高效液相色譜法測定乙霉威原藥含量

何培迎，陳弘祥，仲春梅

(江蘇藍豐生物化工有限公司，江蘇新沂221400)

乙霉威是一種氨基甲酸酯類殺菌劑，能有效地防治對多菌靈產(chǎn)生抗性的灰霉病菌引起的葡萄及蔬菜病害，如黃瓜灰霉病、甜菜葉斑病、番茄灰霉病，也可用于防治茶腐病以及蔬菜水果的防腐保鮮[1]。

根據(jù)文獻報道，乙霉威原藥采用氣相色譜分析方法[2]具有較好的準確度和精密度，但采用液相色譜分析方法還未見報道。本文采用高效液相色譜法[3]，對試樣中乙霉威進行定量分析。經(jīng)過試驗驗證，該方法操作簡便、快速、準確，分離效果好，準確度和精密度均能達到定量分析的要求，能夠滿足乙霉威原藥的檢驗要求，是一種較為理想的分析方法。

1 材料儀器

1.1 樣品和試劑

甲醇：色譜純；水：二次重蒸；乙霉威標樣：已知含量≥99.0%(沈陽化工研究院)；流動相：甲醇+水=60+40(體積比)，流動相經(jīng)0.45 μm孔徑的濾膜，并超聲脫氣10 min。

1.2 試驗儀器

高效液相色譜儀：具有紫外可見波長檢測器；色譜數(shù)據(jù)處理機或工作站；色譜柱：Nova-Pak C18不銹鋼柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)[沃特世科技(上海)有限公司]。

1.3 高效液相色譜操作條件

流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫(溫差變化≤2 ℃)；檢測波長：254 nm；進樣體積：20 μL；保留時間約5.4 min。

上述操作參數(shù)是典型的，可根據(jù)儀器的特點，對給定的操作參數(shù)作適當調(diào)整，以期獲得最佳效果，典型的乙霉威高效液相色譜圖見圖1。

2 測定步驟

2.1 標樣溶液的配制

稱取乙霉威標樣0.050 0 g (精確至0.000 2 g)置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并稀釋至刻度搖勻，備用。

2.2 試樣溶液的配制

稱取含乙霉威試樣0.050 0 g (精確至0.000 2 g)置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并稀釋至刻度搖勻，備用。

2.3 試樣的測定

在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，計算各針相對響應值的重復性，待相鄰2針的響應值＜1.0%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

2.4 試樣中有效含量的計算

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標樣溶液中的乙霉威峰面積分別進行平均，試樣中乙霉威的質(zhì)量分數(shù)X1(%)按式(1)計算：

式中：A1為標樣溶液中乙霉威峰面積的平均值；A2為試樣溶液中乙霉威峰面積的平均值；m1為乙霉威標樣的質(zhì)量，g；m2為乙霉威試樣的質(zhì)量，g；P為乙霉威標樣的質(zhì)量百分數(shù)，%。

3 結果與討論

3.1 分析方法的線性相關性試驗

準確配制一系列不同濃度的乙霉威標樣溶液，在上述色譜條件下進行測定，以質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。乙霉威線性回歸方程：Y=19 593x+13 984，相關系數(shù)：R2=0.999。本方法具有良好的線性相關性(圖2)。

圖2 乙霉威標準曲線

3.2 分析方法的精密度實驗

在上述色譜操作條件下，對同一乙霉威原藥試樣平行測定10次，測得標準偏差為0.254 7，變異系數(shù)為0.002 6%(表1)。

表1 乙霉威精密度測定

3.3 分析方法的準確度試驗

準確稱取5個已知含量的乙霉威原藥試樣，分別加入一定量的乙霉威標樣，在上述色譜操作條件下進行測定。乙霉威平均回收率為100.02%(表2)。

表2 回收率測定

4 結 論

結果表明，采用本方法測定乙霉威含量的準確度和精密度較高，能滿足定量分析要求。此方法線性關系良好，操作簡單易行，能滿足分析產(chǎn)品的檢驗要求。