RNA m6A 甲基化修飾酶調(diào)控腫瘤的功能及其抑制劑的研究進(jìn)展

郝亞娟，劉穎斌

1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院普外科，上海市膽道疾病研究中心，上海200092；2.上海市膽道疾病研究重點(diǎn)實驗室，上海200092；3.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院膽胰外科，癌基因與相關(guān)基因國家重點(diǎn)實驗室，上海市腫瘤研究所，上海200120

RNA 修飾在生命活動和疾病發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。目前，已有150 多種RNA 修飾，涉及信使RNA （messenger RNA，mRNA）、非編碼RNA （noncoding RNA， ncRNA）、 轉(zhuǎn)運(yùn)RNA （transfer RNA，tRNA）、核糖體RNA（ribosomal RNA，rRNA）、核內(nèi)小RNA （small nuclear RNA， snRNA） 和核仁小RNA（small nucleolar RNA，snoRNA）。其中，甲基化修飾是一種非常廣泛的修飾，約占RNA總修飾類型的2/3。甲基化修飾發(fā)生在RNA 上的位置主要是堿基的氮原子（N）、嘌呤和嘧啶的碳原子（C）、2′-OH的氧原子（O）上。氮6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenine，m6A）修飾是其中具有代表性的修飾之一。

1 RNA m6A甲基化修飾

1.1 RNA m6A甲基化修飾的特征

m6A 修飾是真核生物mRNA 中一種高豐度的表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)修飾。m6A 廣泛分布在自然界，包括植物、動物、原核生物和病毒中。m6A 分布在不同的RNA 類型中。在古生菌和細(xì)菌中，主要分布于tRNA 和rRNA；在真核生物中，除分布于rRNA 外，還分布于mRNA 和ncRNA 中。不同mRNA 的m6A 水平是不同的。在每1 000 個核苷酸中，約有32個GAC/AAC位點(diǎn)，但其中只有1～2個能被甲基化。一般mRNA 的平均長度為3 kb，測序可檢測到1～5個m6A修飾［1-2］。

化學(xué)方法和m6A 免疫共沉淀高通量測序（m6Aspecific methylated RNA immunoprecipitation high throughput sequencing，meRIP-seq）發(fā)現(xiàn)m6A 保守的基序為RRACH（R 通常為G 和A，H 通常為A、C 和U），其中最經(jīng)典的基序為GGACU。在人和小鼠細(xì)胞中，目前發(fā)現(xiàn)約有7 000個mRNA 存在m6A 修飾，且具有很高的保守性。meRIP-seq 揭示了這種甲基化修飾主要分布在mRNA的編碼區(qū)、剪切位點(diǎn)附近和靠近終止密碼子的3′非編碼區(qū)（3′untranslated region，3′UTR）；此外，m6A 在長的外顯子區(qū)也有分布［1-2］。

1.2 RNA m6A甲基化修飾酶和結(jié)合蛋白

RNA m6A 修飾是動態(tài)可逆的，發(fā)揮著重要的分子功能。RNA m6A 修飾由甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物Wilms’腫瘤蛋白1 相關(guān)蛋白（Wilms’ tumor 1-associating protein，WTAP）/甲基轉(zhuǎn)移酶樣3 （methyltransferase like 3，METTL3）/甲基轉(zhuǎn)移酶樣14（methyltransferase like 14，METTL14）以S-腺苷甲硫氨酸（S-adenosylmethionine，SAM）為甲基供體催化形成［3-5］，由去甲基化酶α-酮戊二酸依賴的加雙氧酶AlkB 同源蛋白5（AlkB homolog 5，ALKBH5）［6］或FTO （FTO α -ketoglutarate dependent dioxygenase）［7］在Fe2+、α-酮戊二酸輔助下催化去除，能被含有YTH 結(jié)構(gòu)域的m6A 讀碼器，如YTH 結(jié)構(gòu)域m6A RNA 結(jié)合蛋白1～3 （YTH N6-methyladenosine RNA binding protein 1-3，YTHDF1-3）、YTH 結(jié)構(gòu)域包含蛋白1～2（YTH domain containing 1-2，YTHDC1-2）識別。定位在細(xì)胞質(zhì)的YTHDF2 能夠調(diào)控mRNA 的穩(wěn)定性，YTHDF1 和YTHDF3 能夠調(diào)控mRNA 的翻譯效率，YTHDC2 能夠促進(jìn)翻譯；定位在細(xì)胞核的YTHDC1 能夠調(diào)控前體mRNA 的可變剪接［8］、出核［9］、X 染色體沉默［10］。此外，微RNA（microRNA，miRNA）能夠通過序列配對機(jī)制調(diào)控mRNA m6A的水平［11］。

后來的研究相繼發(fā)現(xiàn)了一些m6A 的修飾酶，包括甲基轉(zhuǎn)移酶的組分vir 樣m6A 甲基轉(zhuǎn)移酶相關(guān)（vir like m6A methyltransferase associated，VIRMA，KIAA1429）、鋅指CCCH 類包含蛋白13（zinc finger CCCH-type containing 13，ZC3H13）、Cbl 原癌基因樣1 （Cbl proto-oncogene like 1，HAKAI）、RNA 結(jié)合基序蛋白15/15B （RNA binding motif protein 15/15B，RBM15/15B），它們能催化大部分的RRACH 基序甲基化；另外一個甲基轉(zhuǎn)移酶——甲基轉(zhuǎn)移酶樣16（methyltransferase like 16，METTL16）能催化甲硫氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶 2A （methionine adenosyltransferase 2A，MAT2A）發(fā)卡結(jié)構(gòu)頂部的UAC（m6A）GAGAA甲基化。其中一類結(jié)合蛋白，不均一核糖核蛋白C/G （heterogeneous nuclear ribonucleoprotein C/G，HNRNPC/G）和不均一核糖核蛋白A2B1（heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2B1，HNRNPA2B1）能夠識別莖環(huán)結(jié)構(gòu)的m6A 修飾并調(diào)控其莖和環(huán)結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)換，當(dāng)其有m6A 修飾并結(jié)合時，主要為環(huán)結(jié)構(gòu)，沒有m6A 修飾時為莖結(jié)構(gòu)。另外一類結(jié)合蛋白為常見的RNA 結(jié)合蛋白，如含有KH 結(jié)構(gòu)域的胰島素樣生長因子2 mRNA 結(jié)合蛋白1～3（insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 1-3，IGF2BP1-3） 和RGG 結(jié)構(gòu)域的FMRP 翻譯調(diào)節(jié)子1（FMRP translational regulator 1，F(xiàn)MR1）。除此之外，脯氨酸豐富的卷曲螺旋2A （proline rich coiled-coil 2A，PRRC2A）能夠識別m6A并影響少突膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)育和髓鞘形成。

對m6A相關(guān)酶的功能研究發(fā)現(xiàn)，這些基因活性異常導(dǎo)致了上千種基因的表達(dá)異常，提示了m6A在RNA代謝方面的重要作用。m6A可能影響脂肪代謝、精子發(fā)育、腫瘤生成［12-13］、干細(xì)胞定向分化、細(xì)胞重編程、生物鐘節(jié)律、細(xì)胞分裂、記憶和神經(jīng)發(fā)育以及其他一些生命過程。

2 RNA m6A 甲基化修飾與腫瘤的關(guān)系及其抑制劑

2.1 FTO與腫瘤發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系及其抑制劑

FTO 和ALKBH5 是人類中大腸桿菌DNA 烷基化去甲基化酶AlkB 同源蛋白家族成員，含有保守的結(jié)合二價鐵離子的組氨酸-天冬氨酸-組氨酸（histidine-aspartic acidhistidine，HDH）結(jié)構(gòu)域和結(jié)合2-酮戊二酸以及識別RNA底物的精氨酸-x-x-精氨酸（arginine-x-x-arginine，RxxR）功能結(jié)構(gòu)域。

FTO 是第一個被發(fā)現(xiàn)的m6A 的去甲基化酶，涉及多種疾病，如肥胖、糖尿病、急性髓細(xì)胞性白血?。╝cute myelogenous leukemia，AML）、惡性膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、阿爾茨海默病等。

2.1.1 FTO在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中的作用

（1） FTO 與AML FTO 高表達(dá)于AML 的一些特定亞型中，如t（11q23）/MLL 重排型、t（15；17）/PMLRARA 型、FLT3-ITD 型及NPM1 突變型。FTO 能增加AML原癌基因介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化，促進(jìn)AML的發(fā)生。FTO通過去除其靶標(biāo)錨蛋白重復(fù)和SOCS 盒包含2（ankyrin repeat and SOCS box containing 2，ASB2）及維甲酸受體α（retinoic acid receptor α，RARA）mRNA上的m6A甲基化修飾，抑制ASB2和RARA的表達(dá)，從而抑制全反式維甲酸（all-transretinoic acid，ATRA） 誘導(dǎo)的AML 細(xì)胞分化［14］。

（2） FTO 與惡性膠質(zhì)瘤 RNA m6A 甲基化修飾能促進(jìn)惡性膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的自我更新和腫瘤生成。敲低RNA m6A 甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的關(guān)鍵組分METTL3或METTL14，能明顯促進(jìn)人類惡性膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的生長、自我更新和腫瘤生成。反之，過表達(dá)METTL3或使用抑制劑抑制RNA m6A 的去甲基化酶FTO，能抑制惡性膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的生長和自我更新。而且，抑制FTO 能抑制惡性膠質(zhì)瘤的進(jìn)展，延長荷瘤小鼠的存活時間。RNA m6A 甲基化測序發(fā)現(xiàn)METTL3或METTL14敲低后，惡性膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中一些具有關(guān)鍵生物學(xué)功能的基因的mRNA m6A 修飾水平和mRNA 表達(dá)水平發(fā)生變化，如ADAM 金屬肽酶結(jié)構(gòu)域19 （ADAM metallopeptidase domain 19，ADAM19）。這些結(jié)果提示mRNA m6A 甲基化修飾可能是惡性膠質(zhì)瘤的一個潛在的治療靶標(biāo)［15］。

（3） FTO 與黑色素瘤 mRNA m6A 去甲基化酶FTO能促進(jìn)黑色素瘤的生長，抑制抗程序性死亡蛋白-1（programmed death-1，PD-1）的免疫治療效果。FTO 在人黑色素瘤中高表達(dá)，能促進(jìn)小鼠的黑色素瘤生成。代謝饑餓壓力誘導(dǎo)自噬和核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）通路激活，進(jìn)而激活FTO。敲低FTO能增加關(guān)鍵的促癌的黑色素瘤細(xì)胞的基因包括PD-1、C-X-C 基序趨化因子受體4 （C-X-C motif chemokine receptor 4，CXCR4） 和SRY 盒轉(zhuǎn)錄因子10 （SRY-box transcription factor 10，SOX10）的m6A 甲基化水平升高，導(dǎo)致m6A 結(jié)合蛋白YTHDF2 引起的RNA 降解增加。在小鼠中，敲低FTO能增加黑色素瘤細(xì)胞對γ 干擾素（interferon γ，IFNγ）和抗PD-1 治療的敏感性，激活適應(yīng)性免疫。這些結(jié)果提示，將FTO 的抑制劑和抗PD-1 治療結(jié)合起來，或許能抑制黑色素瘤的免疫逃逸［16］。

（4） FTO 與乳腺癌 mRNA m6A 去甲基化酶FTO 在乳腺癌中高表達(dá)，并與患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。FTO 能在體外和體內(nèi)促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞系的增殖、克隆形成和轉(zhuǎn)移。BCL2 互作蛋白3（BCL2 interacting protein 3，BNIP3）是一個促凋亡基因，是FTO 的下游靶標(biāo)。FTO 能去除BNIP3mRNA 3′UTR 的m6A 甲基化修飾，促進(jìn)BNIP3的降解，但其降解不依賴于m6A結(jié)合蛋白YTHDF2。BNIP3在乳腺癌患者中呈現(xiàn)出抑癌作用，與FTO 的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。BNIP3 能明顯抑制FTO 介導(dǎo)的乳腺癌增殖和轉(zhuǎn)移。FTO在乳腺癌中或許能成為一個新的治療靶標(biāo)［17］。

（5） FTO 與非小細(xì)胞肺癌 mRNA m6A 去甲基化酶FTO 在非小細(xì)胞肺癌中高表達(dá)，m6A 修飾水平降低。敲低FTO能在體外或體內(nèi)抑制癌細(xì)胞系的增殖、克隆形成或裸鼠成瘤。FTO 能去除泛素蛋白特異性蛋白酶7（ubiquitin specific peptidase 7，USP7）的m6A 甲基化修飾并增加其mRNA的穩(wěn)定性。USP7的mRNA水平在人肺癌組織中高表達(dá)，并且與FTO的mRNA 水平呈正相關(guān)。敲低或使用抑制劑P5091或P22027降低USP7的水平，能抑制肺癌細(xì)胞系的增殖、克隆形成。敲低FTO引起的肺癌細(xì)胞系增殖緩慢能被USP7的過度表達(dá)而回補(bǔ)修復(fù)。因此，mRNA m6A 去甲基化酶FTO 能通過增加USP7的表達(dá)促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌的發(fā)展［18］。

（6） FTO 與肺鱗癌 通過分析癌癥基因組圖譜（the Cancer Genome Atlas，TCGA）數(shù)據(jù)庫得知FTO 與肺鱗癌的預(yù)后相關(guān)。與其他的m6A 修飾酶（如METTL3、METTL14、ALKBH5）相比，F(xiàn)TO 能特異性地引起肺鱗癌中m6A 修飾異常。敲低FTO能抑制肺鱗癌細(xì)胞系的增殖和侵襲，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。反之，過表達(dá)野生型FTO而不是其突變體，能促進(jìn)肺鱗癌細(xì)胞系的惡性表型進(jìn)展。FTO通過去甲基化髓系鋅指1 （myeloid zinc finger 1，MZF1）的m6A 修飾并增加其mRNA 的穩(wěn)定性來促進(jìn)肺鱗癌的發(fā)展［19］。

2.1.2 FTO抑制劑

目前，已有文獻(xiàn)［20-30］報道了一些有效的FTO 抑制劑（表1）。甲氯芬那酸（meclofenamic acid，MA）能與FTO而不是ALKBH5 競爭性地結(jié)合含有m6A 的RNA，從而間接并選擇性地抑制FTO 的活性［20］。 恩他卡朋（entacapone）在體外能直接結(jié)合并抑制FTO 的活性。在飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠模型中，飼喂恩他卡朋，叉頭盒O1（forkhead box O1，F(xiàn)OXO1）mRNA 作為FTO 的直接作用底物，能誘導(dǎo)肝內(nèi)糖原異生和脂肪組織生熱作用，導(dǎo)致小鼠體質(zhì)量減輕、空腹血糖濃度降低［21］。小分子抑制劑FB23 和FB23-2 能直接結(jié)合FTO 并選擇性地抑制FTO 的m6A 去甲基化酶活性。在體外，使用FB23-2 抑制FTO 的表達(dá)，能顯著地抑制人AML 細(xì)胞系和原代AML 細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其分化和凋亡；在小鼠移植模型中，F(xiàn)B23-2能顯著抑制人AML 細(xì)胞系和原代細(xì)胞的惡性進(jìn)展。該結(jié)果提示FTO 能作為一個藥物靶標(biāo)，靶向FTO 的小分子抑制劑展現(xiàn)出了治療AML的潛能［22］。

表1 FTO的抑制劑及其作用方式Tab 1 Inhibitors of FTO and their modes of action

2.2 ALKBH5與腫瘤發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系及其抑制劑

ALKBH5 傾向于結(jié)合特異性的m6A 修飾的單鏈RNA催化其去甲基化。ALKBH5 定位于細(xì)胞核內(nèi)的亞細(xì)胞器——核小斑，提示其可能參與RNA 前體的可變剪接，ALKBH5基因敲低能促進(jìn)mRNA 出核，ALKBH5敲除還與精子發(fā)育密切相關(guān)［6］。ALKBH5基因在惡性膠質(zhì)瘤中通過維持叉頭盒M1（forkhead box M1，F(xiàn)OXM1）的表達(dá)和細(xì)胞增殖來維持其中干細(xì)胞樣細(xì)胞的致腫瘤性，降低ALKBH5基因表達(dá)將顯著抑制腫瘤的生長［31］。

Imidazobenzoxazin-5-thione MV1035 是ALKBH5 的抑制劑，能抑制ALKBH5 在惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87 中通過下游蛋白——細(xì)胞外5′核苷酸酶（ecto-5′-nucleotidase，CD73）發(fā)揮的促進(jìn)腫瘤遷移和侵襲的作用［32］。

2.3 METTL3與腫瘤發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系及其抑制劑

METTL3通常與其同源家族蛋白METTL14以1∶1的比例形成異源二聚體，再和WTAP 形成復(fù)合物發(fā)揮甲基化催化功能。WTAP 為RNA 結(jié)合蛋白，首先結(jié)合到RNA上，進(jìn)而招募METTL3和METTL14行使催化功能。它們?nèi)咧g存在直接的相互作用，共定位于富含剪切因子的細(xì)胞核內(nèi)的亞細(xì)胞器核小斑上。METTL3 是它們?nèi)咧凶钤绫昏b定的RNA m6A 甲基轉(zhuǎn)移酶，關(guān)于其在腫瘤等疾病中的作用已有報道［33-36］。

在AML 中，定位到轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)（transcriptional start site，TSS）的CCAAT 增強(qiáng)子結(jié)合蛋白ζ（CCAAT enhancer binding protein ζ，CEBPZ）能招募METTL3 結(jié)合到染色體上靶基因的啟動子TSS 上，進(jìn)而METTL3 能使這些靶基因mRNA 編碼區(qū)產(chǎn)生m6A 甲基化修飾，增強(qiáng)翻譯，促進(jìn)AML 發(fā)展。下調(diào)METTL3 能引起細(xì)胞周期阻滯、白血病細(xì)胞分化，并能阻止免疫缺陷小鼠形成白血?。?3］。METTL3 能抑制造血干/祖細(xì)胞分化并促進(jìn)其增殖。在AML 中，METTL3 高表達(dá)，METTL3 生成的m6A促進(jìn)MYC 原癌基因、bHLH 轉(zhuǎn)錄因子（MYC protooncogene，bHLH transcription factor，c-MYC）、BCL2 凋亡調(diào)節(jié)子（BCL2 apoptosis regulator，BCL2）、同源性磷酸酶-張力蛋白（phosphatase and tensin homolog，PTEN）的翻譯，促進(jìn)AML 發(fā)展。METTL3 缺失導(dǎo)致AKT 絲氨酸、蘇氨酸激酶（AKT serine/threonine kinase，AKT）的磷酸化增加，使AML 細(xì)胞分化和凋亡，延緩AML 進(jìn)程［34］。在胃癌中，METTL3 介導(dǎo)的肝素結(jié)合生長因子（heparin binding growth factor，HDGF）的m6A 修飾增多，導(dǎo)致血管生成和糖酵解增加，從而促進(jìn)胃癌的生長和肝轉(zhuǎn)移［35］。在肝癌中，METTL3 高表達(dá)并能甲基化細(xì)胞因子信號2 的抑制子（suppressor of cytokine signaling 2，SOCS2） RNA 使其被m6A 修飾，甲基化的SOCS2RNA易被YTHDF2 介導(dǎo)降解，從而促進(jìn)肝癌的生長和轉(zhuǎn)移［36］。

METTL3 可能成為腫瘤治療的一個重要的藥物靶點(diǎn)，但目前關(guān)于其小分子抑制劑的研究較少。有學(xué)者通過篩選它的甲基化供體SAM 的類似物和衍生物庫，選取了其中6 種進(jìn)行了蛋白晶體學(xué)的驗證，發(fā)現(xiàn)其中有2 種有較好的配位基活性［37］。

3 展望

目前關(guān)于m6A 修飾在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的重要性越來越明確，某些抑制劑展現(xiàn)出臨床應(yīng)用潛能，但是對于其在膽囊癌中的研究較少。膽囊癌是一種常見的膽道系統(tǒng)惡性腫瘤，易轉(zhuǎn)移，患者預(yù)后非常差。本課題組通過全基因組測序和外顯子測序發(fā)現(xiàn)了膽囊癌中的基因組變異，尤其是表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，ErbB）通路上的突變，其中erb-b2 受體蘇氨酸激酶2 和3（erb-b2 receptor tyrosine kinase 2/3，ERBB2/3）的突變能促進(jìn)CD274分子（PD-L1）介導(dǎo)的膽囊癌免疫逃逸［38-39］。 我們對RNA 上的5- 甲基胞嘧啶（5-methylcytosine，m5C）修飾在膽囊癌中的調(diào)控作用與分子機(jī)制開展了研究，發(fā)現(xiàn)RNA m5C 甲基轉(zhuǎn)移酶NOP2/Sun RNA 甲基轉(zhuǎn)移酶2（NOP2/Sun RNA methyltransferase 2，NSUN2）協(xié)同核糖體蛋白大亞基6（ribosomal protein L6，RPL6）促進(jìn)了膽囊癌的增殖［40］。NSUN2 在膽囊癌中高表達(dá)，能促進(jìn)膽囊癌細(xì)胞系的增殖和克隆形成，促進(jìn)裸鼠皮下成瘤。NSUN2 和RPL6 存在相互作用，敲低RPL6能夠降低NSUN2 的蛋白水平，并能抑制膽囊癌細(xì)胞系的增殖和克隆形成；同時回補(bǔ)NSUN2，能修復(fù)膽囊癌細(xì)胞系的表型。此外，我們對RNA m5C 修飾在膽囊癌中的修飾譜以及分子機(jī)制開展了一定的研究。

RNA m6A 修飾在膽囊癌中的調(diào)控作用目前還沒有報道，這可能是未來膽囊癌表觀遺傳調(diào)控的一個研究方向。目前我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一些RNA m5C 和m6A 修飾互相調(diào)控的證據(jù)。這2種修飾對膽囊癌的共同調(diào)控也是未來的一個研究方向，將為靶向RNA 修飾在膽囊癌的精準(zhǔn)治療提供理論支持。

參·考·文·獻(xiàn)

[1] Dominissini D, Moshitch-Moshkovitz S, Schwartz S, et al. Topology of the human and mouse m6A RNA methylomes revealed by m6A-seq[J]. Nature,2012,485(7397):201-206.

[2] Meyer KD, Saletore Y, Zumbo P, et al. Comprehensive analysis of mRNA methylation reveals enrichment in 3' UTRs and near stop codons[J]. Cell,2012,149(7):1635-1646.

[3] Liu JZ, Yue YN, Han DL, et al. A METTL3-METTL14 complex mediates mammalian nuclear RNA N6-adenosine methylation[J]. Nat Chem Biol,2014,10(2):93-95.

[4] Schwartz S, Mumbach MR, Jovanovic M, et al. Perturbation of m6A writers reveals two distinct classes of mRNA methylation at internal and 5'sites[J].Cell Rep,2014,8(1):284-296.

[5] Ping XL,Sun BF,Wang L,et al. Mammalian WTAP is a regulatory subunit of the RNA N6-methyladenosine methyltransferase[J]. Cell Res, 2014, 24(2):177-189.

[6] Zheng GQ, Dahl JA, Niu YM, et al. ALKBH5 is a mammalian RNA demethylase that impacts RNA metabolism and mouse fertility[J]. Mol Cell,2013,49(1):18-29.

[7] Jia GF, Fu Y, Zhao X, et al. N6-methyladenosine in nuclear RNA is a major substrate of the obesity-associated FTO[J]. Nat Chem Biol, 2011, 7(12):885-887.

[8] Xiao W,Adhikari S, Dahal U, et al. Nuclear m6A reader YTHDC1 regulates mRNA splicing[J]. Mol Cell,2016,61(4):507-519.

[9] Roundtree IA, Luo GZ, Zhang ZJ, et al. YTHDC1 mediates nuclear export of N6-methyladenosine methylated mRNAs[J]. Elife,2017,6:e31311.

[10] Patil DP,Chen CK,Pickering BF,et al. M6A RNA methylation promotes XISTmediated transcriptional repression[J]. Nature,2016,537(7620):369-373.

[11] Chen T, Hao YJ, Zhang Y, et al. M6A RNA methylation is regulated by microRNAs and promotes reprogramming to pluripotency[J]. Cell Stem Cell,2015,16(3):289-301.

[12] 朱正陽,王成,姜辰一,等. RNA N6-甲基腺嘌呤異常修飾影響腫瘤干細(xì)胞促進(jìn)惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的研究進(jìn)展[J]. 上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2020,40(3):385-390.

[13] 朱嶼倩,吳凌云. m6A 甲基化修飾在血液系統(tǒng)惡性腫瘤中的作用研究進(jìn)展[J]. 上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2020,40(3):396-401.

[14] Li ZJ,Weng HY, Su R, et al. FTO plays an oncogenic role in acute myeloid leukemia as a N6-methyladenosine RNA demethylase[J]. Cancer Cell, 2017,31(1):127-141.

[15] Cui Q,Shi HL,Ye P,et al. m6A RNA methylation regulates the self-renewal and tumorigenesis of glioblastoma stem cells[J]. Cell Rep, 2017, 18(11):2622-2634.

[16] Yang S, Wei JB, Cui YH, et al. m6A mRNA demethylase FTO regulates melanoma tumorigenicity and response to anti-PD-1 blockade[J]. Nat Commun,2019,10(1):2782.

[17] Niu Y, Lin ZY, Wan A, et al. RNA N6-methyladenosine demethylase FTO promotes breast tumor progression through inhibiting BNIP3[J]. Mol Cancer,2019,18(1):46.

[18] Li J, Han Y, Zhang HM, et al. The m6A demethylase FTO promotes the growth of lung cancer cells by regulating the m6A level of USP7 mRNA[J].Biochem Biophys Res Commun,2019,512(3):479-485.

[19] Liu JQ, Ren DL, Du ZH, et al. m6A demethylase FTO facilitates tumor progression in lung squamous cell carcinoma by regulating MZF1 expression[J].Biochem Biophys Res Commun,2018,502(4):456-464.

[20] Huang Y, Yan JL, Li Q, et al. Meclofenamic acid selectively inhibits FTO demethylation of m6A over ALKBH5[J]. Nucleic Acids Res, 2015, 43(1):373-384.

[21] Peng SM, Xiao W, Ju DP, et al. Identification of entacapone as a chemical inhibitor of FTO mediating metabolic regulation through FOXO1[J]. Sci Transl Med,2019,11(488):eaau7116.

[22] Huang Y, Su R, Sheng Y, et al. Small-molecule targeting of oncogenic FTO demethylase in acute myeloid leukemia[J]. Cancer Cell, 2019, 35(4):677-691.

[23] Chen BE,Ye F,Yu L, et al. Development of cell-active N6-methyladenosine RNA demethylase FTO inhibitor[J]. J Am Chem Soc,2012,134(43):17963-17971.

[24] Li Q, Huang Y, Liu XC, et al. Rhein inhibits AlkB repair enzymes and sensitizes cells to methylated DNA damage[J]. J Biol Chem, 2016, 291(21):11083-11093.

[25] Qiao Y, Zhou B, Zhang MZ, et al. A novel inhibitor of the obesity-related protein FTO[J]. Biochemistry,2016,55(10):1516-1522.

[26] Padariya M,Kalathiya U. Structure-based design and evaluation of novel Nphenyl-1H-indol-2-amine derivatives for fat mass and obesity-associated(FTO)protein inhibition[J]. Comput Biol Chem,2016,64:414-425.

[27] Wang RY, Han ZF, Liu BJ, et al. Identification of natural compound radicicol as a potent FTO inhibitor[J]. Mol Pharm,2018,15(9):4092-4098.

[28] Han XX, Wang N, Li JY, et al. Identification of nafamostat mesilate as an inhibitor of the fat mass and obesity-associated protein (FTO) demethylase activity[J]. Chem Biol Interact,2019,297:80-84.

[29] Wang Y,Li JY,Han XX,et al. Identification of Clausine E as an inhibitor of fat mass and obesity-associated protein (FTO) demethylase activity[J]. J Mol Recognit,2019,32(10):e2800.

[30] Li JY, Wang Y, Han XX, et al. The role of chlorine atom on the binding between 2-phenyl-1H-benzimidazole analogues and fat mass and obesityassociated protein[J]. J Mol Recognit,2019,32(6):e2774.

[31] Zhang SC, Zhao BS, Zhou AD, et al. m6A demethylase ALKBH5 maintains tumorigenicity of glioblastoma stem-like cells by sustaining FOXM1 expression and cell proliferation program[J]. Cancer Cell, 2017, 31(4): 591-606.e6.

[32] Malacrida A, Rivara M, Domizio DA, et al. 3D proteome-wide scale screening and activity evaluation of a new ALKBH5 inhibitor in U87 glioblastoma cell line[J]. Bioorg Med Chem,2020,28(4):115300.

[33] Barbieri I, Tzelepis K, Pandolfini L, et al. Promoter-bound METTL3 maintains myeloid leukaemia by m6A-dependent translation control[J].Nature,2017,552(7683):126-131.

[34] Vu LP, Pickering BF, Cheng YM, et al. The N6-methyladenosine (m6A)-forming enzyme METTL3 controls myeloid differentiation of normal hematopoietic and leukemia cells[J]. Nat Med,2017,23(11):1369-1376.

[35] Wang Q, Chen C, Ding QQ, et al. METTL3-mediated m6A modification of HDGF mRNA promotes gastric cancer progression and has prognostic significance[J]. Gut,2020,69(7):1193-1205.

[36] Chen MN, Wei L, Law CT, et al. RNA N6-methyladenosine methyltransferase-like 3 promotes liver cancer progression through YTHDF2-dependent posttranscriptional silencing of SOCS2[J]. Hepatology,2018,67(6):2254-2270.

[37] Bedi RK, Huang D, Eberle SA, et al. Small-molecule inhibitors of METTL3, the major human epitranscriptomic writer[J]. Chem Med Chem,2020,15(9). DOI:10.1002/cmdc.202000011.

[38] Li ML,Zhang Z,Li X,et al. Whole-exome and targeted gene sequencing of gallbladder carcinoma identifies recurrent mutations in the ErbB pathway[J].Nat Genet,2014,46(8):872-876.

[39] Li ML, Liu FT, Zhang F, et al. GenomicERBB2/ERBB3mutations promote PD-L1-mediated immune escape in gallbladder cancer: a whole-exome sequencing analysis[J]. Gut,2019,68(6):1024-1033.

[40] Gao Y, Wang Z, Zhu YD, et al. NOP2/Sun RNA methyltransferase 2 promotes tumor progressionviaits interacting partner RPL6 in gallbladder carcinoma[J]. Cancer Sci,2019,110(11):3510-3519.