),也見于朝鮮、日本和俄羅斯遠(yuǎn)東諸海,是我國北方重要的海水經(jīng)濟(jì)魚類[1-2]。海洋水質(zhì)的優(yōu)劣,直接影響水產(chǎn)品的品質(zhì),加之大多數(shù)漁民對船舶水污染物造成海洋環(huán)境污染的危害性認(rèn)識不夠,造成了海洋生態(tài)環(huán)境污染嚴(yán)重[3]。近年來,隨著近海漁業(yè)資源的過度開發(fā)利用,氮磷污染負(fù)荷和工廠化能耗等[4],大瀧六線魚的漁獲量逐年降低,自然資源量銳減,漁業(yè)資源亟待修復(fù)。
在大瀧六線魚資源嚴(yán)重衰退的形勢下,科學(xué)規(guī)范地開展增殖放流是恢復(fù)其自然資源、改善生態(tài)環(huán)境、促進(jìn)漁民增收的有效措施。2012年,大瀧六線魚全人工繁育技術(shù)獲得成功,以人工育苗技術(shù)為支撐,山東省開展了大規(guī)模大瀧六線魚增殖放流工作,取得了一定的成效。但重規(guī)模、輕評估導(dǎo)致了增殖放流效果沒有得到有效體現(xiàn),開發(fā)并選取適宜大瀧六線魚增殖放流的苗種和標(biāo)志牌規(guī)格對科學(xué)評估增殖放流效果具有重要意義。
標(biāo)志放流技術(shù)是修復(fù)漁業(yè)資源、研究魚類洄游和魚類資源的方法,在魚類資源養(yǎng)護(hù)、增殖效果評估中具有重要作用,是研究魚類生活史及其資源時空分布格局的有效手段[5-8]。選擇適合的標(biāo)志技術(shù)應(yīng)綜合考慮兩方面因素:標(biāo)志成本、標(biāo)志對個體存活生長的影響和標(biāo)志持久度,兩者均是評價標(biāo)志技術(shù)是否合適的重要指標(biāo)。常用的標(biāo)志技術(shù)主要分為體外標(biāo)志法和體內(nèi)標(biāo)志法,其中T型標(biāo)志牌標(biāo)志法應(yīng)用較為廣泛,具有易操作、性價比高、標(biāo)志保持率高、易于識別等優(yōu)點(diǎn),適合長時間的標(biāo)志追蹤研究,目前其仍是魚類批量標(biāo)志放流的主要方法之一[9-10]。國外開展了較多海水魚類的體外掛牌標(biāo)志放流技術(shù)研究,包括金頭鯛(Sparusaurata)[11]、鮭魚(Salmosalar)[12]等。我國標(biāo)志放流技術(shù)研究集中于蝦蟹類和魚類,包括中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)[13]、大黃魚(Pseudosciaenacrocea)[14]、真鯛(Pagrosomusmajor)[15]、魚免魚(Miichthysmiiuy)[16]、牙鲆(Paralichthysolivaceus)[17]、黑鯛(Sparusmacrocephalus)[18]、半滑舌鰨(Cynoglossussemilaevis)[19]等,主要使用的是體外掛牌標(biāo)志法、化學(xué)物質(zhì)標(biāo)志法和剪鰭法。國內(nèi)海水魚類的標(biāo)志技術(shù)取得了一定的進(jìn)展,但尚未見有關(guān)大瀧六線魚標(biāo)志技術(shù)的報道。本文研究了3種不同規(guī)格的T型標(biāo)志牌(T1、T2、T3)對3種規(guī)格大瀧六線魚的標(biāo)志效果,篩選最適宜進(jìn)行增殖放流的大瀧六線魚規(guī)格的T型標(biāo)志牌,提出T型標(biāo)志牌操作建議,旨在為大瀧六線魚追蹤調(diào)查和增殖放流效果評估提供參考。
試驗(yàn)于2017年3—5月在山東省海洋生物研究院中試基地進(jìn)行。試驗(yàn)所用大瀧六線魚購自青島魯海水產(chǎn)技術(shù)發(fā)展公司。挑選體色正常、健康活潑、攝食良好的大瀧六線魚在室內(nèi)水泥池中流水暫養(yǎng)7 d,采用砂濾海水流水養(yǎng)殖,水溫(15.0±0.5)℃,鹽度31,pH 7.9~8.1,投喂海水魚專用配合飼料。選用3種規(guī)格的大瀧六線魚用于試驗(yàn),分別為A1[全長(5.12±0.30)cm、體重(1.90±0.47)g]、A2[全長(8.26±0.60)cm、體重(5.27±0.54)g]、A3[全長(11.05±1.10)cm、體重(12.05±0.44)g]。試驗(yàn)開始前禁食24 h。
T型標(biāo)志牌及標(biāo)志槍購自青島海星儀器有限公司,標(biāo)志牌為聚乙烯材質(zhì),安全無毒。標(biāo)志牌分為3種規(guī)格,記為T1、T2、T3(表1、圖1),其中平均全長5 cm的大瀧六線魚僅以T1標(biāo)志牌標(biāo)志,8 cm和11 cm大瀧六線魚均分別以3種規(guī)格標(biāo)志牌標(biāo)志。共設(shè)置7個試驗(yàn)組(A1-T1、A2-T1、A2-T2、A2-T3、A3-T1、A3-T2、A3-T3)和3個對照組(A1-C、A2-C、A3-C),每組3個重復(fù),每個重復(fù)200尾魚。試驗(yàn)用魚先在25 m3的水泥池中暫養(yǎng)3 d后,再用于試驗(yàn)。
表1 試驗(yàn)用T型標(biāo)志牌的規(guī)格
1.2.1 試驗(yàn)用品消毒
在試驗(yàn)開始前,將標(biāo)志槍槍頭及T型標(biāo)志牌用75%酒精浸泡5 min消毒。
1.2.2 麻醉
在進(jìn)行標(biāo)志操作之前,所有試驗(yàn)魚用丁香酚(丁香酚∶酒精=1∶9,配比混合后溶于海水)進(jìn)行麻醉,麻醉劑濃度的選擇標(biāo)準(zhǔn)為魚體入麻時間快、恢復(fù)時間短、無不良副作用。參照胡發(fā)文等[20]的方法,試驗(yàn)魚用50 mg/L丁香酚進(jìn)行麻醉處理。
1.2.3 標(biāo)志操作
以專用的標(biāo)志槍進(jìn)行標(biāo)志操作。具體操作步驟為:戴上乳膠手套,隨機(jī)選取處于麻醉狀態(tài)的試驗(yàn)魚,左手輕壓魚體,右手持標(biāo)志槍,標(biāo)志槍與魚體呈45°~60°角,將槍頭自鱗下間隙插入魚背鰭基部下方肌肉最厚的部位,快速按壓扳機(jī)將標(biāo)志牌錨定端打入魚體,切忌將標(biāo)志槍頭穿透魚體(圖2)。用手指輕壓標(biāo)志部位,快速抽出標(biāo)志槍。
1.2.4 消毒
標(biāo)志后將標(biāo)志魚放入5 mg/L土霉素的海水溶液中藥浴30 min進(jìn)行消毒處理,防止傷口感染,消毒過程中持續(xù)充氧。
1.2.5 標(biāo)志魚存活率和脫標(biāo)率試驗(yàn)
標(biāo)志完成后,將各試驗(yàn)組和對照組的魚分別置于5 m3的小型水泥池中養(yǎng)殖15 d后,隨機(jī)從各組中撈取50尾測量全長和體重,開始生長試驗(yàn)。期間觀察標(biāo)志魚的行為狀態(tài),統(tǒng)計存活率和脫標(biāo)率情況,養(yǎng)殖管理同1.1。
1.2.6 標(biāo)志魚的生長試驗(yàn)
經(jīng)工廠化養(yǎng)殖60 d后,各組再次隨機(jī)撈取50尾測量各組的全長和體重,以評估標(biāo)志后生長情況。為減少誤差,標(biāo)志操作和數(shù)據(jù)測定分析均由2名固定的專業(yè)人員完成。
試驗(yàn)數(shù)據(jù)均表示為每個試驗(yàn)組3個重復(fù)的平均值。存活率、脫標(biāo)率和生長試驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示。采用SPSS 19.0軟件對全長、體重和存活率進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA),P<0.05為差異顯著,反之不顯著。
標(biāo)志大瀧六線魚麻醉和標(biāo)志操作過程中均未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。在進(jìn)行T型掛牌標(biāo)志后的初期,標(biāo)志魚一般不游動、不攝食,只有少數(shù)魚游泳時身體會向有標(biāo)志的一側(cè)傾斜,對外界刺激的敏感度降低。三個對照組(A1-C、A2-C、A3-C)均無死亡,存活率為100%。平均全長5 cm的大瀧六線魚脫標(biāo)率高達(dá)80.83%,存活率低至10.50%,在標(biāo)志后的幾小時內(nèi)就有死亡,標(biāo)志后的2~5 d內(nèi)大量死亡。平均全長8 cm的大瀧六線魚,T1標(biāo)志的脫標(biāo)率較低,僅為4.83%,存活率達(dá)到97.17%,部分試驗(yàn)魚2 d后游泳行為正常且開始攝食,4 d后大部分試驗(yàn)魚攝食逐漸正常;T2標(biāo)志的試驗(yàn)魚,存活率為87.33%,脫標(biāo)率為15.33%,5 d后其行為和攝食開始恢復(fù)正常;T3標(biāo)志的存活率為61.33%,脫標(biāo)率達(dá)到31.50%,在標(biāo)志后第2天開始有試驗(yàn)魚死亡,9 d后無繼續(xù)死亡,8 d后攝食正常;三種標(biāo)志牌標(biāo)志的A2規(guī)格的大瀧六線魚存活率與對照組相比差異顯著(P<0.05)。平均全長11 cm的大瀧六線魚,T1和T2標(biāo)志的存活率分別為100%和95.83%,脫標(biāo)率分別為2.00%和5.67%,1 d后部分魚苗開始攝食,3 d后攝食正常;T3標(biāo)志的試驗(yàn)魚存活率為76.83%,脫標(biāo)率為24.67%,在4 d后開始攝食,7 d后全部攝食正常;A3-T1存活率與對照組相比無顯著差異(P>0.05),A3-T2和A3-T3存活率與對照組相比差異顯著(P<0.05)。在暫養(yǎng)過程中,各試驗(yàn)組標(biāo)志魚均有不同程度的傷口潰爛情況,及時在養(yǎng)殖池中加入20 mg/L高錳酸鉀消毒,并勤換水,癥狀稍輕的標(biāo)志魚3 d左右傷口潰爛情況好轉(zhuǎn),其余標(biāo)志魚在6 d后傷口炎癥好轉(zhuǎn)并愈合。
表2 不同規(guī)格大瀧六線魚以不同規(guī)格T型標(biāo)志牌標(biāo)志后15 d的存活率和脫標(biāo)率
標(biāo)志魚經(jīng)過60 d養(yǎng)殖后,統(tǒng)計試驗(yàn)魚的全長和體重數(shù)據(jù)。平均全長5 cm(A1)的大瀧六線魚由于規(guī)格較小,標(biāo)志后存活率僅為13.00%,所以沒有進(jìn)行生長試驗(yàn)。方差分析結(jié)果顯示,不同規(guī)格標(biāo)志牌標(biāo)志對魚的生長無顯著影響。從表3可以看出,試驗(yàn)開始時,各組大瀧六線魚的全長和體重均無顯著差異(P>0.05),試驗(yàn)結(jié)束時,各組與對照組的全長和體重及特定生長率也均無顯著差異(P>0.05),表明標(biāo)志效果良好。
表3 大瀧六線魚養(yǎng)殖60 d后生長情況對比
2017年6月在煙臺近海進(jìn)行了大瀧六線魚規(guī)?;帕髟囼?yàn),放流大瀧六線魚25×104尾,其中利用T1標(biāo)志牌標(biāo)志放流平均全長8 cm的大瀧六線魚1×104尾。
放流前,使用T1標(biāo)志牌對大瀧六線魚進(jìn)行標(biāo)志后在室內(nèi)養(yǎng)殖池中流水養(yǎng)殖7 d,再出池打包裝船放入大海。出池時,統(tǒng)計大瀧六線魚死亡數(shù)和脫標(biāo)數(shù),結(jié)果顯示存活率為99.80%,脫標(biāo)率為0.70%,表明標(biāo)志效果較好。
標(biāo)志方法適合與否主要看存活率和脫標(biāo)率這兩個重要指標(biāo),理想的標(biāo)志方法應(yīng)盡量不影響魚的正常生理活動和生長發(fā)育。從本研究生長試驗(yàn)情況來看,標(biāo)志魚與對照組生長無顯著差異(P>0.05),這與大多數(shù)魚類標(biāo)志試驗(yàn)的結(jié)果[21-22]一致。有部分研究發(fā)現(xiàn),標(biāo)志會對魚的生長產(chǎn)生負(fù)面的影響,Rikardsen等發(fā)現(xiàn)標(biāo)志操作后,北極紅點(diǎn)鮭(Salvelinusalpinus)有生長抑制的現(xiàn)象[23];王茂元等發(fā)現(xiàn)鰱魚(Hypophthalmichthysmolitrix)在標(biāo)志后,其生長與對照組差異顯著[24]。這也說明標(biāo)志對魚體生長的影響因魚種而異。標(biāo)志后的一段時間內(nèi)部分魚苗有不攝食的現(xiàn)象,這與鰱[24]和青石斑魚(Epinephelusawoara)[25]的情況相似,推測可能是麻醉和標(biāo)志操作過程的影響,一般標(biāo)志后將魚苗放入養(yǎng)殖池適應(yīng)一段時間后便可恢復(fù)正常。
T型標(biāo)志牌的錨定端長度、連接線長度和T端直徑等直接影響標(biāo)志牌的重量,進(jìn)而影響到掛牌標(biāo)志的效果。研究發(fā)現(xiàn)T型標(biāo)志牌的連接線長度過短可能會導(dǎo)致較高的脫標(biāo)率[26],過長則會額外增加標(biāo)志牌的重量,并且會增大標(biāo)志魚在水中游泳時的阻力。因此,要綜合考慮以上因素來確定所需T型標(biāo)志牌的規(guī)格。從脫標(biāo)率、存活率和試驗(yàn)魚的游泳、攝食和炎癥情況來看,平均全長5 cm及以下的大瀧六線魚不適合采用T型標(biāo)志牌標(biāo)志,即使使用規(guī)格最小的T1標(biāo)志牌進(jìn)行標(biāo)志,魚苗也有較高的死亡率;平均全長8 cm的大瀧六線魚適宜用T1標(biāo)志牌標(biāo)志;平均全長11 cm的大瀧六線魚適宜用T1和T2標(biāo)志牌標(biāo)志。從本試驗(yàn)的研究結(jié)果來看,直徑較大和錨定端長度較長的標(biāo)志牌會對標(biāo)志魚的體表造成較大的創(chuàng)傷,從而導(dǎo)致傷口發(fā)炎,出現(xiàn)較高的死亡率。T1標(biāo)志牌對魚體錨定部位的創(chuàng)傷較小,標(biāo)志后5~7 d傷口基本愈合,標(biāo)志魚的脫標(biāo)率與死亡率都較低,標(biāo)志效果較好。
由此可見,在本試驗(yàn)條件下,平均全長5 cm及以下的大瀧六線魚不適合以標(biāo)志牌標(biāo)志進(jìn)行放流,平均全長8 cm的大瀧六線魚,可以使用T1標(biāo)志牌標(biāo)志,平均全長11 cm的大瀧六線魚可使用T1和T2標(biāo)志牌標(biāo)志。
在對試驗(yàn)魚進(jìn)行標(biāo)志時,為了避免對試驗(yàn)魚造成創(chuàng)傷,一般會先對試驗(yàn)魚進(jìn)行麻醉,目前,丁香酚和MS-222被認(rèn)為是最安全有效的麻醉藥物[27-28],被廣泛應(yīng)用于魚類催產(chǎn)、運(yùn)輸、標(biāo)志放流等漁業(yè)生產(chǎn)和研究中[29]。使用麻醉劑能使魚保持鎮(zhèn)靜,減少因應(yīng)激引起的創(chuàng)傷,提高存活率[30]。若麻醉劑的劑量過大或麻醉時間過長,會導(dǎo)致魚類死亡,所以一次麻醉的魚類數(shù)量不宜過多[31]。大瀧六線魚應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)烈,若苗種不經(jīng)過麻醉而直接進(jìn)行標(biāo)志操作,標(biāo)志魚劇烈掙扎,極易對標(biāo)志魚造成機(jī)械損傷,從而導(dǎo)致苗種標(biāo)志后死亡,因此,有必要使用適量麻醉劑對其麻醉后進(jìn)行標(biāo)志操作。
標(biāo)志操作會對體表造成創(chuàng)傷,選擇魚體背部肌肉較厚的位置進(jìn)行操作,這個部位遠(yuǎn)離中樞神經(jīng)和血液循環(huán)系統(tǒng),對標(biāo)志魚的影響較小。將標(biāo)志槍與魚體呈45°~60°角斜插入背部進(jìn)行標(biāo)志,可使標(biāo)志牌向整個魚體斜后方傾斜,減少魚體在水中游泳時的阻力。在對鮭魚(Salmosalar)進(jìn)行標(biāo)志研究時,標(biāo)志操作過程如果操作不當(dāng),或者標(biāo)志后標(biāo)志魚不進(jìn)行暫養(yǎng)就放入野生環(huán)境,會造成標(biāo)志魚標(biāo)志部位傷口潰爛,導(dǎo)致死亡或生長抑制[32]。因此,在標(biāo)志操作前,應(yīng)對標(biāo)志槍和T型標(biāo)志牌進(jìn)行消毒處理,并對標(biāo)志魚進(jìn)行消毒處理,在標(biāo)志后暫養(yǎng)7 d再進(jìn)行放流,標(biāo)志魚的創(chuàng)口可在較短時間愈合,提高標(biāo)志放流成功率。
掛牌標(biāo)志一般用于體長15 cm以上的魚[33]。但大瀧六線魚的放流規(guī)格一般為5~8 cm,在本研究中,平均全長8 cm的大瀧六線魚適宜用T1規(guī)格的標(biāo)志牌標(biāo)志,存活率達(dá)到98.00%,脫標(biāo)率4.00%。但是對于不同種類和不同規(guī)格的魚種,應(yīng)選用合適的T型標(biāo)志牌,標(biāo)志牌過大會對標(biāo)志魚的游泳和攝食行為產(chǎn)生影響,標(biāo)志牌過小會導(dǎo)致較高的脫標(biāo)率。因此,建議在往后的大瀧六線魚標(biāo)志放流時,選擇平均全長8 cm及以上的魚種為宜。
鑒于本文研究結(jié)果,結(jié)合以往資料,建議:1)停食:標(biāo)志操作前待標(biāo)志魚停食24 h;2)消毒:標(biāo)志槍槍頭和T型標(biāo)志牌使用前用75%酒精浸泡消毒5 min;3)麻醉操作:選用50 mg/L丁香酚溶液進(jìn)行麻醉,待魚體失去平衡、腹部向上翻轉(zhuǎn)時迅速進(jìn)行標(biāo)志;4)標(biāo)志操作:標(biāo)志槍與魚體呈45°~60°角,將槍頭斜插入魚體背部肌肉最厚處,迅速按下扳機(jī)將標(biāo)志牌打入魚體內(nèi)部后按壓抽出標(biāo)志槍;5)魚體消毒:標(biāo)志完成后,將標(biāo)志魚放入5 mg/L土霉素的海水溶液中藥浴消毒30 min;6)標(biāo)志后暫養(yǎng):消毒后的標(biāo)志魚暫養(yǎng)5~7 d后再放流。