婁銀瑩 ， 張穎欣 ， 鄭文瀟 ， 孫艷爭 ， 于詠蘭

(1.北京中農(nóng)大動物醫(yī)院有限公司 ， 北京 海淀 100193 ； 2. 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 ， 北京 海淀 100193)

鉤端螺旋體病(Leptospirosis，簡稱：鉤體病)是由致病性鉤端螺旋體引起的全球性人獸共患傳染病，是我國法定的乙類傳染病。犬感染鉤體后的典型癥狀為發(fā)熱、黃疸、嘔吐、腹瀉、出血等?；既稍谄渑R床癥狀消失數(shù)月至數(shù)年后，仍間歇性地向環(huán)境中排菌[1]，增加了人感染鉤體的風(fēng)險。當(dāng)患犬表現(xiàn)非典型癥狀時，很容易被誤診、漏診。所以，及時、準(zhǔn)確地診斷犬鉤體病尤為重要。本文分析了非典型犬鉤體感染案例，旨在為人獸鉤體病的診斷、治療和防控提供資料。

1 病例情況

薩摩耶犬，6歲，體重24 kg，雌性，每年定期免疫狂犬病疫苗。主訴：患犬被帶去海邊游玩5 d回家后，每日飲水量增加至平時的2倍，尿量也明顯增加，精神沉郁。多飲多尿10 d后出現(xiàn)嘔吐而就診。

2 臨床檢查

體溫38.6 ℃，可視黏膜粉色。聽診心音正常，心率130 次/min；呼吸音及頻率正常。觸診患犬腹

部緊張，毛細(xì)血管再充盈時間<2 s，脫水6%～8%。血壓正常。

3 實驗室檢查結(jié)果

3.1 血常規(guī)檢查 各項檢查結(jié)果均在參考范圍內(nèi)。

3.2 血清生化檢查 首診結(jié)果顯示：僅肌酐輕度升高，尿素氮未升高；總蛋白和球蛋白升高，其他指標(biāo)未見明顯異常(表1)。

表1 首診時血清生化檢測結(jié)果

3.3 尿常規(guī)檢查 尿比重為1.005(<1.008)，提示為低滲尿，pH呈堿性；其他尿檢結(jié)果未見異常。

3.4 超聲檢查 腹部超聲檢查發(fā)現(xiàn)，雙腎皮質(zhì)回聲增強，提示雙腎急性損傷(圖1)；卵巢形態(tài)與活動期相關(guān)；肝臟、胰腺右葉、膀胱、雙側(cè)子宮形態(tài)未見明顯異常。

圖1 腎臟異常B超征象A：左腎； B：右腎

3.5 分子生物學(xué)診斷

3.5.1 快速實時熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Rapid real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)檢測 使用qPCR法(北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)有限公司)對血液及尿液樣本進行檢測，結(jié)果顯示，尿液樣本為鉤體陽性。

3.5.2 PCR擴增及序列鑒定 采用文獻(xiàn)[2]報道的secY基因引物對樣本進行鉤體菌屬PCR的鑒定。95 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，循環(huán)35次；72 ℃延伸7 min，4 ℃保存。擴增產(chǎn)物采用2%的瓊脂糖凝膠電泳鑒定，送檢測序并進行序列比對。

電泳結(jié)果顯示，尿液樣本在549 bp處出現(xiàn)特異性擴增條帶(圖2)。擴增產(chǎn)物測序后經(jīng)GenBank序列比對鑒定為問號鉤端螺旋體(L.interrogans)。

圖2 鉤端螺旋體secY基因擴增結(jié)果M：700 bp marker； P：陽性對照； 1：尿液樣本； 2：血液樣本

3.6 血清學(xué)診斷

3.6.1 鉤體抗體ELISA檢測 被檢血清采用SNAP?

Lepto(IDEXX，美國愛德士公司)和WITNESS?Lepto(Zoetis，美國碩騰公司)試劑盒進行檢測。結(jié)果均為陽性，提示血清中存在抗鉤體IgM和IgG抗體。

3.6.2 顯微凝集試驗(Microscopic agglutination test,MAT) 將被檢血清送吉林大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院人獸共患病重點實驗室進行MAT檢測，并對其進行血清群分型鑒定。結(jié)果顯示，被檢血清存在澳洲型和拜倫型血清型抗體，最高血清抗體滴度為1∶800。

4 診斷

綜合臨床檢查、實驗室診斷、影像學(xué)、分子生物學(xué)及血清學(xué)檢查結(jié)果，確診該犬發(fā)病原因為鉤體感染。

5 治療及轉(zhuǎn)歸

確診后立即進行抗生素治療。皮下注射阿莫西林克拉維酸鉀(Synulox，美國碩騰公司)15 mg/(kg·bw)，1次/d，口服多西環(huán)素(咳喘寧，北京中科拜克生物技術(shù)有限公司)5 mg/(kg·bw)，2次/d。同時采用支持療法糾正脫水、護肝保腎排毒。此方案治療1周后，患犬精神狀態(tài)恢復(fù)，不再有嘔吐表現(xiàn)，飲水排尿行為恢復(fù)正常。用藥2周后停用多西環(huán)素。就診后第3周生化復(fù)查，結(jié)果恢復(fù)正常(表2)。其他臨床檢查一切正常，后續(xù)要求注意犬表現(xiàn)，定期體檢。

表2 全病程中血清生化檢測結(jié)果

6 討論

鉤體病是多器官損傷性疾病，典型癥狀包括發(fā)熱、黃疸、嘔吐、腹瀉、出血等。我國犬主要感染的血清型為黃疸出血型、波摩那型和犬型[3]，且患犬癥狀表現(xiàn)與感染的鉤體血清型相關(guān)[4]。當(dāng)患犬感染宿主適應(yīng)性血清群時，可能無典型黃疸、尿毒癥癥狀，此時容易被誤診或漏診。

本病例中患犬未出現(xiàn)典型肝功損傷相關(guān)的黃疸，而多飲多尿這一臨床癥狀又不僅僅出現(xiàn)在鉤體感染后，所以動物主人在疾病初期并未足夠重視。由于鉤體具有損害多系統(tǒng)，且可逃避機體特異性免疫機制，并在腎臟中定植排泄病原等特點[5]，因此，需要同時使用多種方法才能確診鉤體病。常用診斷方法包括PCR、ELISA、MAT、細(xì)菌培養(yǎng)等。本病例中患犬首診即發(fā)現(xiàn)球蛋白升高、肌酐升高，結(jié)合低滲尿(SG=1.005)以及影像學(xué)結(jié)果，提示急性腎損傷可能與感染相關(guān)。為深究發(fā)病原因，患犬接受了分子生物學(xué)、血清學(xué)等檢查；為明確非典型發(fā)病的可能血清型，送檢血清進行MAT檢測，結(jié)果表明，患犬可能感染澳洲型或拜倫型血清型鉤體。結(jié)合就診犬未注射過任何鉤體疫苗的免疫史，最終確診為鉤體病。

鉤體病是重要的人獸共患病，及時診斷并及早介入治療可有效阻斷該病的傳播。本例中患犬的診治經(jīng)驗說明，從細(xì)微癥狀入手、合理結(jié)合多種診斷方法，能及時、明確診斷未出現(xiàn)典型癥狀的鉤體病。在第一時間給予抗生素(如多西環(huán)素)及對癥治療，能獲得很好的治療效果[6]。