劉珂飛，孟鐵健，任 凱，高應(yīng)瑞，王調(diào)調(diào)，劉淑惠，陳金艷

（天津生機(jī)集團(tuán)股份有限公司中國 300384）

關(guān)鍵字：飼料添加劑；丁酸梭菌；肉雞

丁酸梭菌( Clostridium butyricum) 又名酪酸菌，丁酸梭菌(Clostridium butyricum),屬于芽孢桿菌科（Bacillaceae），梭菌屬（Clostridium）[1]，有芽孢，革蘭氏陽性菌，在老培養(yǎng)物中或可變?yōu)楦锾m氏陰性菌，是一種嚴(yán)格厭氧菌[2,3],是我國農(nóng)業(yè)部于2009年7 月批準(zhǔn)的新一代微生物飼料添加劑。研究表明，丁酸梭菌具有提供營養(yǎng)、促進(jìn)代謝、維持動(dòng)物腸道健康等作用，本試驗(yàn)通過在肉雞飲水中添加丁酸梭菌來探討其對(duì)肉雞生長性能、消化率、免疫功能指標(biāo)等的影響，以期為丁酸梭菌在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用提供依據(jù)。丁酸梭菌屬于腸道益生菌，對(duì)于體內(nèi)的致病菌有一定的抑制作用，同時(shí)可以促進(jìn)益生菌的增殖[4]。該菌主要從奶酪、酸奶、動(dòng)物和人的腸道以及土壤樹葉等自然環(huán)境中分離提取[5]。

1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.1 試驗(yàn)?zāi)康?/h3>

評(píng)價(jià)飼料添加劑制劑（腸益?。?duì)肉雞生產(chǎn)性能、免疫指標(biāo)、腸道健康以及消化率的影響。

1.2 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)品： 液態(tài)混合型飼料添加劑 丁酸梭菌 （腸益健） 500mL/瓶。天津生機(jī)集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)

1.3 試驗(yàn)分組

實(shí)驗(yàn)選取20日齡雞只，分為4組，試驗(yàn)分組如下：

注：1舍與2舍飼養(yǎng)條件相同，3舍與4舍飼養(yǎng)條件相同

2 試驗(yàn)方法

2.1 生長性能統(tǒng)計(jì)

在27日齡、36日齡，稱雞體重和耗料量，計(jì)算飼料轉(zhuǎn)化率（FCR）。整個(gè)試驗(yàn)期間每天記錄雞只死亡狀況。

2.2 糞便的檢測(cè)

消化率的檢測(cè)（表觀利用率）

分別在27日齡、36日齡，每組試驗(yàn)雞稱取飼料以及各組糞便（50g），冷凍保存送樣，檢測(cè)消化率，進(jìn)行以下指標(biāo)檢測(cè)；

鈣：高錳酸鉀法滴定法，參照GB/T 6436-2018 飼料中鈣的測(cè)定；

磷：分光光度法，參照GB／T 6437-2018 飼料中總磷的測(cè)定；

粗蛋白：凱氏定氮法，參照GB/T 6432-2018 飼料中粗蛋白的測(cè)定

消化率（%）=100－100（b×c）/（a×d）

其中：a 為飼料中某養(yǎng)分的含量，c為飼料中內(nèi)源指示劑法的含量，b為糞樣中某養(yǎng)分的含量，d為糞樣中酸內(nèi)源指示劑法的含量。

2.3 免疫功能指標(biāo)和腸道健康樣品采集和制備

分別于試驗(yàn)的試驗(yàn)結(jié)束日期，從每個(gè)實(shí)驗(yàn)組選取3只接近平均體重雞，翅靜脈采血，分離血清，-20℃保存，用于測(cè)定免疫功能指標(biāo)；

采用雞特異性IgA、IgG、IgM ELISA試劑盒，測(cè)定肉雞血清免疫功能。

2.4 腸道健康指標(biāo)檢測(cè)取樣及檢測(cè)方法

2.4.1 取樣

分別于試驗(yàn)結(jié)束日期和出欄日期，從每個(gè)實(shí)驗(yàn)組選取3只，采用頸椎脫臼法處死肉雞。

采集一小段十二指腸（U型彎曲處）用于十二指腸形態(tài)結(jié)構(gòu)的分析；

采集盲腸食糜用于盲腸SCFA的測(cè)定。

2.4.2 十二指腸形態(tài)結(jié)構(gòu)

取十二指腸組織2cm左右置于10%中性福爾馬林固定液（100mL37%～40%甲醛原液，6.5g硫酸二氫鈉，4g硫酸氫二鈉，加蒸餾水至1000mL）中固定，測(cè)定腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)。腸道樣品采用酒精脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、切成5um厚的切片，進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色。每張切片在顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，測(cè)定腸絨毛高度和隱窩深度，并計(jì)算每張切片絨毛高度和隱窩深度比值（V/C）。

2.4.3 盲腸食糜SCFA：盲腸食糜SCFA采用氣相色譜法進(jìn)行測(cè)定。首先將樣品從冰箱取出解凍后稱取0.5g左右的樣品轉(zhuǎn)入離心管內(nèi)，加入蒸餾水按1∶10稀釋，然后混合均勻，以10000rpm，4℃低溫離心15min，取上清液分裝于離心管中，作為SCFA測(cè)定的樣品。參照Erwin等建立的SCFA測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)肉雞免疫功能的影響

表1 對(duì)血清中免疫指標(biāo)的影響

檢測(cè)結(jié)果表明：

使用7d后（27日齡）、使用16d后（36日齡）試驗(yàn)組數(shù)值高于對(duì)照組，尤其是IgM，基本試驗(yàn)組數(shù)值明顯高于對(duì)照組；但是不同劑量組以及不同雛源試驗(yàn)組結(jié)果差異不顯著。

3.2 十二指腸形態(tài)結(jié)構(gòu)

表2 27日齡十二指腸絨毛和隱窩 檢測(cè)結(jié)果

表3 36日齡十二指腸絨毛和隱窩 檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)結(jié)果表明：

27日齡以及36日齡檢測(cè)數(shù)據(jù)表明：試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，絨毛高度增加，上皮細(xì)胞也增加。腸道絨毛內(nèi)含有血小板，有吸收養(yǎng)料的作用。腸隱窩增加由于腸表面積增加可促進(jìn)小腸的吸收功能，隱窩深度降低，成熟度提高。

絨毛高度/隱窩深度比值提高：說明腸上皮細(xì)胞成熟率上升，吸收功能增強(qiáng)。

3.3 盲腸食糜SCFA檢測(cè)結(jié)果

表4 盲腸食糜SCFA檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)結(jié)果表明：

27日齡，試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，各短鏈脂肪酸含量均有提高，差異不顯著；

36日齡，試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，各短鏈脂肪酸含量均有提高，差異顯著。

3.4 消化率的影響

表5 27日齡糞便中鈣、磷、粗蛋白消化率檢測(cè)

表6 36日齡糞便中鈣、磷、粗蛋白消化率檢測(cè)

檢測(cè)結(jié)果表明：

27日齡，各試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，鈣、磷、粗蛋白消化率提高，差異不顯著；

36日齡：各試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，鈣、磷、粗蛋白消化率均提高，差異顯著。

3.5 生長性能

組別 數(shù)量（只） 36日齡出欄體重（Kg）成活率（%）1舍 20185 2.125 3.613 1.70 97.5 2舍 20050 2.017 3.530 1.75 96.8 3舍 20100 2.114 3.573 1.69 97.3 4舍 20168 2.107 3.645 1.73 96.5均耗料（Kg）飼料轉(zhuǎn)化率（FCR）

試驗(yàn)結(jié)果顯示：

液體丁酸梭菌（腸益?。┰谠鲋睾土先獗壬蟽?yōu)于對(duì)照組，不同劑量組差異不顯著，料肉比降低0.04-0.05，經(jīng)濟(jì)效益顯著；

液體丁酸梭菌（腸益?。┰诔苫盥噬蟽?yōu)于對(duì)照組，不同劑量組差異不顯著，可以明顯降低發(fā)病率和死亡率。

4 小結(jié)

4.1 免疫球蛋白是機(jī)體抗感染的重要物質(zhì)，主要存在于血清中，含有特異和非特異性抗體，具有抗菌、抗病毒、抗外毒素等多種功能。家禽體內(nèi)含有3 種重要的免疫球蛋白( IgA、IgG 和IgM) ，本試驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組添加丁酸梭菌改變了血清IgA、IgG 和IgM 含量，尤其是對(duì)IgG 的作用效果更為顯著。

4.2 液體丁酸梭菌產(chǎn)品內(nèi)含有豐富的有機(jī)酸，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收，提高飼料中蛋白、鈣、磷的消化率、降低料肉比，改善生產(chǎn)性能。

4.3 液體丁酸梭菌產(chǎn)品使用后可使肉雞絨毛高度增加，促進(jìn)飼料營養(yǎng)成分的吸收，可使腸隱窩增加，隱窩深度降低，成熟度提高，從而小腸表面積增加，可促進(jìn)小腸的吸收功能。