CK和P63與原位雜交EBER在診斷復(fù)發(fā)性鼻咽癌中的價值分析

陸妹英，以 敏（通訊作者）

（柳州市工人醫(yī)院病理科 廣西 柳州 545005）

鼻咽癌是我國常見的惡性腫瘤之一，多發(fā)于鼻咽黏膜處，據(jù)全國鼻咽癌學(xué)術(shù)會議表明，世界上有80%的鼻咽癌發(fā)生在中國，南方地區(qū)高于北方地區(qū)?；颊甙l(fā)病早期比較隱匿，不易被發(fā)現(xiàn)，但是較容易出現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移或淋巴結(jié)節(jié)轉(zhuǎn)移情況。臨床研究顯示，鼻咽癌的發(fā)病機制不明確，治療效果有限，患者5年的生存率為50%左右[1]。臨床上對鼻咽癌多應(yīng)用放射治療，但是通過放射治療后依然有20%左右的患者會出現(xiàn)復(fù)發(fā)情況，而且復(fù)發(fā)性鼻咽癌的預(yù)后性較差，再次放射治療后患者5年生存率僅為30%左右[2]。為了判斷患者是否為復(fù)發(fā)性鼻咽癌，本文選取我院200例鼻咽癌患者作為研究對象，探討CK、P63與原位雜交EBER在診斷復(fù)發(fā)性鼻咽癌中的應(yīng)用價值，具體報告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2018年1月—2020年12月200例鼻咽癌患者作為研究對象，其中首發(fā)患者123例，復(fù)發(fā)患者77例。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均經(jīng)病理診斷確診為鼻咽癌且相關(guān)病例資料完整；復(fù)發(fā)患者在鼻咽癌復(fù)發(fā)之前已經(jīng)確診為鼻咽癌并經(jīng)過相關(guān)放射治療；首發(fā)患者在病理診斷前未經(jīng)過相關(guān)治療。所有患者對本研究知情并簽署同意書。所有鼻咽癌患者中男性152例，女性48例；年齡為12～89歲，平均年齡（65.31±3.25）歲。

1.2 方法

原位雜交EBER檢測：實驗設(shè)置外部陰性對照、陽性對照及組織內(nèi)對照，切片組織粘附在APES處理的載玻片上，將切片于65 ℃烘烤1 h之后，脫蠟及水化，進行原位雜交預(yù)處理，雜交，依照泰普生物地高辛染色液試劑說明書操作規(guī)范操作，用三步法檢測組織切片中地高辛標(biāo)記的核酸靶點，用DAB作為底物顯色，在陰、陽性對照成立的基礎(chǔ)上，依據(jù)雜交信號有無判斷結(jié)果，陽性結(jié)果為組織切片中的細胞核見黃色、棕黃色或棕褐色著色，而細胞質(zhì)和細胞膜無著色，只有當(dāng)核分裂時可以出現(xiàn)細胞質(zhì)著色。

CK、P63免疫組化檢測，實驗設(shè)置外部陰性對照、陽性對照及組織內(nèi)對照，將組織切片于65 ℃烘烤1 h之后，使用羅氏全自動免疫組化染色機，應(yīng)用邁新生物技術(shù)有限公司提供的試劑盒，嚴格按照儀器操作規(guī)程進行免疫組化染色，結(jié)果P63陽性為細胞核呈棕褐色著色，CK陽性為細胞質(zhì)或上皮細胞胞膜呈棕黃色或黃色著色。

1.3 觀察指標(biāo)

記錄并分析首發(fā)病例與復(fù)發(fā)病例患者的性別、年齡、組織學(xué)類型、病灶部位等臨床資料；應(yīng)用免疫組化檢測和原位雜交檢測首發(fā)病例與復(fù)發(fā)病例CK、P63與原位雜交EBER水平，并記錄分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

本研究數(shù)據(jù)采取統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 23.0進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以例數(shù)、百分比（n，%）表示，進行χ2檢驗；計量資料以符合正態(tài)分布則用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；采用Logistic回歸分析分析CK、P63與原位雜交EBER在復(fù)發(fā)性鼻咽癌中的診斷價值；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 首發(fā)病例與復(fù)發(fā)病例臨床病理資料比較

首發(fā)病例與復(fù)發(fā)病例的性別、年齡、組織學(xué)類型和病灶部位比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），見表1。

表1 首發(fā)病例與復(fù)發(fā)病例臨床病理資料對比分析（例）

2.2 首發(fā)病例與復(fù)發(fā)病例CK、P63與原位雜交EBER表達分析

復(fù)發(fā)病例的CK、P63與原位雜交EBER表達陽性人數(shù)高于首發(fā)病例，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

2.3 CK、P63與原位雜交EBER在復(fù)發(fā)性鼻咽癌中的診斷價值

Logistic回歸分析結(jié)果顯示：CK、P63與原位雜交EBER并非復(fù)發(fā)性鼻咽癌的獨立診斷指標(biāo)（P＞0.05），聯(lián)合診斷對復(fù)發(fā)性鼻咽癌具有診斷價值（P＜0.05），見表3。

表3 CK、P63與原位雜交EBER在復(fù)發(fā)性鼻咽癌中的診斷價值

3.討論

鼻咽癌病理診斷中常應(yīng)用原位雜交與免疫組化，其中主要包含CK、P63與原位雜交EBER檢測，其中CK屬于上皮細胞的標(biāo)記物，能夠勾畫出細胞的輪廓，顯微鏡下可看到呈篩孔狀或網(wǎng)狀排列，而且大多患者會呈陽性表達情況。而P63為基底細胞標(biāo)志物，P36主要表達臨床上皮源性惡性腫瘤，在腺癌中幾乎不表達。而且臨床研究顯示，在鼻咽癌患者中P63高表達可能是鼻咽癌發(fā)生的早期事件[3]。EB病毒（EBV）是γ皰疹病毒科的一員，它的編碼小分子RNA-EBER在EB病毒感染細胞核中會出現(xiàn)高拷貝現(xiàn)象。所以，應(yīng)用原位雜交法能夠特異性的進行EBV檢測，其主要原理是應(yīng)用EBER特有的序列設(shè)計特異性探針和EBER的靶序列互相結(jié)合、互補，達到檢測目的。原位雜交EBER檢測可以準(zhǔn)確定位細胞，明確組織細胞中EB病毒的位置及感染程度，有利于病理診斷及分級。大量研究表明，EB病毒在鼻咽癌患者體內(nèi)參與了疾病的發(fā)生與惡變的過程，幾乎所有鼻咽癌患者的癌組織之中都能夠檢測出EB病毒特異性抗體與DNA[4-5]。由此可見，應(yīng)用CK、P63與原位雜交EBER對復(fù)發(fā)性鼻咽癌診斷是具有科學(xué)依據(jù)的。

本研究結(jié)果表明，首發(fā)病例與復(fù)發(fā)病例的性別、年齡、組織學(xué)類型和病灶部位對比無明顯差異（P＞0.05），由此證明，無論是首發(fā)病例還是復(fù)發(fā)病例患者的性別、年齡、組織學(xué)類型和病灶部位都沒有明顯差異。相關(guān)研究顯示，首發(fā)鼻咽癌患者超過5年之后可能是因為新的腫瘤而導(dǎo)致復(fù)發(fā)[6]，因此，可能與患者的病理情況無明顯關(guān)系；首發(fā)病例與復(fù)發(fā)病例的CK、P63與原位雜交EBER表達對比差異顯著，復(fù)發(fā)病例的CK、P63與原位雜交EBER表達陽性人數(shù)明顯高于首發(fā)病例（P＜0.05），由此證明，CK、P63與原位雜交EBER表達與鼻咽癌的復(fù)發(fā)性可能存在一定關(guān)系。相關(guān)報道顯示，有10.8%的復(fù)發(fā)性鼻咽癌患者EBER檢測為陰性[7]。本研究結(jié)果中的陰性患者人數(shù)較低，這可能是因為與組織學(xué)處理欠佳有關(guān)。而且腫瘤成分比較少的時候鏡下容易出現(xiàn)漏診現(xiàn)象，因此在檢測過程中要特別注意。相關(guān)研究表明，CK作為細胞的靶結(jié)構(gòu)，會參與輻射，從而導(dǎo)致細胞的變化與活動，但是并不能作為鼻咽癌患者復(fù)發(fā)性的獨立判斷指標(biāo)[8]，與本研究結(jié)果具有相似性。Logistic回歸分析結(jié)果顯示：CK、P63與原位雜交EBER并非復(fù)發(fā)性鼻咽癌的獨立診斷指標(biāo)（P＞0.05），聯(lián)合診斷對復(fù)發(fā)性鼻咽癌具有診斷價值（P＜0.05）。由此證明，應(yīng)用CK、P63與原位雜交EBER聯(lián)合診斷能夠判斷患者是否為復(fù)發(fā)性鼻咽癌，從而為患者的臨床診斷與治療提供參考。

綜上所述，CK、P63與原位雜交EBER水平與復(fù)發(fā)性鼻咽癌的發(fā)展密切相關(guān)，可以結(jié)合形態(tài)學(xué)，免疫組化CK、P63與原位雜交EBER聯(lián)合判定患者是否為復(fù)發(fā)性鼻咽癌，但是3種診斷并非為復(fù)發(fā)性鼻咽癌的獨立預(yù)測指標(biāo)。