免疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)直腸癌四種DNA錯(cuò)配修復(fù)蛋白表達(dá)缺失對(duì)判斷腫瘤微衛(wèi)星狀態(tài)的價(jià)值

張銀

摘 ?要：目的 ?分析免疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)直腸癌四種DNA錯(cuò)配修復(fù)蛋白表達(dá)缺失在腫瘤微衛(wèi)星狀態(tài)判斷中的價(jià)值。方法 ?選擇云南省紅河州第三人民醫(yī)院2018年9月～2019年9月收治的37例結(jié)直腸癌患者，對(duì)其病灶組織行切片處理，所有患者先行免疫組織化學(xué)法檢測(cè)，后行PCR-毛細(xì)管電泳法檢測(cè)，觀察兩種方式的診斷結(jié)果。結(jié)果 ?常規(guī)切片免疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果：31例患者四種MMR蛋白呈現(xiàn)出彌漫強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，5例患者至少存在一種蛋白陰性表達(dá)，1例患者至少存在一種蛋白局灶陽(yáng)性表達(dá)。組織芯片PCR-毛細(xì)管電泳法檢測(cè)結(jié)果：30例患者四種MMR蛋白呈現(xiàn)出彌漫強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，6例患者至少存在一種蛋白陰性表達(dá)，1例患者至少存在一種蛋白局灶陽(yáng)性表達(dá)。兩種檢測(cè)方式準(zhǔn)確度、敏感度及特異度未有明顯的組間差異（P>0.05）。結(jié)論 ?通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)直腸癌四種DNA蛋白表達(dá)情況，在結(jié)直腸癌腫瘤微衛(wèi)星狀態(tài)的預(yù)測(cè)中敏感度和特異度較高，且具有一定的經(jīng)濟(jì)性，可有效篩選出結(jié)直腸癌，其較高的準(zhǔn)確性能對(duì)優(yōu)化治療方案有關(guān)鍵作用。

關(guān)鍵詞：腫瘤微衛(wèi)星狀態(tài);免疫組織化學(xué)法;DNA錯(cuò)配修復(fù);結(jié)直腸癌;蛋白表達(dá)

中圖分類號(hào)：R730.23 ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ?文章編號(hào)：1009-8011（2021）-4-0040-03

結(jié)直腸癌是消化系統(tǒng)癌癥，其中DNA錯(cuò)配修復(fù)蛋白表達(dá)缺失引起微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI）導(dǎo)致的癌癥區(qū)別于其他癌癥，其發(fā)生部位、組織形態(tài)有較強(qiáng)的特殊性，需采取針對(duì)性的治療措施及預(yù)后護(hù)理，否則會(huì)影響恢復(fù)效果，故早診斷尤為重要[1]。近年來(lái)，MSI發(fā)病機(jī)制較為明確，PCR能對(duì)結(jié)直腸癌分子進(jìn)行鑒別，但準(zhǔn)確性較低，而免疫組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果具有較高的準(zhǔn)確率，且有機(jī)體損傷小、操作方便、結(jié)果獲取速度快的優(yōu)勢(shì)，可應(yīng)用于疾病的篩查診斷。故本研究選擇了我院2018年9月～2019年9月收治的37例直腸癌患者，旨在分析免疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)直腸癌四種DNA錯(cuò)配修復(fù)蛋白表達(dá)缺失在腫瘤微衛(wèi)星狀態(tài)判斷中的價(jià)值。

1 ?資料與方法

1.1 ?一般資料

選擇云南省紅河州第三人民醫(yī)院于2018年9月～2019年9月收治的37例結(jié)直腸癌患者，所有患者先行免疫組織化學(xué)法檢測(cè)，后行毛細(xì)管電泳法檢測(cè)，觀察兩種方式的診斷結(jié)果。在37例患者中，有男性21例，女性16例;年齡36～74歲，平均年齡為（58.79±4.32）歲。本研究獲得倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 ?納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者經(jīng)病理學(xué)確診為結(jié)直腸癌，未合并其他腫瘤或癌癥;②患者在同意書上簽字;③對(duì)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)高度依從，精神狀態(tài)較好。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①一般資料不完整者;②有毛細(xì)管電泳法檢測(cè)禁忌者;③預(yù)計(jì)生存期不足3個(gè)月者。

1.3 ?方法

將患者病灶組織行切片處理，通過甲醛（濃度為4%）固定標(biāo)本，行石蠟包埋、HE染色處理。所有患者先行免疫組織化學(xué)法檢測(cè)，后行毛細(xì)管電泳法檢測(cè)。

1.4 ?觀察指標(biāo)

觀察兩種方式的診斷結(jié)果。觀察兩組方式的特異度、敏感度、準(zhǔn)確度。

1.5 ?統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)以SPSS21.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料在數(shù)據(jù)中用（x±s）表示，使用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料在數(shù)據(jù)中用[n（%）]表示，使用χ2 檢驗(yàn)，P<0.05時(shí)表示研究有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 ?結(jié)果

2.1 ?檢測(cè)結(jié)果分析

37例結(jié)直腸癌常規(guī)切片免疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果：31例患者四種MMR蛋白呈現(xiàn)出彌漫強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，5例患者至少存在一種蛋白陰性表達(dá)，1例患者至少存在一種蛋白局灶陽(yáng)性表達(dá)。其中缺失MLH1和PMS2的患者共28例，缺失MSH2和MSH6的患者共5例，單獨(dú)缺失PMS2的患者共2例，單獨(dú)缺失MSH6的共1例，單獨(dú)缺失MSH2的共1例。

37例結(jié)直腸癌組織芯片PCR-毛細(xì)管電泳法檢測(cè)結(jié)果：30例患者四種MMR蛋白呈現(xiàn)出彌漫強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，6例患者至少存在一種蛋白陰性表達(dá)，1例患者至少存在一種蛋白局灶陽(yáng)性表達(dá)。其中缺失MLH1和PMS2的患者共27例，缺失MSH2和MSH6的患者共4例，單獨(dú)缺失PMS2的患者共3例，單獨(dú)缺失MSH6的共2例，單獨(dú)缺失MSH2的共1例。

2.2 ?分析兩種方式檢驗(yàn)準(zhǔn)確度、敏感度及特異度

兩種檢測(cè)方式準(zhǔn)確度、敏感度及特異度所獲取的結(jié)果數(shù)據(jù)，未有明顯的組間差異（P>0.05）。見表1。

3 ?討論

衛(wèi)星是生物基因組中重復(fù)串聯(lián)系列，易出現(xiàn)DNA復(fù)制錯(cuò)誤情況，需通過DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)進(jìn)行糾正，當(dāng)四種DNA基因出現(xiàn)體細(xì)胞MLH1啟動(dòng)過度甲基化或胚系突變時(shí)，不能再進(jìn)行微衛(wèi)星復(fù)制錯(cuò)誤糾正[2]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，MSI腫瘤細(xì)胞核仍有表達(dá)，但其與內(nèi)對(duì)照細(xì)胞相比仍舊較弱，在內(nèi)對(duì)照細(xì)胞良好著色的條件下，多數(shù)細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度較弱可被提示為MSI腫瘤，在此之后需再次進(jìn)行PCR-毛細(xì)管電泳法進(jìn)行腫瘤MSI狀態(tài)的檢測(cè)[3]。由于IHC染色結(jié)果影響因素較多，包括預(yù)處理、組織固定、抗體克隆號(hào)不同等，故在判讀結(jié)果時(shí)應(yīng)關(guān)注內(nèi)對(duì)照細(xì)胞核的著色狀態(tài)。此外在常規(guī)切片染色結(jié)果的觀察中，若腫瘤組織塊中央無(wú)著色或著色強(qiáng)度較弱，且對(duì)照細(xì)胞核著色度較弱，可推測(cè)其原因是組織脫水處理不足或固定不正確等[4]。所以在判讀常規(guī)切片結(jié)果時(shí)，需將內(nèi)對(duì)照陰性區(qū)域避開，繼而準(zhǔn)確判讀出MMR蛋白表達(dá)情況，若病例不可判讀，其原因可能是內(nèi)對(duì)照細(xì)胞核未成功著色，或前期處理較差，要求在檢測(cè)過程中嚴(yán)格遵循程序，把控各個(gè)環(huán)節(jié)[5]。此外在腫瘤MSI狀態(tài)預(yù)測(cè)中，小塊組織的MMR蛋白IHC檢測(cè)結(jié)果具有一定的參考意義，不管是采取新輔助治療，亦或是晚期結(jié)直腸癌患者均可采用活檢檢測(cè)MMR蛋白IHC，從而推斷出腫瘤MSI的狀態(tài)[6]。

本研究中，常規(guī)切片免疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果：31例患者四種MMR蛋白呈現(xiàn)出彌漫強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，5例患者至少存在一種蛋白陰性表達(dá)，1例患者至少存在一種蛋白局灶陽(yáng)性表達(dá)。組織芯片PCR-毛細(xì)管電泳法檢測(cè)結(jié)果：30例患者四種MMR蛋白呈現(xiàn)出彌漫強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，6例患者至少存在一種蛋白陰性表達(dá)，1例患者至少存在一種蛋白局灶陽(yáng)性表達(dá)。兩種檢測(cè)方式各指標(biāo)組間差異?。≒>0.05）?？梢妰山M檢測(cè)方式均能實(shí)現(xiàn)優(yōu)異的檢出效果，且具有較高的檢出準(zhǔn)確度、敏感度及特異度，應(yīng)用價(jià)值顯著。

綜上所述，通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)直腸癌四種DNA蛋白表達(dá)情況的檢測(cè)價(jià)值高。

參考文獻(xiàn)

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