多重PCR在肉制品摻假及肉源性檢驗上的應用研究

譚艷妮 張健 施法

肉類摻假問題層出不窮，本文敘述了多重PCR技術在肉及肉制品源性成分檢驗上的應用和發(fā)展，為打擊肉類非法摻假行為提供了研究思路和技術保障。

一、多重PCR技術概述

多重PCR（Multiplex Polymerase Chain Reaction，MPCR）是區(qū)別于傳統(tǒng)PCR技術，在同一體系中使用兩對及以上引物，得到不同的目的片段的新型技術。此技術在簡化操作步驟和減少試劑用量的同時，仍然保有高特異性、高靈敏度，可以檢測多個特異性目的基因，被廣泛應用于常見肉及肉制品種屬鑒定以及摻假物種的檢測。

二、在肉制品摻假及肉源性檢驗上的應用

我國現(xiàn)行的行業(yè)標準及檢測標準覆蓋22種動物源性成分，摻假肉類并無固定，可能一種也可能多種，包括豬肉、雞肉、鴨肉、馬肉、駱駝肉、狗肉等，這是食品監(jiān)管部門監(jiān)管的重中之重。憑借經(jīng)驗以及感官方法從肉類形態(tài)學上進行鑒別，已經(jīng)遠遠不能滿足實際的檢驗工作需求以及對肉類食品摻假進行監(jiān)管。多重PCR可以通過一次試驗，對于可能混雜多種其它肉品的產(chǎn)品或在檢測人員尚不明確摻入何種涉假肉品的情況下，檢測出摻假的肉制品種屬，大大提高了檢測的工作效率，縮短了檢測時長。同時，多重PCR還具有操作簡便、成本低廉等特點，對于雞、鴨、豬、馬肉的摻假檢測也已較為成熟，逐漸成為一線檢驗的首選方法。

宗卉等通過一對內(nèi)參引物，建立起三重PCR檢測，可對牛羊混合成分進行鑒定。Dalmasso等建立四重PCR體系，對禽類、豬、魚以及反芻動物進行鑒定。張全芳等通過設計16S rRNA基因的特異性位點差異引物，進行一次PCR反應可同時擴增出三個不同物種（綿羊、山羊、狐貍）的特異性片段。楊冬燕等使用方法配制摻入豬、馬、牛、鴨源性成分的模擬摻假羊肉樣品及摻入豬、馬、鴨源性成分的模擬摻假牛肉樣品，每個成分的摻假比例為10%，篩選特異性強、敏感度高的豬、馬、牛、鴨物種特異性基因，優(yōu)化反應體系，建立了針對豬、牛、馬、鴨兩兩配對的雙重PCR檢測體系。Safdar等建立篩選牛、綿羊、山羊和魚類等肉用飼料的多重PCR體系。麗媛等建立6種肉類（豬、牛、羊、雞、馬、兔）的多重PCR方法，可在同一時間鑒定出來；電泳結(jié)果中經(jīng)過100℃加熱的馬肉和兔肉的熟制品條帶稍弱一些，說明該方法可以同時檢測生熟肉制品。Kitpipit等通過設計特異性引物（細胞色素氧化酶I（COI）、12S rRNA），可以對六類常見肉類食品進行鑒定。

多重PCR可同時檢測的肉類品種正逐步增多，從起初的三重體系（雞、鴨、鵝或山羊、綿羊、狐貍）相繼發(fā)展到四重、五重、六重甚至七重體系，目前已經(jīng)達到6種及以上。該技術擴大了檢測范圍，也在動物飼料成分鑒定中得到應用。

三、結(jié)語

多重PCR是基于常規(guī)PCR發(fā)展而來，所需設備簡單、試劑成本低，適合大部分實驗室和檢測單位使用，是較為通用的多物種檢測技術，也是目前國際、國內(nèi)鑒定物種種屬的主要方向和指定方法之一。

多重PCR雖有高通量、特異性強、靈敏度高、時效性高等明顯優(yōu)勢，但同時也有需要改進的地方。當反應體系同時存在多對引物或?qū)嶒灄l件選擇不當時，會出現(xiàn)易污染甚至假陽性的情況等。一般來說，一次同時檢測物種的數(shù)量在4-5種較為合適。不過，多重PCR可通過與其他技術結(jié)合來彌補劣勢，比如與熒光技術、Direct PCR技術、毛細管電泳和DNA芯片技術結(jié)合等。技術之間的聯(lián)合應用，也是未來分子檢測技術的發(fā)展方向。

作者簡介：譚艷妮（1987.10-），碩士研究生，工程師，微生物學與分子生物學。

通訊作者：施法，副主任藥師，藥物分析專業(yè)；研究方向：中藥質(zhì)量標準研究。