不同產(chǎn)地五倍子的質(zhì)量評價

龔力民　趙元　嚴(yán)晟　楊敏華　趙國鋒　許光明

〔摘要〕 目的 對不同產(chǎn)地的五倍子質(zhì)量開展評價，以期為五倍子的質(zhì)量控制提供依據(jù)。方法 對不同產(chǎn)地的五倍子進(jìn)行水分、總灰分、沒食子酸含量測定，建立特征圖譜，對五倍子開展多個角度的質(zhì)量評價。結(jié)果 安徽、內(nèi)蒙古、陜西、湖北及四川等地的五倍子水分、總灰分含量情況均符合中國藥典標(biāo)準(zhǔn)，且沒食子酸含量高于標(biāo)準(zhǔn);特征圖譜結(jié)果表明12批五倍子受產(chǎn)地的影響較大，其中安徽和湖南產(chǎn)地的五倍子樣品與貴州、內(nèi)蒙古產(chǎn)地的五倍子樣品相比差異較大。綜合質(zhì)量多方位評價結(jié)果，內(nèi)蒙古產(chǎn)五倍子為推薦品。結(jié)論 五倍子質(zhì)量系統(tǒng)評價可更完整地體現(xiàn)不同產(chǎn)地的質(zhì)量情況，為完善五倍子質(zhì)量控制方法提供一定科學(xué)基礎(chǔ)。

〔關(guān)鍵詞〕 五倍子;沒食子酸;含量測定;指紋圖譜

〔中圖分類號〕R282.5? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.02.016

〔Abstract〕 Objective To evaluate the quality of Wubeizi （Galla Chinensis） from different areas in order to provide the basis for the quality control of Wubeizi （Galla Chinensis）. Methods The moisture， total ash， and gallic acid content of Wubeizi （Galla Chinensis） from different origins were determinated， the characteristic maps were established， and the quality evaluation of Wubeizi （Galla Chinensis） from multiple angles was carried out. Results The moisture， and total ash content of Wubeizi （Galla Chinensis） in Anhui， Inner Mongolia， Shanxi， Hubei and Sichuan all met the Chinese pharmacopoeia standards， and the gallic acid content was higher than the standard; the characteristic map results showed that 12 batches of Wubeizi （Galla Chinensis） were greatly affected by the place of production， among them， the Wubeizi （Galla Chinensis） samples from Anhui and Hunan provinces were quite different from those from Guizhou and Inner Mongolia. Based on the results of multi-directional quality evaluation， Wubeizi （Galla Chinensis） produced in Inner Mongolia is recommended. Conclusion The quality system evaluation of Wubeizi （Galla Chinensis） can more completely reflect the quality of different producing areas， and provide a scientific basis for improving the quality control methods of Wubeizi （Galla Chinensis）.

〔Keywords〕 Wubeizi （Galla Chinensis）; gallic acid; content determination; fingerprint

五倍子（Rhus chinensis Mill.）為漆樹科植物鹽膚木、青麩楊或紅麩楊葉上的蟲癭，主要由五倍子蚜寄生而形成。五倍子性寒，味酸、澀。有澀腸止瀉，斂肺降火，收濕斂瘡，斂汗，止血等功效[1]。我國五倍子產(chǎn)量占世界產(chǎn)量的90%以上，其中湖南、湖北、四川、貴州、云南及陜西等省產(chǎn)量最高，約占全國總產(chǎn)量的80%。我國五倍子的品質(zhì)好、有效成分含量高，臨床藥用價值高，但不同產(chǎn)地五倍子的質(zhì)量差別較大，普遍采用單一指標(biāo)評價方法尚不能較好地做出質(zhì)量評價，不利于精準(zhǔn)用藥，也不利于高質(zhì)量中藥材的種植與供應(yīng)。因此，建立科學(xué)的系統(tǒng)質(zhì)量評價方法十分必要[2-7]。本文利用多方位評價原理，對不同產(chǎn)地的五倍子進(jìn)行水分測定、總灰分測定、沒食子酸的含量測定及特征圖譜的評價研究，形成五倍子多方位系統(tǒng)評價方法，以期為不同產(chǎn)地五倍子的科學(xué)質(zhì)量評價提供一定科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1? 儀器

萬能高速粉碎機(jī)（浙江紅景天工貿(mào)有限公司，型號DE-800 g）;電子恒溫水浴鍋（菏澤市牡丹區(qū)俊騰電子儀器有限公司，型號DZKW-4）;電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海和呈儀器制造有限公司，型號101-3AB）;生物顯微鏡（麥克奧迪實業(yè)集團(tuán)有限公司，型號Motic BA-80）;高效液相色譜儀（日本島津公司，型號LC-20A）。

1.2? 試劑

甲醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;磷酸（川東化工集團(tuán)）;怡寶水（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品（質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%，上海源葉生物科技有限公司）;化學(xué)試劑均為色譜純。

1.3? 藥材

五倍子樣品共12批，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定教研室龔力民老師鑒定，均為正品。產(chǎn)地見表1。

2 方法

2.1? 五倍子水分、總灰分測定

參照《中華人民共和國藥典》（2020年版）附錄相關(guān)方法，進(jìn)行五倍子水分、總灰分的測定[1]。

2.2? 五倍子沒食子酸含量測定

2.2.1? 樣品的制備? 除去五倍子樣品中的雜質(zhì)，干燥粉碎后過四號篩（65目），備用。

2.2.2? 色譜條件? 色譜柱為WondaSil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液（15∶85）;檢測波長為273 nm;柱溫為25 ℃;流速為1.0 mL/min;分析時間為20 min;理論板數(shù)按沒食子酸峰計算應(yīng)不低于3 000。

2.2.3? 對照品溶液的制備? 精密稱取沒食子酸對照品適量，加入濃度為50%的甲醇制成40 μg/mL的對照品溶液，備用。

2.2.4? 供試品溶液的制備? 依據(jù)中國藥典[1]，取本品粉末（過四號篩）約0.5 g，精密稱定，精密加人4 mol/L鹽酸溶液50 mL，水浴中加熱水解3.5 h，放冷，濾過。精密量取續(xù)濾液1 mL，置100 mL量瓶，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.5? 精密度試驗 取S2號樣品溶液在“2.3.2”項色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣分析6次，根據(jù)峰面積計算出RSD值為2.6%。結(jié)果證明儀器的精密度好。

2.2.6? 重復(fù)性試驗? 取S6號樣品粉末6份，按“2.3.4”項下方法制備樣品溶液，在“2.3.2”項色譜條件下進(jìn)樣分析，根據(jù)峰面積計算出RSD值為2.6%。結(jié)果證明本方法重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高。

2.2.7? 穩(wěn)定性試驗? 取S11號樣品溶液，按“2.3.2”項色譜條件于0、2、8、12、24、48 h進(jìn)樣分析，根據(jù)6次峰面積，計算算出RSD值為2.8%。結(jié)果證明五倍子樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8? 線性關(guān)系考察? 取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品，按“2.3.3”項方法配置10、20、40、80、160 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在“2.3.2”項色譜條件下進(jìn)樣分析，根據(jù)峰面積，使用EXCEL繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL）作橫坐標(biāo)，峰面積作縱坐標(biāo)，回歸方程：Y=52856X+47 563，R2=0.999 9。結(jié)果證明沒食子酸在10～160 μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系好。

2.2.9? 加標(biāo)回收率試驗? 精密量取200 μL濃度為70 μg/mL的S1樣品9份，其中每3份分別加入同體積（200 μL）的按“2.3.3”項方法制得的濃度為樣品濃度的0.8倍（56 μg/mL）、1.0倍（70 μg/mL）及1.2倍（84 μg/mL）的對照品溶液，按“2.3.2”項色譜條件下進(jìn)樣分析，根據(jù)峰面積，計算沒食子酸含量。加標(biāo)回收率為100.8%～107.4%，說明儀器穩(wěn)定。加標(biāo)回收率結(jié)果見表2。

2.3? 五倍子特征圖譜研究

2.3.1? 供試品溶液的制備? 同“2.2.4”項下制備方法。

2.3.2? 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗? 色譜柱為WondaSil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相為甲醇（A）-0.1%磷酸溶液（B）;檢測波長為273 nm;柱溫為25 ℃;流速為1.0 mL/min;分析時間為80 min;理論板數(shù)按沒食子酸峰計算應(yīng)不低于3 000。色譜條件設(shè)為梯度洗脫，以甲醇（A）-0.05%磷酸水（B）為流動（A：0 min，5%;65 min，80%;80 min，100%），色譜峰基本能達(dá)到基線分離，且峰型好，說明該梯度洗脫條件較佳。采用DAD檢測器，在 273 nm下五倍子藥材的特征圖譜峰數(shù)量最多，且峰形較佳，確定6個共有峰，1號峰為沒食子酸，建立五倍子的指紋圖譜。見圖1。

2.3.3? 精密度實驗? 取湖南的五倍子供試液1份，主要色譜峰的保留時間RSD值小于2.0%，而主要色譜峰峰面積RSD值在3.0%左右，說明該方法精密度較好。

2.3.4? 重復(fù)性實驗? 取湖南的五倍子6份，主要色譜峰的保留時間RSD值均小于2.0%，主要色譜峰峰面積RSD值在4.0%以內(nèi)，說明該方法重復(fù)性較好。

2.3.5? 穩(wěn)定性實驗? 取湖南的五倍子供試液1份，主要色譜峰的保留時間RSD值均小于2.0%，主要色譜峰峰面積的RSD值均低于4.0%，說明該方法24 h以內(nèi)基本穩(wěn)定。

3 結(jié)果

3.1? 五倍子水分、總灰分和沒食子酸含量測定

《中華人民共和國藥典》2020版規(guī)定，五倍子水分含量不得過12.0%，實驗結(jié)果表明，12批五倍子樣品的水分含量均≤12.0%（n=3）。五倍子總灰分含量不得過3.5%，12批五倍子樣品的總灰分含量均≤3.5%（n=3）。除12號樣品的沒食子酸含量低于50%外，其余11批五倍子樣品的沒食子含量均大于50%（n=3），符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果見表3 。

3.2? 指紋圖譜及共有峰的建立

采用HPLC-DAD法共采集了12批五倍子藥材指紋圖譜信息，標(biāo)記了6個共有峰，計算各共有峰的相對保留時間及相對峰面積，其相對保留時間RSD值在0.34%～0.52%，相對峰面積RSD值在24.89%～79.03%，結(jié)果見表4-5。12批樣品中6個共有峰均能一一對應(yīng)，表明樣品整體的化學(xué)成分組成相似，其有效成分含量有顯著差異。建立五倍子指紋圖譜，峰1的峰面積最大，且分離度較好，為五倍子的藥控成分，故選擇沒食子酸為參照峰。結(jié)果見圖2。

3.3? 相似度評價

采用“中藥色譜特征圖譜相似度分析”軟件計算12個產(chǎn)地樣品的指紋圖譜相似度，以省份劃分產(chǎn)地，陜西指紋圖譜相似度均為81.3%。陜西、四川和廣西相似度為81.3%，廣東和湖北相似度只有25%，說明廣東和湖北與其他省份的五倍子化學(xué)成分差異大。見表6。

4 討論

12批不同產(chǎn)地五倍子樣品的性狀鑒別結(jié)果、水分及總灰分含量均達(dá)標(biāo);不同產(chǎn)地五倍子的沒食子酸含量差別大，12批樣品中僅廣西產(chǎn)五倍子的沒食子酸含量不符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，其余11批樣品的沒食子酸含量均大于50.0%，其中安徽、內(nèi)蒙古產(chǎn)的五倍子沒食子酸含量較高，均高于60.0%;特征圖譜研究表明12批樣品整體的化學(xué)成分組成相似，但含量有顯著差異，說明12批五倍子受產(chǎn)地的影響較大，其含量差異可能受到了不同地區(qū)海拔、土壤、溫度、水質(zhì)等的影響;綜合質(zhì)量多方位評價結(jié)果，內(nèi)蒙古產(chǎn)的五倍子為推薦品。

研究選擇的12批五倍子南北跨度大，若以秦嶺-淮河為南北界限，據(jù)表3可知，隨著緯度不斷地增加，五倍子沒食子酸含量不斷增加，五倍子中沒食子酸含量的積累可能受到高緯度低溫的影響。

五倍子按藥材形態(tài)判斷，以個大、完整、壁厚、色灰褐者為佳[8]。在面對五倍子藥材化學(xué)成分的豐富性和復(fù)雜性時[9]，中藥指紋圖譜能全面反應(yīng)中藥包含的化學(xué)信息，可用于五倍子藥材質(zhì)量評價，更完整地體現(xiàn)不同產(chǎn)地五倍子質(zhì)量情況。因此，進(jìn)一步建立多實驗方法體系的五倍子質(zhì)量系統(tǒng)評價方法，對全面評價五倍子品質(zhì)顯得尤為重要。

參考文獻(xiàn)

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典·一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020：68-69.

[2] 龐春潔.高效液相色譜法同時測定五倍子提取物中沒食子酸與鞣花酸的含量[J].飲食保健，2018，5（27）：24-25.

[3] 鐘? 可，吳亞麗，王世清，等.高效液相色譜法測定黔產(chǎn)五倍子中沒食子酸的含量[J].中國醫(yī)院用藥評價與分析，2018，18（1）：36-39.

[4] 基于色譜指紋圖譜的五倍子定量測定方法[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19（21）：137-140.

[5] 郭小瑞，李? 里，孫? 哲，等.五倍子的HPLC指紋圖譜研究[J].中國藥房，2013，24（27）：2546-2548.

[6] 馮淑萍.五倍子藥材及制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D].陜西中醫(yī)藥大學(xué);陜西中醫(yī)院，2009.

[7] 李志國，楊文云，夏定久.中國五倍子研究現(xiàn)狀[J].林業(yè)科學(xué)研究， 2003，16（6）：760-767.

[8] 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會編.中華本草[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2009.

[9] 李? 和.中藥指紋圖譜質(zhì)控及其評價方法[J].中藥材，2002（4）：290-292.