沙苑子苷A對(duì)L02細(xì)胞脂肪變性模型的降脂作用和機(jī)制探討

孟靚 魏益謙 高晶 李麗 邵紫萱 孟智睿 高學(xué)敏 王景霞

由于遺傳因素、飲食習(xí)慣、生活方式和年齡、絕經(jīng)、疾病及藥物等原因引起的血清膽固醇或甘油三酯的水平過(guò)高或高密度脂蛋白水平過(guò)低，稱為血脂代謝異常[1]。脂質(zhì)代謝異常與許多疾病都密切相關(guān)，如動(dòng)脈粥樣硬化[2]、肥胖癥[3]、胰島素抵抗[4]、高脂血癥[5]、脂肪肝[6]等，因此對(duì)血脂代謝異常的防治有著極為重要的意義。沙苑子(SemenAstragaliComplanati)為豆科植物扁莖黃芪(AstragaluscomplanatusR.Br.)的干燥成熟種子，是中醫(yī)傳統(tǒng)補(bǔ)陽(yáng)藥，功能補(bǔ)腎助陽(yáng)、滋補(bǔ)腎精[7]。藥理研究顯示[8-10]，沙苑子的總黃酮有明顯的調(diào)脂作用，能夠降低血清甘油三酯(triglyceride，TG)、膽固醇(cholesterol，TC)水平，沙苑子苷A是含量較高的黃酮類成分之一[11]，本實(shí)驗(yàn)選擇沙苑子苷A為研究對(duì)象，采用游離脂肪酸(free fatty acid，F(xiàn)FA)誘導(dǎo)的肝脂肪變L02細(xì)胞模型，觀察沙苑子苷A對(duì)肝脂質(zhì)異常的調(diào)節(jié)作用，并針對(duì)TG的合成途徑深入探討沙苑子苷A的降脂機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞

正常人肝細(xì)胞株L02，購(gòu)于武漢普諾賽生命科技有限公司。

1.2 藥物與試劑

沙苑子苷A(美國(guó)Apexbio公司，批號(hào)：A8425)，高糖DMEM培養(yǎng)基(hyclone，批號(hào)：sh30284.01)、胰蛋白酶-EDTA消化液(批號(hào)：T4299)、青鏈霉素(批號(hào)：V900929)，牛血清白蛋白(批號(hào)：V900933)、棕櫚酸鈉(Sodium Palmitate，PA，批號(hào)：P9575)、油酸鈉(Sodium Oleate，OA，批號(hào)：07501)、二甲基亞礬(Dimethyl sulfoxide，DMSO，批號(hào)：C6295)、蛋白裂解液(RIPA，批號(hào)：r0278)均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，胎牛血清(美國(guó)Gibco公司，批號(hào)：10099-141)、CCK8試劑盒(日本同仁化學(xué)研究所，批號(hào)：CK04)，油紅O細(xì)胞染色試劑(北京索萊寶生物公司，批號(hào)：g1262)，BCA法蛋白質(zhì)定量檢測(cè)試劑盒(凱基生物公司，批號(hào)：KGP902)，TG試劑盒(批號(hào)：A110-1-1)、TC試劑盒(批號(hào)：A111-1-1)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(glutamic pyruvic transaminase，ALT)試劑盒(批號(hào)：C00902-1)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic oxaloacetic transaminase，AST)試劑盒(批號(hào)：C010-2-1)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)試劑盒(批號(hào)：A020-2-2)、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)試劑盒(批號(hào)：A003-1-2)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)試劑盒(批號(hào)：A001-3-2)均來(lái)源于南京建成生物工程研究所；實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測(cè)主要實(shí)驗(yàn)材料：引物(北京睿博興科生物技術(shù)有限公司合成)，Trizol(美國(guó)Invitrogen公司，批號(hào)：15596018)，RNase Inhibitor(批號(hào)：eo0382)，RNase-free H2O(批號(hào)：en0521)均購(gòu)自美國(guó)Fermentas(MBI)公司，轉(zhuǎn)錄酶、qPCR Mix(APEXBIO，批號(hào)：k1070-5000)，固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c(sterol regulatory element-binding protein 1C，SREBP-1c)抗體(批號(hào)：ab133125)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase，F(xiàn)AS)抗體(批號(hào)：EPR5700)、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisome proliferator activated receptor α，PPARα)抗體(批號(hào)：epr18516)、肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶1A(carnitine palmitoyl transferase 1A，CPT-1A)抗體(批號(hào)：ab189182)、抗兔IgG HRP辣根過(guò)氧化物酶(批號(hào)：ab6721)均購(gòu)自英國(guó)Abcam公司。

1.3 主要儀器與設(shè)備

超凈工作臺(tái)(青島海爾股份有限公司)，二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)，高速低溫離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)，倒置顯微鏡(德國(guó)Leica)，全自動(dòng)生化分析儀(Rayto)，酶標(biāo)儀(Thermo)，7500時(shí)實(shí)定量PCR儀(美國(guó)BIO-RAD公司)，電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀(美國(guó)Bio-Rad) ，凝膠成像系統(tǒng)(美國(guó) UVP)。

1.4 脂肪變肝細(xì)胞模型的建立

1.4.1 CCK8檢測(cè)確定FFA濃度范圍 將L02細(xì)胞鋪于96孔板中進(jìn)行培養(yǎng)，待貼壁后，分別加入不同濃度的FFA(OA∶PA為2∶1)，誘導(dǎo)24小時(shí)，用CCK8試劑盒測(cè)定細(xì)胞增殖情況，測(cè)出OD值，篩選出FFA濃度范圍。

1.4.2 油紅O染色的細(xì)胞形態(tài)觀察 油紅O染色可以對(duì)肝細(xì)胞內(nèi)的脂滴進(jìn)行定性觀察，以0.8×105/mL的密度鋪于6孔板中，每孔2 mL，24小時(shí)貼壁后加入不同劑量的FFA(OA∶PA為2∶1)作用于L02細(xì)胞，培養(yǎng)24小時(shí)后，進(jìn)行染色處理，PBS漂洗2～3遍，4%多聚甲醛固定，光鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴的數(shù)量和大小。

1.4.3 細(xì)胞內(nèi)TG的檢測(cè) 將L02細(xì)胞以1×105/mL種植于24孔板，每孔1 mL，分為對(duì)照組和模型組，每組3孔。待細(xì)胞貼壁后，加入不同濃度的FFA(OA∶PA為2∶1)干預(yù)，培養(yǎng)24小時(shí)后，檢測(cè)TG含量。

1.5 沙苑子苷A對(duì)L02 細(xì)胞活力的影響

稱取沙苑子苷 A 溶于 DMSO 中，獲得沙苑子苷 A 儲(chǔ)備液。分裝后放置于-20℃冰箱保存。臨用前用完全培養(yǎng)基稀釋，得到沙苑子苷 A 溶液。經(jīng)過(guò)直徑為 0.22 μm 的一次性針頭濾器，至容積為 15 mL 的經(jīng)過(guò)滅菌處理的離心管中。沙苑子苷 A 溶液終濃度為 1×10-6mM，1×10-5mM，1×10-4mM，1×10-3mM，1×10-2mM，1×10-1mM，1 mM。沙苑子苷 A 溶液中 DMSO 終濃度小于等于0.1%(V/V)。加入貼壁生長(zhǎng)的 L02 細(xì)胞中，每個(gè)濃度設(shè)置 3 個(gè)重復(fù)孔。孵育 24 小時(shí)，隨后每孔加入 10μL 的 CCK8 試劑，避光室溫反應(yīng) 30 分鐘。使用酶標(biāo)儀 520 nm 波長(zhǎng)檢測(cè)其 OD 值，計(jì)算細(xì)胞活力百分率。

1.6 分組與給藥

用完全培養(yǎng)基(含10%胎牛血清的高糖DMEM)傳代培養(yǎng)正常人肝細(xì)胞株L02，待細(xì)胞呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)是即開始實(shí)驗(yàn)。以0.5×105/mL的密度鋪板種植，將體外培養(yǎng)的肝細(xì)胞分為對(duì)照組(Control)、模型組(Model)、沙苑子低、中、高劑量組(S-Low 25 μM、S-Middle 50 μM、S-High 100 μM)。對(duì)照組：加入完全培養(yǎng)基；模型組：待細(xì)胞貼壁后，加入1 mM FFA(1.4.1中確定的造模濃度)孵育24 小時(shí)；沙苑子低、中、高劑量組：細(xì)胞貼壁后，沙苑子低、中、高劑量先預(yù)處理24小時(shí)，再加入1 mM FFA干預(yù)24小時(shí)。然后測(cè)定相關(guān)指標(biāo)。

1.7 指標(biāo)檢測(cè)

1.7.1 L02細(xì)胞TG、TC、ALT、AST、LDH、MDA含量，SOD活性水平的測(cè)定 收集各組細(xì)胞，PBS沖洗并1000 r/min離心2～3遍，酶標(biāo)儀測(cè)出相應(yīng)OD值，同時(shí)用BCA蛋白濃度試劑盒檢測(cè)蛋白含量。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書，應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。

1.7.2 L02細(xì)胞炎性因子IL-6、TNF-α的測(cè)定 收集各組細(xì)胞，ELISA法檢測(cè)白細(xì)胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)的含量。

1.7.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)SREBP-1c、FAS、PPARα、CTP-1A mRNA表達(dá) 提取各組細(xì)胞總RNA，根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書操作。用生物分光光度計(jì)測(cè)定 RNA濃度和純度。取 2 μg RNA 樣本，用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成 cDNA，并以此為模板進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)。逆轉(zhuǎn)錄和 PCR反應(yīng)條件按照試劑盒說(shuō)明書設(shè)置。PCR進(jìn)行35～40個(gè)循環(huán)：預(yù)變性 95℃，2分鐘；變性95 ℃，30秒；58 ℃退火，30秒 ；72 ℃延伸30秒。以β-actin 為內(nèi)參，所得 CT 值按照2-△△CT的方法進(jìn)行均一化處理后再進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。引物序列見表1。

表1 引物序列

1.7.4 蛋白免疫印跡法檢測(cè)SREBP-1c、FAS、PPARα、CTP-1A蛋白表達(dá) 收集各組細(xì)胞，RIPA裂解液裂解細(xì)胞，5000 rpm 離心去除沉淀，BCA 法測(cè)定蛋白含量，總蛋白50 μg上樣，經(jīng)10% SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，電轉(zhuǎn)移至 NC膜上，用含5%脫脂奶粉的TBST封閉后加入1∶1000稀釋的相應(yīng)的一抗，4℃搖床孵育過(guò)夜，TBST洗3次，加入1∶2000稀釋的辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗，室溫孵育1小時(shí)，TBST洗3次后，用Western blot熒光檢測(cè)試劑盒顯影、定影。結(jié)果用圖象分析儀分析。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 L02細(xì)胞脂肪變模型的建立

2.1.1 CCK8法檢測(cè)不同濃度FFA對(duì)L02細(xì)胞活性的影響 分別將0.25 mM、0.5 mM、0.75 mM、1 mM、1.5 mM不同濃度FFA干預(yù)L02細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)后觀察細(xì)胞存活狀況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，F(xiàn)FA濃度在1 mM以下時(shí)，細(xì)胞死亡漂浮較少。CCK8結(jié)果顯示，當(dāng)FFA濃度超過(guò)1mM是吸光度顯著降低，細(xì)胞增殖影響較大(見表2)。

表2 CCK8檢測(cè)不同濃度的FFA對(duì)L02細(xì)胞活性的影響

2.1.2 油紅O染色觀察不同濃度FFA對(duì)L02細(xì)胞內(nèi)脂滴形成的影響 光鏡下觀察可見，對(duì)照組細(xì)胞邊緣完整，胞漿豐富，細(xì)胞內(nèi)未見紅色脂滴，實(shí)驗(yàn)組隨著游離脂肪酸造模濃度的增加，細(xì)胞內(nèi)脂滴呈遞增趨勢(shì)，當(dāng)FFA濃度大于1mM時(shí)，細(xì)胞數(shù)量明顯減少(見圖1)。

注：A：對(duì)照組；B：0.25 mM劑量組；C：0.50 mM劑量組；D：0.75 mM劑量組；E：1.00 mM劑量組；F：1.5 mM劑量組圖1 油紅O染色法觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴(油紅O染色，×200)

2.1.3 不同濃度FFA對(duì)L02細(xì)胞TG含量的影響 當(dāng)FFA作用濃度為1 mM時(shí)，細(xì)胞活性及增殖不受大的影響，且在該作用濃度時(shí)，細(xì)胞內(nèi)脂滴形成最多、甘油三酯含量最高。而當(dāng)FFA作用濃度高于1 mM時(shí)，細(xì)胞的活性與增殖均受到很大影響，且細(xì)胞內(nèi)脂滴與脂質(zhì)含量減少較多，因此，選擇1 mM作為FFA誘導(dǎo)造模的最佳濃度(見表3)。

表3 不同濃度的FFA對(duì)L02甘油三酯水平的影響

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，當(dāng)FFA作用濃度為1 mM時(shí)，細(xì)胞活性及增殖不受大的影響，且在該作用濃度時(shí)，細(xì)胞內(nèi)脂滴形成最多、甘油三酯含量最高。而當(dāng)FFA作用濃度高于1 mM時(shí)，細(xì)胞的活性與增殖均受到很大影響，且細(xì)胞內(nèi)脂滴與脂質(zhì)含量減少較多，因此，選擇1 mM FFA誘導(dǎo)24小時(shí)造模成功。

2.2 沙苑子苷A對(duì)正常L02細(xì)胞活性的影響

CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示，當(dāng)沙苑子苷 A 濃度很小時(shí)，低濃度的沙苑子苷 A 對(duì) L02 細(xì)胞有增強(qiáng)活性的作用，隨著沙苑子苷 A 濃度的升高，細(xì)胞活力逐漸與空白對(duì)照組相近(見表4)。

表4 CCK8檢測(cè)不同濃度沙苑子苷A對(duì)L02細(xì)胞活性的影響

2.3 沙苑子苷A對(duì)脂肪變L02細(xì)胞TG、TC、ALT、AST、LDH的影響

與空白對(duì)照組比較，模型組L02細(xì)胞TG、TC、ALT、AST、LDH含量均明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，沙苑子低、中、高劑量組L02細(xì)胞TG、ALT、AST、LDH含量均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，沙苑子苷A中、高劑量組L02細(xì)胞TC含量均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表5)。

表5 沙苑子苷A對(duì)L02細(xì)胞內(nèi)TG、TC、ALT、AST、LDH含量的影響

2.4 沙苑子苷A對(duì)脂肪變L02細(xì)胞MDA、SOD、IL-6、TNF-α水平的影響

與空白對(duì)照組比較，模型組L02細(xì)胞MDA、IL-6、TNF-α含量明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，沙苑子苷A中、高劑量組L02細(xì)胞MDA含量均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，沙苑子苷A低、中、高劑量組L02細(xì)胞IL-6、TNF-α含量均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與空白對(duì)照組比較，模型組L02細(xì)胞SOD活力水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；沙苑子低、中、高劑量組L02細(xì)胞SOD活力水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表6)。

表6 沙苑子苷A對(duì)L02細(xì)胞內(nèi)MDA、SOD、IL-6、TNF-α含量的影響

2.5 沙苑子苷A對(duì)脂肪變L02細(xì)胞SPEBP-1c、FAS、PPARα、CPT-1A mRNA表達(dá)水平的影響

與對(duì)照組比較，模型組L02細(xì)胞SPEBP-1c、FAS mRNA的表達(dá)均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，PPARα mRNA的表達(dá)有升高趨勢(shì)，但是無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CTP-1A mRNA的表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，沙苑子苷A低、中、高劑量L02細(xì)胞FAS、SPEBP-1c mRNA的表達(dá)均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，沙苑子中、高劑量組L02細(xì)胞PPARα、CPT-1A mRNA的表達(dá)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表7)。

表7 沙苑子苷A對(duì)L02細(xì)胞SPEBP-1c、FAS、PPARα、CTP-1α mRNA的影響

2.6 沙苑子苷A對(duì)脂肪變L02細(xì)胞SREBP-1c、FAS、PPARα、CPT-1A蛋白表達(dá)水平的影響

與對(duì)照組比較，模型組L02細(xì)胞SREBP-1c、FAS蛋白表達(dá)均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，PPARα蛋白的表達(dá)有升高趨勢(shì)，但是無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CPT-1A蛋白的表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，沙苑子苷A低、中、高劑量L02細(xì)胞SREBP-1c、FAS蛋白的表達(dá)均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，沙苑子中、高劑量組L02細(xì)胞PPARα、CPT-1A蛋白的表達(dá)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表8，圖2)。

表8 沙苑子苷A對(duì)L02細(xì)胞SREBP-1c、FAS、PPARα、CPT-1A蛋白的影響

注：A:空白對(duì)照組；B:1mM游離脂肪酸；C:沙苑子苷A低劑量組；D:沙苑子苷A中劑量組；E:沙苑子苷A高劑量組圖2 甘油三酯代謝相關(guān)蛋白免疫印跡圖

3 討論

目前，西醫(yī)常用的調(diào)脂藥有他汀類、貝特類、膽酸螯合樹脂類、煙酸類及其衍生物等，但都有一定的胃腸道不良反應(yīng)、頭痛或者肌肉疼痛，嚴(yán)重的可出現(xiàn)肝功能損害或橫紋肌溶解癥[12]。黃酮類化合物是一種廣泛存在于自然界中的天然有機(jī)化合物，具有較高的安全性和廣泛的生物活性[13]，越來(lái)越多的研究顯示黃酮類化合物在調(diào)節(jié)血脂和預(yù)防冠心病方面發(fā)揮了重要作用[14]，如：羅布麻葉總黃酮能減輕高血脂導(dǎo)致的血管內(nèi)皮損傷和改善體內(nèi)氧化應(yīng)激水平[15]，山楂葉總黃酮可調(diào)控法尼醇受體(farnesoid X receptor，F(xiàn)XR)/ SREBP-1c通路改善非酒精性脂肪肝大鼠肝臟脂質(zhì)代謝紊亂[16]，還有沙棘總黃酮[17]，銀杏葉總黃酮[18]等等，具有良好的開發(fā)和應(yīng)用前景。沙苑子黃酮是沙苑子中含量較高的一類化合物，目前已經(jīng)從沙苑子中提取到超過(guò)16 種的黃酮類化合物，其中沙苑子苷A是含量較高的黃酮類成分之一[11,19]。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)沙苑子總黃酮的藥理作用研究較多，但是對(duì)單體成分的藥理研究還未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用FFA誘導(dǎo) L02 構(gòu)建肝細(xì)胞脂肪變模型，觀察沙苑子苷A對(duì)脂肪變L02細(xì)胞的影響，探討其降脂作用及分子機(jī)制。

肝臟脂肪變的細(xì)胞模型較高脂飼養(yǎng)建立的動(dòng)物模型個(gè)體差異較小，可較好的對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行把控，其中油酸和棕櫚酸以2∶1比例而成的FFA混合物建立細(xì)胞脂肪變模型更符合人體脂肪變的病理過(guò)程[20]。本實(shí)驗(yàn)采用CCK8法測(cè)定了不同濃度FFA對(duì)細(xì)胞活性的影響，同時(shí)結(jié)合油紅O染色光鏡下細(xì)胞內(nèi)脂滴形成情況和定量檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TG水平，最終確定1 mM FFA誘導(dǎo)24小時(shí)可成功造模。沙苑子苷A干預(yù)治療后，能顯著降低L02細(xì)胞TG、TC、ALT、AST、LDH含量，同時(shí)降低MDA含量、提高SOD活性，降低IL-6、TNF-α的水平，說(shuō)明沙苑子苷A能減輕脂毒性造成的肝細(xì)胞損傷，緩解氧化應(yīng)激狀態(tài)和炎癥反應(yīng)，提示沙苑子苷A是沙苑子降脂保肝的有效單體成分。

研究表明，TG合成途徑中兩個(gè)重要的核受體轉(zhuǎn)錄因子SPEBP-1c和PPARα對(duì)其起關(guān)鍵作用。SREBP-1c是脂肪酸和甘油三酯合成中的關(guān)鍵分解因子，主要參與肝臟脂肪酸合成和脂肪前體細(xì)胞的分化，其過(guò)表達(dá)會(huì)引起與脂質(zhì)異常相關(guān)的疾病如糖尿病、高脂血癥、代謝綜合征的發(fā)生[21-22]，可通過(guò)調(diào)節(jié)其下游靶基因FAS、ACC、GPAT的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)肝臟中TG的合成[23]。其中乙酰輔酶A羧化酶(ACC)催化乙酰輔酶A形成丙二酰輔酶A，合成長(zhǎng)鏈脂肪酸前體，脂肪酸合成酶(FAS)是一種多功能復(fù)合酶，催化乙酰輔酶A和丙二酰輔酶A，參與長(zhǎng)鏈脂肪酸生產(chǎn)的內(nèi)源性蛋白酶[24]，在合成脂肪酸方面發(fā)揮著關(guān)鍵的作用[25]。GPAT是TG生物合成的限速酶[26]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，給予沙苑子苷A預(yù)處理，模型細(xì)胞SREBP-1c、FAS mRNA和蛋白的表達(dá)量均顯著，表明沙苑子苷A可通過(guò)抑制肝臟SREBP-1c的表達(dá)，下調(diào)肝臟FAS，抑制肝臟中TG的合成。

PPARα是核受體超家族的成員之一，可顯著改善血脂異常和減輕動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)疾病的風(fēng)險(xiǎn)[27]。PPARα激活后與配體形成異二聚體[27]，可調(diào)控與脂質(zhì)代謝相關(guān)的多種基因編碼的蛋白質(zhì)，如脂肪酸轉(zhuǎn)位酶、乙酰輔酶A氧化酶等[28]，從而介導(dǎo)TG和脂肪酸的代謝分解。CPT-1A是線粒體內(nèi)脂肪酸β氧化途徑的限速酶[29]，其作用是將長(zhǎng)鏈脂肪酸從胞漿轉(zhuǎn)運(yùn)如線粒體內(nèi)部，進(jìn)行β氧化[30]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，給予沙苑子苷A預(yù)處理，模型細(xì)胞PPARα、CPT-1A mRNA和蛋白表達(dá)量均顯著升高，說(shuō)明沙苑子苷A通過(guò)上調(diào)肝臟PPARα的表達(dá)水平，提高CPT-1A的活性，加速了脂肪酸的β氧化分解，進(jìn)而使TG的合成減少。

綜上所述，沙苑子苷A對(duì)脂肪變性L02肝細(xì)胞模型具有良好的降脂和保肝作用，其降脂機(jī)制可能是沙苑子苷A通過(guò)抑制肝細(xì)胞SREBP-1c的表達(dá)，降低TG合成途徑中限速酶FAS水平，降低TG合成速度；同時(shí)上調(diào)PPARα蛋白表達(dá)，提高脂肪酸β氧化途徑中CPT-1A水平，加速脂肪酸的β氧化，減少TG合成，從兩方面共同作用從而達(dá)到降脂和保肝效果。