安宗麒，陳珊珊，李 利，張紅平

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，四川成都 611130）

高等哺乳動物的胚胎和胎兒在輸卵管和子宮內(nèi)的生長發(fā)育具有階段性[1]。羊的妊娠可分為胚胎期、胎兒早期、胎兒期3 個階段，其中，胚胎期可見胎心進行有規(guī)律的搏動，胎兒早期伴隨頭部、四肢輪廓及蹄部形成，胎兒期胃臟、肝臟、腎臟逐漸形成[2-3]。胎兒期后期形成被毛，皮膚組織發(fā)育漸趨完善，接近出生羔羊的皮膚[4]。

山羊胎兒發(fā)育遵循哺乳動物胎兒生長發(fā)育規(guī)律，至135 日齡時胎兒形態(tài)、機體的器官基本發(fā)育完全。130日齡后是胎兒絕對體重增長的高峰期，60 日齡前體長發(fā)育較快，90 日齡后體高發(fā)育更為迅速[5]。胎兒發(fā)育過程中，肌纖維直徑始終隨個體的發(fā)育而增大，發(fā)育至90 日齡時可見明顯的肌纖維膨大[6]，65～135 日齡肌纖維數(shù)量呈階段性增長[7]。內(nèi)臟器官心、肝、肺相對早熟，在妊娠前期發(fā)育快，腸、胃等器官增重則集中于胎兒生長發(fā)育后期[8]。

簡州大耳羊具有生長速度快、產(chǎn)羔率高、適應(yīng)性強、耐粗食等優(yōu)點，同時肉品質(zhì)優(yōu)良，膽固醇含量低，因此深受消費者和養(yǎng)殖戶的喜愛。關(guān)于簡州大耳羊出生后的生長發(fā)育已經(jīng)有較為系統(tǒng)的研究與報道[10]，而簡州大耳羊胚胎期和胎兒期的生長發(fā)育規(guī)律尚不明晰。本試驗以不同時期簡州大耳羊胎兒為材料，測量體重、體長、內(nèi)臟器官增重、肌肉組織增重以及肌纖維直徑，揭示簡州大耳羊胎兒期的生長發(fā)育規(guī)律，以期為簡州大耳羊進一步的選育和利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物飼養(yǎng)管理 簡州大耳羊母羊均來自簡州大耳羊原種場。在相同飼養(yǎng)管理條件下，從育種群中選取36 只24 月齡、體重（45.83±3.42）kg，第3 胎的成年母羊，采用孕激素法進行同期發(fā)情處理，對發(fā)情母羊進行人工授精配種，經(jīng)1 個情期觀察，若母羊未再次發(fā)情初步判斷已經(jīng)受孕，即日起開始計算妊娠期。妊娠母羊飼養(yǎng)管理標(biāo)準(zhǔn)一致，妊娠期間飼養(yǎng)水平按照《肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（ΝY/T 816—2004）執(zhí)行。所有操作都嚴(yán)格按照四川農(nóng)業(yè)大學(xué)實驗動物操作規(guī)范與福利管理委員會制定的“實驗動物操作規(guī)范”（川農(nóng)大校發(fā)〔2014〕18 號）進行。

1.2 測定指標(biāo)及方法

1.2.1 試驗設(shè)計 在簡州大耳羊母羊妊娠期第45、60、75、90、105、120、135 天分別剖腹取胎，記為G45 d～G135 d。以出生后3 d 的羔羊（記為B3 d）為對照觀察胎兒形態(tài)特征；并使用電子秤和卷尺測量體重、體長。取胎齡G60 d～G120 d 和B3 d 羔羊的心、肝、脾、肺、腎并稱重。取胎齡為G90 d～G135 d 和B3 d 羔羊的岡上肌、岡下肌、背最長肌、臀中肌、股四頭肌、半腱肌、內(nèi)收肌稱重，并制作半腱肌與背最長肌樣品的石蠟組織切片，采用HE 染色測定肌纖維面積。

1.2.2 半腱肌與背最長肌組織切片制作及HE 染色 將2個部位肌肉組織進行石蠟包埋，制成6 μm 的薄片，經(jīng)二甲苯脫蠟、乙醇梯度脫水、蒸餾水沖洗、蘇木精-伊紅染色、乙醇梯度脫洗、二甲苯透明等過程，用中性樹脂對切片進行封固。使用Ιmage-pro Plus 6.0 軟件計算，肌纖維的直徑是其橫截面積等效圓的直徑：D=2（S/π）0.5。

1.3 統(tǒng)計分析 數(shù)據(jù)采用Excel 2007 進行整理，進行單因素方差分析，并用Duncan's 法進行多重比較，使用軟件GraphPad Prism 8.0 制圖，P＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 不同時期胎羊的形態(tài)變化 如圖1 所示，G45 d 時胎兒皮膚光滑，初步成型；G45 d～G90 d 頭部、四肢及尾部日趨發(fā)育完善；G90 d 胎兒的耳朵發(fā)育成型，可明顯區(qū)分出胎兒的蹄；G105 d 時，胎兒體表覆蓋明顯的被毛，基本具備初生羔羊的特征。

圖1 簡州大耳羊胎兒外貌特征

2.2 不同時期胎羊體重與體長 如圖2 所示，體重的擬合曲線為Y=6.04x3.04，R2=0.99，呈冪函數(shù)增長；體長的擬合曲線為Y=6.63x－1.77，R2=0.99，呈直線增長，且兩者呈強相關(guān)。胎兒體重G45 d～90 d 差異不顯著，90 d 后體重生長逐漸加快（P＞0.05）。體長呈直線增長，各日齡階段差異均顯著，至135 日齡胎兒體長已接近初生羔羊，占B3 d 體長的91.90%。

圖2 胎兒體重、體長的變化

G105 d～G 120 d 是體重和體長快速增長的交叉時期。簡州大耳羊胎兒G120 d 體長占B3 d 體長的82.69%，而體重僅占B3 d 羔羊體重的58.52%，說明G120 d 前胎兒主要以骨骼增長為主。G105 d 后因體重增長比例大于體長增長比例，說明主要是肌肉、內(nèi)臟等生長發(fā)育。

2.3 不同時期胎羊內(nèi)臟器官的變化規(guī)律 如圖3 所示，胎兒心、肝、肺、腎增重規(guī)律相似，大致呈“S”型曲線增長，G105 d～G120 d 為增重高峰（P＜0.05）。脾的生長發(fā)育趨勢呈指數(shù)函數(shù)增長，G135 d 后增重顯著。據(jù)表1 可知，簡州大耳羊胎兒在G60 d 時的肝重、肺重分別占內(nèi)臟總重的37.58%、18.98%；至B3 d 胎兒肝重、肺重分別占內(nèi)臟總重的21.59%、15.44%，在測定的內(nèi)臟器官中，肝的絕對生長率一直最高，其次為肺。

表1 不同日齡階段內(nèi)臟器官重量百分比 %

圖3 內(nèi)臟器官的增重情況

2.4 不同時期胎羊肌肉組織的生長發(fā)育 據(jù)表2 可知，各部位肌肉重量在胎兒期不斷增加，相對生長率卻隨日齡增加而下降。岡上肌、岡下肌分別在G105 d～G120 d 和G90 d～G105 d 達(dá)生長高峰。背最長肌增重高峰在G90 d～G120 d，G120 d 背最長肌重量達(dá)B3 d 背最長肌重量的71.03%，且絕對生長率高于其他各部位肌肉，該時期的平均日增重為0.60 g/d。臀中肌、股四頭肌和內(nèi)收肌的增重規(guī)律相似。半腱肌的相對生長率在G90 d～G135 d 階段下降，G135 d 后加快。不同日齡階段肌肉組織左右兩邊重量差異不顯著。本試驗中，岡上肌、岡下肌、半腱肌和內(nèi)收肌的分化生長率均大于1，背最長肌、臀中肌和股四頭肌的分化生長率小于1，說明岡上肌、岡下肌、半腱肌和內(nèi)收肌較晚熟，而背最長肌、臀中肌和股四頭肌較早熟。

表2 不同日齡階段肌肉組織重量百分比及左右兩邊肌肉重量平均值

2.5 不同時期胎羊肌纖維的生長發(fā)育 如圖4 所示，為背最長肌與半腱肌纖維直徑變化，分別得到擬合曲線Y=1.50x+8.59，R2=0.98 和Y=1.44x+8.89，R2=0.97。背最長肌和半腱肌纖維大致呈直線型增長，G105 d～G120 d 增重顯著。如圖5 所示，背最長肌纖維在G45 d～G90 d 數(shù)目明顯增加；G45 d 肌纖維數(shù)量較少、分布較散，肌纖維之間空隙較大，肌束間的結(jié)締組織較多；自G75 d 開始肌纖維直徑開始增大，數(shù)量明顯增加。如圖6 所示，G105 d 時半腱肌纖維橫截面形狀不規(guī)則、直徑較短，且肌纖維之間的空隙較大；G120 d 肌纖維之間空隙減小至出生后3 d；而肌纖維數(shù)目自G105 d后沒有明顯變化。

圖4 背最長肌與半腱肌纖維直徑變化

圖5 不同日齡階段背最長肌組織切片

圖6 不同日齡半腱肌組織切片

3 討論

3.1 胎兒的皮毛發(fā)育及體重與體長的變化規(guī)律 本試驗中，簡州大耳羊胎兒在G105 d 時體表開始長出短小的有色被毛，初具初生羔羊的形態(tài)特征。而關(guān)中奶山羊胎兒的皮膚組織在胎齡18 周齡時體表開始出現(xiàn)被毛[10]；蘇博美利奴羊在胎齡105 d 時毛干開始露出體表[11]，可見不同品種被毛發(fā)育也存在差異，簡州大耳羊胎兒的被毛發(fā)育較早。

簡州大耳羊胎兒體重呈階段性增長，G105 d～120 d增重最為顯著。豫西脂尾羊在胎兒期80～150 d 體重增長速度明顯高于胚胎期（0～28 d）及胎兒前期（29～45 d）[12]；中美羊胎兒體重增長規(guī)律類似，但胎兒期90 d 至出生后3 d的平均日增重高于簡州大耳羊胎兒[13]，體尺與簡州大耳羊胎兒近似，說明兩品類羊只在生產(chǎn)性能上差異不大[14]。

3.2 胎兒各階段內(nèi)臟器官的發(fā)育規(guī)律 胎兒期內(nèi)臟器官的發(fā)育狀況是鑒定胎兒成熟程度的重要標(biāo)志。簡州大耳羊胎兒心、肝、肺、腎的發(fā)育較脾、胃更早，與遼寧絨山羊胎兒[15]和湖羊胎兒[16]的內(nèi)臟器官發(fā)育規(guī)律類似。

本研究結(jié)果顯示，簡州大耳羊胎兒的內(nèi)臟器官在不同日齡階段的發(fā)育是不平衡的，心、肝、肺在G105 d～G120 d 達(dá)生長高峰。腎的發(fā)育與肺類似，G120 d 以后增重明顯，此時胎兒腎臟脂肪逐漸形成，為出生后羔羊提供一定的熱量來抵御寒冷[17]。而脾臟增重呈指數(shù)型增長，對蒙古綿羊妊娠90 日齡后進行限飼，胎兒的脾臟重量顯著降低[18]，說明脾臟在妊娠后期生長旺盛，與簡州大耳羊胎兒脾臟生長發(fā)育規(guī)律類似。胃的發(fā)育前期慢，后期快，呈指數(shù)型增長，湖羊胃部發(fā)育也在胎齡130 d 后達(dá)到高峰[19]，說明在前期胃部主要進行分化發(fā)育，后期進行器官增重。

3.3 胎兒肌肉組織重量的發(fā)育規(guī)律 簡州大耳羊胎兒各個部位肌肉組織生長發(fā)育特異。7 個不同部位的肌肉中，背最長肌重量占肌肉組織重量的比例最高，其次為股四頭肌。各部位肌肉的增重在G105 d～G120 d 增重最快，說明在G105 d 以前肌肉組織主要進行肌肉纖維的分化，G105 d 以后主要是肌纖維的增粗與生長，與小尾寒羊等肌肉發(fā)育規(guī)律相同[20-21]。

以不同代謝方式進行分類，通常將肌肉纖維分為有氧代謝型肌和酵解代謝型。有氧代謝型肌纖維直徑較小，收縮緩慢但持久，也叫慢肌纖維；酵解代謝型纖維直徑更大，收縮強度大，但不持久，因此也叫快肌纖維。背最長肌和半腱肌均為混合型纖維，但前者主要由酵解型肌纖維組成，而后者以有氧代謝型肌纖維為主。背最長肌與半腱肌的肌纖維直徑自G90 d 開始逐漸生長，但相同日齡胎兒的半腱肌纖維直徑低于烏珠穆沁綿羊[22]。簡州大耳羊胎兒肌纖維直徑在G105d～120 d 肌纖維進入快速的增長期；中美胎羊在35～55 d 形成初級肌纖維，在85 d 后肌纖維直徑增加[23]。由此表明，肌纖維的發(fā)育在胎兒早期先進行數(shù)量增加，后期進行肌纖維的增粗和伸長。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果顯示，簡州大耳羊胎兒期體重呈階段性增長，體長的增長相對平緩；內(nèi)臟器官在不同日齡階段的生長發(fā)育不平衡，心臟、肝臟、肺臟、腎臟更早熟；肌肉組織增重的高峰期在G90 d～G120 d，且背最長肌的生長發(fā)育最為旺盛。因此G105 d～G120 d 是簡州大耳羊胎兒的體重體尺增長、內(nèi)臟器官發(fā)育及肌肉的增重的關(guān)鍵時期，在此階段應(yīng)加強對妊娠母羊的飼養(yǎng)管理。