王棋棋

（中紡檢測(cè)（福建）有限公司，福建泉州 362200）

食品中防腐劑和甜味劑的存在，對(duì)食品品質(zhì)、口味有直接的影響，也是食品安全管理至關(guān)重要的內(nèi)容。測(cè)定食品中防腐劑和甜味劑的含量及類型，是食品安全管理的依據(jù)。反相高效液相色譜法測(cè)定食品中防腐劑和甜味劑，該方法具有準(zhǔn)確性好、樣品前處理簡(jiǎn)單、精密度高的優(yōu)良特點(diǎn)。根據(jù)食品中防腐劑和甜味劑的測(cè)定要求，探究反相高效液相色譜法的應(yīng)用非常必要。

1 材料與方法

1.1 試劑與設(shè)備

在測(cè)定前，準(zhǔn)備食品添加劑標(biāo)準(zhǔn)品，主要為糖精鈉、阿斯巴甜、山梨酸、安賽蜜等。同時(shí)準(zhǔn)備92 g/L亞鐵氰化鉀溶液、183 g/L乙酸鋅溶液、0.02 mol/L的乙酸銨溶液[1]。

日本島津帶He脫氣裝置的高效液相色譜儀；國(guó)產(chǎn)電動(dòng)離心沉淀劑；帶二極管陣列的檢測(cè)器；感量為0.001 g的電子分析天平；轉(zhuǎn)速大于8 000 r/min的離心機(jī)；渦旋振蕩器；超聲波清洗儀[2]。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 測(cè)定條件

流動(dòng)相溶劑A為0.02 mol乙酸銨溶液，由超聲后二水乙酸220 g與500 mL水加入30.0 mL冰乙酸后定容至1 000 mL配制；流動(dòng)相溶劑B為甲醇，色譜純[3]。梯度洗脫程序?yàn)椋?.0%甲醇，1.0～0.8 mL/min，0～5 min；設(shè)定初始濃度為5.0%溶劑B和95.0%溶劑B，糖精鈉、脫氫乙酸出峰時(shí)間相同，色譜峰單獨(dú)積分計(jì)算難度大，可以調(diào)整為10%溶劑B+90%溶劑A，流速為0.8～1.0 mL/min，洗脫時(shí)間為5～20 min。由于阿斯巴甜在5.0%溶劑B和95.0%溶劑B洗脫時(shí)，出峰時(shí)間延后，影響了分析效率，在20.0 min后，可以調(diào)整流動(dòng)相比例為38%溶劑B+62%溶劑A，流動(dòng)速度為1.0 mL/min，洗脫時(shí)間為20～40 min。山梨酸在洗脫比例為5.0%溶劑B和95.0%溶劑B，且流動(dòng)速度為1.0 mL/min時(shí)，與樣品中其他干擾雜峰分離，可以在洗脫時(shí)調(diào)整洗脫時(shí)間范圍為40～48 min。

設(shè)定在230 nm波長(zhǎng)下進(jìn)行安賽蜜、山梨酸測(cè)定，在210nm波長(zhǎng)下進(jìn)行阿斯巴甜、糖精鈉測(cè)定，在293 nm波長(zhǎng)下進(jìn)行脫氫乙酸測(cè)定。同時(shí)設(shè)定檢測(cè)器柱溫為37.0～39.0 ℃，進(jìn)樣量為10 μL，靈敏度為 0.08 aufs[4]。

1.2.2 樣品處理

對(duì)于醬油等液體樣品，直接取樣并加水稀釋20倍，以50%氨水調(diào)節(jié)酸堿值至中性偏弱堿性。調(diào)節(jié)酸堿值后進(jìn)行超速離心，取上清液備用。

含二氧化碳、酒精的軟飲料，需要取10.00 g加熱后去除二氧化碳、酒精，放入50 mL比色管內(nèi)用水定容并經(jīng)濾膜過(guò)濾，濾膜孔徑為0.45 μm。

對(duì)于醬菜、果脯等固體樣品，切碎后混合均勻加入8.0 mL水，超聲30 min時(shí)后用水定容到10.0 mL，定容后經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾處理。餅干等基質(zhì)成分復(fù)雜的樣品，需要在利用石油醚脫脂處理的基礎(chǔ)上，粉碎并均勻混合，加入等量的2份水以及1份200 g/L硫酸鋅溶液和20.0 g/L氫氧化鈉溶液，超聲0.5 h后，用水定容到25.0 mL經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾待測(cè)定[5]。

酸奶等固液混合樣，需將其混合均勻后加入100 g/L硫酸銨溶液以及等量的兩份水，超聲30 min后，用水定容到10.0 mL經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾處理備用。

2 結(jié)果與分析

2.1 定量測(cè)定結(jié)果

依據(jù)前述測(cè)定條件，對(duì)前期處理完畢的樣品進(jìn)行測(cè)定，得出結(jié)果為：可樂(lè)含安賽蜜12.5 mg/kg；酸奶中糖精鈉含量為155.2 mg/kg，山梨酸含量為112.3 mg/kg，阿斯巴甜含量為936.5 mg/kg、安賽蜜含量為35.1 mg/kg；餅干含阿斯巴甜61.3 mg/kg；醬菜含安賽蜜32.6 mg/kg；果脯含阿斯巴甜32.6 mg/kg，安賽蜜含量為469.5 mg/kg；醬油含脫氫乙酸123.5 mg/kg。重復(fù)測(cè)定6次后，得出測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.5%～8.5%，準(zhǔn)確度較高。

2.2 線性范圍與相關(guān)系數(shù)

對(duì)反相高效液相色譜法進(jìn)行方法學(xué)考察驗(yàn)證，其中山梨酸標(biāo)準(zhǔn)線性范圍在2.0～20.0 μg/mL時(shí)達(dá)到最佳線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.999 85，糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)線性范圍為0.0～100.0 μg/mL，相關(guān)系數(shù)為0.999 98，脫氫乙酸在1.0～100.0 μg/mL時(shí)達(dá)到最佳線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.999 97，阿斯巴甜的標(biāo)準(zhǔn)線性范圍在0.0～100.0 μg/mL，相關(guān)系數(shù)為0.999 78；安賽蜜的標(biāo)準(zhǔn)線性范圍在2.0～50.0 μg/mL，相關(guān)系數(shù)為0.999 45。

2.3 加標(biāo)回收率

利用電子天平稱取5.0 g醬菜、果脯、酸奶、餅干（油炸）、可樂(lè)、醬油各6分，添加糖精鈉、脫氫乙酸、山梨酸、安賽蜜、阿斯巴甜標(biāo)準(zhǔn)物，添加量分別為 50.0 μ g、150.0 μg、200.0 μg、500 μg，得到的最大回收率以及對(duì)應(yīng)的添加量、變異系數(shù)如表1所示。利用該方法對(duì)食品中山梨酸、脫氫乙酸等防腐劑以及糖精鈉、安賽蜜、阿斯巴甜等甜味劑進(jìn)行檢測(cè)，可以獲得準(zhǔn)確性較好的結(jié)果，滿足大批量食品防腐劑、甜味劑檢測(cè)要求。

表1 加標(biāo)回收率表

3 結(jié)論

反相高效液相色譜法是一種準(zhǔn)確度高、分離度佳、精密度好和耗時(shí)短的定量分析方法，可以滿足食品中多種防腐劑和甜味劑的測(cè)定要求。在食品中防腐劑與甜味劑測(cè)定中，相關(guān)人員可以選擇反相高效液相色譜法，配合C18柱梯度洗脫，在200～293 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，可壓縮樣品檢測(cè)時(shí)間，提高樣品檢測(cè)效率。