李惠娟，魏 瓊，張燕飛

沙門氏菌(Salmonella)是一種常見的食源性致病菌[1-2]，能夠引起患者高熱、惡心、嘔吐、腹痛等臨床癥狀，主要存在于各類肉及肉制品、蛋及其制品中。據(jù)報(bào)道，全球每年大約有9 000多萬例的沙門氏菌感染事件，并導(dǎo)致大約15萬感染者死亡[3]，在我區(qū)食源性疾病致病因子中也以沙門氏菌感染為首[4]。近年來，食源性疾病成為公共衛(wèi)生關(guān)注的焦點(diǎn)，食品安全面臨著嚴(yán)重挑戰(zhàn)，同時(shí)抗生素的耐藥性也成為威脅公共衛(wèi)生和食品安全的全球性問題。因此，本文旨在分析2020年沙門氏菌在食品中的污染情況，食源性疾病中發(fā)病率、耐藥性及不同來源菌株之間的相關(guān)性，為食源性疾病的防控提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集2020年銀川市、吳忠市、石嘴山市、固原市、中衛(wèi)市疾控中心分離培養(yǎng)的沙門氏菌；藥敏試驗(yàn)大腸埃希氏菌ATCC25922及過程質(zhì)控菌株大腸埃希氏菌ATCC25922、PFGE分型用標(biāo)準(zhǔn)菌株H9812均來自中國疾病預(yù)防控制中心傳染病所提供。

1.2 試劑和儀器：沙門氏菌分離培養(yǎng)用麥康凱、克氏雙糖等購自北京路橋生物有限技術(shù)公司；生化鑒定API20E購自梅里埃生物公司；診斷學(xué)清購自寧波天潤有限公司；藥物敏感性實(shí)驗(yàn)藥敏紙片購自BD公司；金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸桿菌ATCC25922質(zhì)控菌株來自中國疾控中心。限制性內(nèi)切酶XbaⅠ購自大連寶生物；脈沖場凝膠電泳儀(CHEF-Mapper)、凝膠成像儀(GelDoc 2000) 系統(tǒng)購均自伯樂。

1.3 細(xì)菌鑒定和血清分型：沙門氏菌分離培養(yǎng)按照國家標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，經(jīng)生化鑒定純培養(yǎng)后進(jìn)行血清凝集診斷確定血清型。

1.4 藥物敏感性試驗(yàn)：藥物敏感性實(shí)驗(yàn)室采用肉湯稀釋法，挑取純培養(yǎng)菌落及質(zhì)控菌株(大腸埃希菌ATCC25922)接種至BHA平板37 ℃培養(yǎng)18 h；挑取新鮮純菌落數(shù)個(gè)用4 mL無菌生理鹽水充分混勻,調(diào)節(jié)菌懸液濃度在1.5×108CF U/mL；取100 μl混勻于10 mL CAMHB肉湯中,用8道移液器向96孔藥敏板中加入菌懸液,每孔50 μl,加蓋置入濕盒中,36 ℃培養(yǎng)18 h,最終濃度約為5×105CFU/mL。

1.5 脈沖場凝膠電泳(PFGE)分析：按照沙門氏菌PFGE分子分型統(tǒng)一方法操作，包括膠塊制作、細(xì)菌的裂解、染色體DNA酶切、電泳及成像與電泳圖像分析和結(jié)果聚類分析。

2 結(jié)果

2.1 血清型分布結(jié)果：33株可疑株經(jīng)API20E鑒定為沙門氏菌，采用沙門氏菌多價(jià)診斷血清確證，最后用群型血清進(jìn)行分型。經(jīng)鑒定分離主要以腸炎沙門氏菌為主，占45.45%；其次鼠傷寒沙門氏菌，占24.24%，見表1。

表1 不同來源沙門氏菌血清學(xué)分型結(jié)果

2.2 藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果：33株分離菌株進(jìn)行6類10種抗生素的藥物敏感性試驗(yàn)，結(jié)果顯示所有菌株均出現(xiàn)不同程度耐藥，其中76.5%的菌株對萘叮酸耐藥，其次是氯霉素耐藥菌株為19.5%，多株菌株產(chǎn)生了多重耐藥性，見表2。

表2 沙門氏菌對10種抗生素藥物敏感性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 PFGE結(jié)果：沙門氏菌分離株及質(zhì)控菌株(H9812)采用限制性內(nèi)切酶Xbal酶切后，脈沖場凝膠電泳分型，分型圖譜采用Bionumerics 4.0軟件聚類分析，見圖1(目錄后)。分型結(jié)果顯示，33株實(shí)驗(yàn)菌株的PFGE帶型相似性為58.15%～100%。來源于食品的沙門氏菌共分為11個(gè)帶型，NXSP004為優(yōu)勢帶型，來源于病例的菌株分為4個(gè)帶型，NXJB004為優(yōu)勢帶型，見圖1(目錄后)。

3 討論

沙門氏菌作為一種常見的腸道致病菌，是導(dǎo)致食物中毒的主要病原之一，對人體造成嚴(yán)重傷害，因此沙門氏菌的監(jiān)測、檢測及溯源分析受到越來越多的關(guān)注。本研究對寧夏地區(qū)食品及患者中分離的沙門氏菌進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明我區(qū)食品及患者感染仍然以腸炎沙門氏菌為主，占所有分離株的45.45%(15/33)；其次為鼠傷寒沙門氏菌，占24.24%(8/33)

其他血清型沙門氏菌均勻分布，此次研究結(jié)果與劉翔等[5]研究的2007-2011年寧夏地區(qū)沙門菌主要血清型基本一致,說明我區(qū)沙門氏菌血清型流行趨勢趨于穩(wěn)定，未發(fā)生較大的變異變遷。

由于在飼料中加入大量的抗生素添加劑及不同菌株間耐藥基因的頻繁轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致沙門氏菌的耐藥性逐漸增強(qiáng),耐藥譜也越來越寬[6]。本試驗(yàn)分離的33株沙門氏菌對6類10種抗生素均產(chǎn)生不同程度的耐藥，76.5%的菌株對萘叮酸耐藥，其次為氯霉素耐藥菌株為19.5%，磺胺甲惡唑及頭孢噻肟的敏感率分別為89.8%和88%。綜合比較可以發(fā)現(xiàn)，2020年度分離株對10種抗生素的耐藥性與魏瓊等發(fā)表的寧夏地區(qū)食源性和人源沙門菌耐藥性與血清型對比研究結(jié)果無明顯變化[8]。耐藥性的積累是一個(gè)長期演化的過程，在短時(shí)間內(nèi)很難達(dá)到由量變到質(zhì)變，本實(shí)驗(yàn)對2020年寧夏地區(qū)沙門氏菌耐藥性的研究，為食源性疾病臨床治療中抗生素的選用提供重要依據(jù)。

PFGE可以通過對致病菌DNA的分析，并通過Trannet數(shù)據(jù)庫比對致病菌株間的關(guān)聯(lián)性，從而識別、追蹤致病菌來源，有效控制食源性疾病暴發(fā)，查明污染食品源頭，為疫情防控提供重要依據(jù)[7]。本研究對分離的33株均進(jìn)行PFGE分子分型，共分為15個(gè)PFGE型別，其中來源食品沙門氏菌共分為11個(gè)帶型，NXSP004為優(yōu)勢帶型，來源于病例的菌株分為4個(gè)帶型，NXJB004為優(yōu)勢帶型。從分型圖譜發(fā)現(xiàn)NXSP001和NXJB002同源性為100%，可能存在散在的暴發(fā)，應(yīng)結(jié)合流行病學(xué)進(jìn)行追蹤溯源。同時(shí)其他食品及病例來源菌株的PFGE型別較為分散，同源性較低，說明在本次監(jiān)測范圍內(nèi)未發(fā)生由此類食品引起的食物中毒事件?？赡茉谡麄€(gè)食品運(yùn)輸、加工及后期食用階段較為規(guī)范，避免了中毒事件的發(fā)生。