探究熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)在常見染色體非整倍體檢測中的應(yīng)用效果

鄭國兵 張艷芳 梁少霞 趙婧 謝豐華 彭建明

【摘要】目的：探究熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative.fluorescent.polymerase.chain.reaction，QF-PCR）技術(shù)在常見染色體非整倍體檢測中的應(yīng)用效果。方法：選取2019年1月至2020.年.12月產(chǎn)前診斷500例標(biāo)本中的13、18、21、X、Y染色體，并與傳統(tǒng)的G顯帶染色體核型分析結(jié)果做對比。結(jié)果：在500例樣本中，通過QF-PCR技術(shù)檢測出非嵌合型染色體數(shù)目異常有60例，其中有21三體綜合征25例，18三體綜合征20例，13三體綜合征5例，X單體3例，XXX1例，XXY2例，XYY2例，XXX合并18三體綜合征2例，檢測結(jié)果與核型分析結(jié)果一致。結(jié)論：QF-PCR技術(shù)在常見染色體非整倍體檢測中具有很大的應(yīng)用價值，在臨床檢測中的應(yīng)用效果較好

【關(guān)鍵詞】熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)；染色體非整倍體；產(chǎn)前診斷；核型分析

【中圖分類號】R596.1.【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A.【文章編號】2096-5249（2021）14-0147-02

染色體非整體倍體異常是一種比較常見的染色數(shù)目異常情況，包括21三體綜合征、18三體綜合征、13三體綜合征、三倍體、性染色體數(shù)目異常，這些疾病將會胎兒的生命安全造成極大的隱患，如宮內(nèi)死胎、流產(chǎn)等，患兒在出身后存在不同程度的智力缺陷、生長發(fā)育比較遲緩，甚至存在畸形組織器官，會給患者的家庭帶來沉重的影響[1]。目前治療染色體異常的方法還在探索階段，臨床上主要通過產(chǎn)前篩查染色體異常，進(jìn)行產(chǎn)前干預(yù)，以提高新生兒的出生質(zhì)量[2]。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[3]，熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative fluorescent polymerase chain reaction，QF-PCR）技術(shù)能夠快速診斷染色體非整倍體，本研究選取2019年1月至2020 年 12月產(chǎn)前診斷500例標(biāo)本中的13、18、21、X、Y染色體，并與傳統(tǒng)的G顯帶染色體核型分析結(jié)果做對比，探究QF-PCR技術(shù)在常見染色體非整倍體檢測中的應(yīng)用。

1？資料與方法

1.1.一般資料

選取2019年1月至2020年12月產(chǎn)前診斷500例標(biāo)本中的13、18、21、X、Y染色體。按照常規(guī)培養(yǎng)、收獲、制片G顯帶，按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行核型分析。

1.2.方法

在B超引導(dǎo)下，對絨毛、羊水或者臍血穿刺取樣，開展染色體核型分析與QF-PCR檢測。染色體核型分析按照常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)、收獲、制片G顯帶，按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)開展核型分析。QF-PCR檢測主要分為STR定點、提取標(biāo)本DNA、PCR擴增、毛細(xì)管電泳等。STR定點使用廣州達(dá)瑞生物技術(shù)股份有限公司非整倍體檢測試劑盒，共標(biāo)測了20位點，包括21號染色體的6個STR位點，18號染色體的4個STR位點，13號染色體有4個STR位點，性染色體6個STR位點，包括按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)提取絨毛、羊水或者臍血標(biāo)本的DNA，在擴增儀上擴增，以95 ℃持續(xù)5 min預(yù)變性、然后用94 ℃30 s、60 ℃60 s、70 ℃60 s，循環(huán)25次左右，再以60 ℃延伸1 h，將擴增的產(chǎn)物放于4 ℃的環(huán)境中避光保存。取甲酰胺8.5 μL，分子質(zhì)量標(biāo)記物0.5 μL，PCR擴增產(chǎn)物1.0 μL，放在冰水上迅速冷卻 3 min，進(jìn)行毛細(xì)管電泳。

1.3.觀察指標(biāo)

重點觀察500例標(biāo)本中的13、18、21、X、Y染色體，尤其是DXS6809、DXS9895、AMEL、TAF9L、ZFXY、SRY、XHPRT；D13S256、D13S797、D13S317、D13S305、D13S800、D13S325位點的變化。

2？結(jié)果

在500例樣本中，通過QF-PCR技術(shù)檢測出非嵌合型染色體數(shù)目異常有60例，其中有21三體綜合征25例，18三體綜合征20例，13三體綜合征5例，X單體3例，XXX1例，XXY2例，XYY2例，XXX合并18三體綜合征2例，檢測結(jié)果與核型分析結(jié)果一致。

3？討論

染色體數(shù)目發(fā)生異?；蚴墙Y(jié)構(gòu)發(fā)生畸形，是導(dǎo)致新生兒出現(xiàn)缺陷的主要原因，染色體異常的發(fā)生率通常在1/160，其中最為常見的為21、18、13三體、性染色體異常?；加腥旧w異常的患兒通常表現(xiàn)為智力低下、生長遲緩、畸形的癥狀[4]，會給患兒帶來巨大的傷害。目前并沒有效果較好的治療方法，患兒的出生會給患兒的家庭以及患兒本身造成極大的傷害，患兒將承擔(dān)巨大的疾病痛苦，而家庭需要承受沉重的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。在診斷技術(shù)沒有得到普及時，染色體異?；颊哂捎诎l(fā)育比較遲緩，會伴隨行為或者學(xué)習(xí)的障礙，在青春期容易出現(xiàn)發(fā)育異常，在成年以后易發(fā)生不孕不育，對患者本人來說是非常嚴(yán)重的影響，患者的家庭也承受著巨大的痛苦。

當(dāng)前，各個地區(qū)大力提倡婚前、孕前檢查，以及產(chǎn)前篩查、診斷，目的在于及早防控，以提高新生兒的質(zhì)量[5]，穩(wěn)定社會的和諧，避免悲劇的發(fā)生。相關(guān)的研究認(rèn)為[6]，不同孕婦年齡與檢出染色體異常之間存在聯(lián)系，因此孕婦高齡被列為風(fēng)險指標(biāo)，其他風(fēng)險因素還包括唐篩高風(fēng)險、無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測高風(fēng)險、胎兒超聲異常、夫妻雙方患有珠蛋白生成障礙性貧血、不良生育史、染色體異常家族史等。每種綜合征的表現(xiàn)并不相同，一些患兒可能只有輕微的生理異常以及神經(jīng)認(rèn)知障礙；而另一些患兒可能會出現(xiàn)比較嚴(yán)重的，甚至危及生命的癥狀。傳統(tǒng)的羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體核型分析技術(shù)，其檢測的范圍比較廣、可靠性較好、認(rèn)可度較高，是染色體病檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，能夠準(zhǔn)確地檢測出染色體的具體情況，主要包括染色體數(shù)目、染色體結(jié)構(gòu)兩個方面的異常。

隨著傳統(tǒng)的羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體核型分析技術(shù)不斷應(yīng)用，操作人員逐漸發(fā)現(xiàn)這種方法耗時比較長、等待報告的時間需要10天左右，會加重孕婦以及孕婦家屬焦慮的心情。傳統(tǒng)的羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體核型分析技術(shù)運用效果并不理想，主要表現(xiàn)在兩個方面。首先，傳統(tǒng)的分析技術(shù)對操作人員的技術(shù)要求比較高。其次，孕婦的羊水對周圍環(huán)境、顯帶比較敏感，會影響到檢測的結(jié)果，甚至最終導(dǎo)致檢測的失敗[7]，會使患者錯過最佳的醫(yī)學(xué)處理時機。

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，QF-PCR檢測技術(shù)得到了廣泛的關(guān)注，適用于各個年齡階段的產(chǎn)婦，這種方法能夠進(jìn)一步判斷染色體的數(shù)目。QF-PCR檢測技術(shù)與G顯帶的核型做比較，具有明顯的優(yōu)勢[8]，其主要利用了STR的遺傳標(biāo)記在人群中多態(tài)性的特點，通過運用PCR擴增以及毛細(xì)管電泳技術(shù)，逐一分析各STR點熒光峰的個量或面積比值。涉及PentaD、D21S1246、D21S2052、D21S1446、D21S1411、LFG21、D21S1435、D21S1435、D21S11等定點，QF-PCR檢測技術(shù)操作比較快速，最短能夠在一天之內(nèi)出結(jié)果，最長不會超過兩天的時間，極大縮短了孕婦以及孕婦家屬等待的時間，減少了不良情緒的發(fā)生；QF-PCR檢測技術(shù)操作只需要很少的樣本量就能夠診斷單基因??；熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（QF-PCR）檢測技術(shù)操作比較便捷、自動化程度較高，能夠根據(jù)STR點的個性化信息做出準(zhǔn)確的判斷，判斷母體是否發(fā)生了組織污染[9-10]。在本研究500例樣本中，主要使用了QF-PCR檢測技術(shù)，分為STR定點、提取標(biāo)本DNA、PCR擴增、毛細(xì)管電泳等。通過QF-PCR技術(shù)檢測出非嵌合型染色體數(shù)目異常有60例，其中有21三體綜合征25例，18三體綜合征20例，13三體綜合征5例，X單體3例，XXX1例，XXY2例，XYY2例，XXX合并18三體綜合征2例，檢測結(jié)果與核型分析結(jié)果一致。因此，QF-PCR技術(shù)在常見染色體非整倍體檢測中應(yīng)用效果比較好，具有較高的準(zhǔn)確性，發(fā)展前景廣闊，值得在臨床治療中大力推廣。QF-PCR檢測技術(shù)在實際操作中比較高效，操作便捷、能夠極大提高檢測的效率，節(jié)省檢測的時間，快速給出檢測結(jié)果，在臨床上能夠與染色體核型分析優(yōu)勢互補。簡單來說，QF-PCR檢測技術(shù)所需要的樣本比較少、操作步驟簡單、自動化程度高、節(jié)省人力，過程比較快速、客觀，是一種比較準(zhǔn)確的檢測方法。

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