呂警

摘要：采用QuEChERS方法提取和凈化雞肉樣品，建立測定8種獸藥殘留的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）檢測方法。樣品經(jīng)乙腈和緩沖鹽包SBEQ-CA8802-B提取，提取液經(jīng)凈化管凈化后取上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸干，溶解過膜，在電噴霧離子源多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式下進(jìn)行測定，基質(zhì)外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，8種喹諾酮類藥物的線性范圍為1～100μg/kg，線性相關(guān)系數(shù)r均大于0.996，定量檢出限為0.05～0.10μg/kg，10 ?g/kg添加范圍的平均回收率為89.7%～97.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.87%～11.7%。該方法操作簡單、凈化效果好、靈敏度高，能夠快速有效地檢測雞肉中的喹諾酮藥物殘留。

關(guān)鍵詞：雞肉;喹諾酮殘留;液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;外標(biāo)法定量

喹諾酮類藥物又稱吡喹酮酸類化合物，具有良好的抗菌性，適用于家畜養(yǎng)殖行業(yè)。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在日常使用中，一些家畜易出現(xiàn)多種類型的不良反應(yīng)，最嚴(yán)重的是胃腸道疾病。目前，檢測雞肉中喹諾酮類藥物最常見的方式是微生物法、酶聯(lián)免疫法和放射免疫法，最具有普遍應(yīng)用價值的是液相色譜法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。本文用QuEChERS結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對雞肉中喹諾酮類殘留的檢測工作進(jìn)行了詳細(xì)探究，為相關(guān)行業(yè)人士提供參考。

1. 材料與方法

1.1 試劑與儀器

Milli-Q 高純水;氧氟沙星;洛美沙星等;液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀等。

1.2 樣品前處理

上述提取液按先后順序依次加入到凈化管中，渦旋混合5min，5000-10000r/min離心5min。取出凈化管中所有上清液，40℃減壓蒸發(fā)至近干。加入1mL甲醇-水溶液（1∶1）溶解，渦旋混合1min，過0.22?m濾膜，供液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定。

1.3 儀器條件

1.3.1 液相色譜條件

沃特世ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（2.1mm×50mm，1.7μm），進(jìn)樣量10μL，柱溫35℃，流速為0.3mL/min，流動相A為0.1%甲酸水溶液，B為甲醇。梯度洗脫程序見表1。

1.3.2 質(zhì)譜條件

ESI離子源;正離子掃描;毛細(xì)管電壓3.2kV;離子源溫度110℃;去溶劑氣溫度400℃;去溶劑氣流量（氮氣）650L/h;氣簾氣流量50L/h;多重反應(yīng)監(jiān)測模式掃描（MRM）。

2. 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜分析條件的優(yōu)化

參與本次檢測活動的工作人員，前后開展了多次檢測流程，期間完全按照行業(yè)操作標(biāo)準(zhǔn)實時處理，最終獲取了8種喹諾酮類獸藥的最優(yōu)質(zhì)譜條件。具體見表2。

2.2 基質(zhì)效應(yīng)

雞肉的基質(zhì)物質(zhì)較復(fù)雜，對其進(jìn)行質(zhì)譜研究時，浸提物分組對電噴霧離子化效果和檢測信號有增強作用。相關(guān)工作人員在確定檢測樣品時，主要借助陰性部分，結(jié)合基質(zhì)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)，妥善做好標(biāo)準(zhǔn)溶液制定工作，減少或消除基質(zhì)反應(yīng)。

2.3 線性范圍與檢出限

由表3可知，在1-100μg/kg濃度范圍內(nèi)，8種喹諾酮藥物呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r均大于0.996。以定量離子3倍的信噪比響應(yīng)值對應(yīng)的濃度為檢出限，10倍的信噪比響應(yīng)值對應(yīng)的濃度為定量限。

2.4 回收率與精密度

取雞肉空白基質(zhì)配制的10?g/kg的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，計算回收率和標(biāo)準(zhǔn)相對偏差，結(jié)果見表4。8種喹諾酮藥物的回收率為89.7%-97.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.87%-11.70%。

結(jié)論

本文將QuEChERS方法與液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法相結(jié)合，測定雞肉中8種喹諾酮藥物殘留。與其他方法相比，該方法大大縮短了前處理周期，節(jié)約了檢測成本，而且這種方法操作簡便、快速、準(zhǔn)確，可有效消除基質(zhì)中蛋白質(zhì)的干擾，提高了喹諾酮藥物測定的靈敏度、分析效率和確證能力等，不僅為喹諾酮類藥物的測定提供了技術(shù)支持，也適用于日常樣品的檢測分析。