超高效液相色譜法測(cè)定食用油中9種抗氧化劑

崔利輝 李璐琦 胡娜

植物油脂經(jīng)過(guò)加工后，天然存在的抗氧化成分會(huì)大量損失。為保證油脂的質(zhì)量安全，防止油脂在貯存過(guò)程中發(fā)生氧化酸敗，在油脂中添加合成抗氧化劑是最有效的解決方法之一。按來(lái)源不同，抗氧化劑主要分為天然和人工合成抗氧化劑，為了節(jié)約成本，企業(yè)一般會(huì)使用人工合成抗氧化劑，以延長(zhǎng)食品的保質(zhì)期。食品中的合成抗氧化劑主要有丁基羥基茴香醚（BHA）、2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）、叔丁基對(duì)苯二酚（TBHQ）、沒(méi)食子酸丙酯（PG）等。目前抗氧化劑的檢測(cè)方法主要有比色法、氣相色譜法、液相色譜法、電化學(xué)分析法、氣質(zhì)聯(lián)用法、液質(zhì)聯(lián)用法等。GB/T 5009.32-2017食品中9種抗氧化劑的測(cè)定，規(guī)定了相關(guān)技術(shù)方法的檢測(cè)范圍，本研究利用超高效液相色譜對(duì)該方法進(jìn)行了優(yōu)化，縮短了分析時(shí)間，簡(jiǎn)化了處理過(guò)程，且有更高的靈敏度、更低的定量限。

一、材料與方法

1.儀器、試劑與標(biāo)準(zhǔn)品。（1）儀器。LC30A超高效液相色譜儀（日本島津公司）； D型干式氮吹儀（上海滬析實(shí)業(yè)有限公司）；MS3渦旋震蕩器（德國(guó)IKA公司）；Allegra 64R低溫高速離心機(jī) （美國(guó)貝克曼公司）；ME204電子天平（瑞士梅特勒公司）。（2）試劑與標(biāo)準(zhǔn)品。試劑： 乙腈、正己烷（HPLC級(jí)， 美國(guó)天地）、甲酸（HPLC級(jí)， 阿拉?。?biāo)準(zhǔn)品：乙腈中9種抗氧化劑混標(biāo)（GB 5009.32-2016，編號(hào)為80861JH，北京壇墨質(zhì)檢）。

2.實(shí)驗(yàn)方法。（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取1000μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液2.5mL，用乙腈稀釋定容至25mL，配置成濃度為100μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。分別取0.5、1.0、2.0、5.0、10.0mL儲(chǔ)備液，用乙腈稀釋定容至10mL，配置成濃度為5.0、10.0、20.0、50.0、100.0μg/mL系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

（2）樣品處理。稱取約1.00g樣品于50mL離心管中，加入5mL乙腈飽和的正己烷溶液，渦旋2min，再加入5mL正己烷飽和的乙腈溶液渦旋提取2min，8000r/min離心5分鐘，去除正己烷層，吸取乙腈層2.00mL，40℃氮?dú)獯蹈?，加?.5mL30%乙腈水溶液，渦旋1min，溶液過(guò)0.22μm尼龍濾膜，液相色譜測(cè)定。

3.色譜條件。色譜柱：Shim-pack XR-ODS III（2mmL×75mm，1.6μm）；流速：0.5mL/min；進(jìn)樣量5μL，柱溫40℃；流動(dòng)相A：0.1%甲酸乙腈溶液；流動(dòng)相B：0.1%甲酸水溶液；洗脫程序（A）0-1.5min，30%升至40%；1.5-6.5min，升至42%；6.5-7.5min保持90%；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm；檢測(cè)器采集頻率：100ms；外標(biāo)法定量。

二、結(jié)果與分析

1.標(biāo)準(zhǔn)譜圖。本文采用超高效液相色譜法測(cè)定9種合成抗氧化劑，紫外檢測(cè)器檢測(cè)頻率為100ms，色譜圖如圖1所示。

2.標(biāo)準(zhǔn)曲線及定量限。依次測(cè)定濃度為5、10、20、50、100mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，得到線性回歸方程，線性關(guān)系良好。以10μg/mL濃度的混標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行液相分析，以各目標(biāo)峰的信噪比（S/N≥10）分別確認(rèn)9種抗氧化劑的定量限，如表1表示。

3.準(zhǔn)確度和精密度。選擇空白樣品測(cè)定6次，計(jì)算目標(biāo)物含量后，準(zhǔn)確添加9種抗氧化劑，質(zhì)量濃度均為5、50mg/kg，按確定的方法進(jìn)行處理（n=6），計(jì)算加標(biāo)回收率和精密度，見(jiàn)表2。

本研究基于超高效液相色譜法建立了一種處理簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確定量分析食用油中沒(méi)食子酸丙酯、2，4，5-三羥基苯丁酮、叔丁基對(duì)苯二酚、去甲二氫愈創(chuàng)木酸、叔丁基對(duì)羥基茴香醚BHA、2，6-二叔丁基-4-羥甲基苯酚、沒(méi)食子酸辛酯、2，6-二叔丁基對(duì)甲基苯酚、沒(méi)食子酸十二酯等9種抗氧化劑的方法，與GB 5009.32-2016中第一法相比，簡(jiǎn)化了凈化過(guò)程，提高了檢測(cè)靈敏度，縮短了檢測(cè)分析時(shí)間，節(jié)省了試劑用量。

結(jié)果顯示，本方法可以在11min內(nèi)完成9種化合物的檢測(cè)，具有良好的精確度和準(zhǔn)確度，在5.0-50μg/mL范圍內(nèi)，信號(hào)響應(yīng)值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)大于0.999，定量為0.3-2.4μg/kg，加標(biāo)回收率為89.6%-96.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.3%-7.0%。（基金項(xiàng)目：2020年楊凌職業(yè)技術(shù)學(xué)院校內(nèi)基金項(xiàng)目“食品中多種抗氧化劑的快速檢測(cè)研究”，編號(hào)ZK20-61。）

作者簡(jiǎn)介：崔利輝（1987-），男，漢族，陜西楊凌，楊凌職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程分院，碩士研究生，助教；研究方向：食品質(zhì)量安全檢測(cè)。