◎ 苗育可，王然然，王楠楠，董建鋒

（承德市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河北 承德 067000）

隨著人們對(duì)動(dòng)物源食品由需求型向質(zhì)量型的轉(zhuǎn)變，動(dòng)物源食品中的獸藥殘留已逐漸成為全世界關(guān)注的一個(gè)焦點(diǎn)，也是影響動(dòng)物源性食品安全的重要因素之一。某些生產(chǎn)者為提高存活率會(huì)給批量生產(chǎn)的食用動(dòng)物使用獸藥，但使用方法不當(dāng)、休藥期結(jié)束前屠宰動(dòng)物或動(dòng)物接觸含有抗生素的污水等都可能造成獸藥殘留超標(biāo)，蓄積在動(dòng)物的細(xì)胞組織器官內(nèi)，或進(jìn)入乳汁、蛋中。喹諾酮類藥物是以4-喹諾酮為基本結(jié)構(gòu)的人工合成的抗菌藥，是使用較多的獸藥抗生素[1]。過(guò)量可引起人體的腸胃不適，甚至還會(huì)引起中樞系統(tǒng)的不良反應(yīng)。

我國(guó)有國(guó)家強(qiáng)制標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)家推薦標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、農(nóng)業(yè)部公告和衛(wèi)生部公告等多種類型的食品標(biāo)準(zhǔn)。目前我國(guó)關(guān)于動(dòng)物源性食品中喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)行有效的有30余條，這些標(biāo)準(zhǔn)種類繁多，不同動(dòng)源性類基質(zhì)提取方法各異、儀器方法不同，檢測(cè)喹諾酮的種類數(shù)量也不同。目前最常用的為GB/T 21312—2007與GB/T 20366—2006，均為高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，本文結(jié)合長(zhǎng)期檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)，以兩種標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)，優(yōu)化整合出一套便捷高效的喹諾酮類藥物殘留的實(shí)驗(yàn)方案[2-3]。本文實(shí)施后對(duì)前處理過(guò)程的優(yōu)化，可簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟，最大程度涵蓋動(dòng)物源性基質(zhì)的種類，降低實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)誤差，大大提高工作效率，避免浪費(fèi)，節(jié)省實(shí)驗(yàn)資金。

1 材料與方法

1.1 材料

樣品：檢測(cè)樣品來(lái)自河北省承德市雙灤區(qū)超市，包括雞肉、豬肉、牛肉、雞蛋和牛奶。

試劑：冰乙酸（99.5%，凱通化學(xué)試劑公司）；正己烷（98.0%，凱通化學(xué)試劑公司）；檸檬酸（99.5%，凱通化學(xué)試劑公司）；甲酸（99.0%，羅恩試劑公司）；氫氧化鈉（96.0%，紅巖試劑廠）；乙二胺四乙酸二鈉（99.0%，羅恩試劑公司）；磷酸氫二鈉（99.0%，泰興試劑廠）；甲醇（色譜級(jí)，美國(guó)Fisher公司）；乙腈（色譜級(jí)，美國(guó)Fisher公司）；娃哈哈純凈水。

標(biāo)準(zhǔn)品：氧氟沙星（純度99.7%，壇墨質(zhì)檢）。

1.2 儀器

ME303T/02型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）、KS-500DE型超聲波清洗器（昆山潔力美超聲儀器有限公司）、HC-3018R高速冷凍離心機(jī)（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（AB SCIEX公司）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士布奇公司）和氮吹儀（美國(guó)Biotage公司）。

1.3 儀器條件

本文所采用的儀器流動(dòng)相為0.2%甲酸水溶液和乙腈，流速為0.2 mL·min-1，梯度洗脫情況見(jiàn)表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫表

1.4 樣品前處理

樣品前處理是檢驗(yàn)檢測(cè)過(guò)程中重要的試驗(yàn)步驟，其占據(jù)整個(gè)分析過(guò)程約60%的時(shí)間，主要的分析誤差都來(lái)自樣品前處理環(huán)節(jié)，樣品前處理直接影響到檢驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。本文主要依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《動(dòng)物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測(cè)方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》（GB/T 21312—2007）與《動(dòng)物源產(chǎn)品中喹諾酮類殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB/T 20366—2006），在其中選取了3種喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)前處理方法作為比較。

1.5 試驗(yàn)方法

1.5.1 相同基質(zhì)

以豬肉為基質(zhì)，氧氟沙星為例。①前處理方法1。使用EDTA-Mcllvaine緩沖溶液提取樣品，采用固相萃取柱凈化。稱取試樣加入20 mL 0.1 mol·L-1的EDTA Mcllvaine緩沖溶液，進(jìn)行旋渦混合超聲離心后，使用HLB固相萃取柱進(jìn)行凈化。使用1 mL 0.2%甲酸水溶液渦旋溶解。供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定[2]。②前處理方法2。使用0.2%甲酸乙腈提取樣品，采用乙腈飽和正己烷凈化旋蒸 稱取均質(zhì)試樣加入20 mL甲酸-乙腈溶液進(jìn)行提取，均質(zhì)離心后，用20 mL甲酸-乙腈溶液再重復(fù)提取一次，合并上清液。使用25 mL乙腈飽和的正己烷進(jìn)行凈化，旋蒸氮吹，準(zhǔn)確加入1.0 mL甲酸-乙腈溶液溶解殘?jiān)ㄈ?，供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定[3]。③前處理方法3。根據(jù)QuEchERS方法的要求，進(jìn)行提取凈化，供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

1.5.2 不同基質(zhì)

使用0.2%甲酸乙腈提取樣品，采用乙腈飽和正己烷凈化旋蒸，以氧氟沙星為例，以豬肉、雞肉、牛肉、雞蛋和牛奶[4]為基質(zhì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 3種前處理方法的回收率比較

由圖1知，使用EDTA-Mcllvaine緩沖溶液提取樣品，采用固相萃取柱凈化，最終回收率為31.2%。使用0.2%甲酸乙腈提取樣品，采用乙腈飽和正己烷凈化旋蒸，最終回收率為74.3%。采用QuEchERS方法最終回收率為75.0%[5]。

圖1 3種前處理方法的回收率圖

2.2 5種基質(zhì)的回收率比較

由圖2知，豬肉回收率為73.2%，雞肉回收率為72.9%，牛肉回收率為75.4%，雞蛋回收率為69.1%，牛奶回收率為66.4%。結(jié)論為畜禽類基質(zhì)回收率較好，雞蛋、牛奶較低。

圖2 5種基質(zhì)的回收率圖

3 結(jié)論與討論

使用0.2%甲酸乙腈提取樣品，采用乙腈飽和正己烷凈化旋蒸和QuEchERS方法回收率相差不大，且二者均比使用EDTA-Mcllvaine緩沖溶液提取樣品，采用固相萃取柱凈化的方法回收率高。使用固相萃取柱在具體實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)于目標(biāo)物質(zhì)的損失更大，且更加耗時(shí)。而對(duì)于畜禽肉、雞蛋牛奶來(lái)說(shuō)，使用QuEchERS方法或0.2%甲酸乙腈提取樣品，采用乙腈飽和正己烷凈化旋蒸的方法，回收率較高，試驗(yàn)效率較高。此結(jié)果為喹諾酮藥物殘留檢測(cè)方法提供技術(shù)支撐。