何虹，朱榮，丁建東，盧日剛

（廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗所，南寧 530021）

為了驗證實驗室檢測能力，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性，定期開展實驗室間比對活動，能直接反映實驗室的儀器設(shè)備和技術(shù)素質(zhì)的實際水平和出具報告的能力［1-2］。本次諾氟沙星含量測定的盲樣考核所采用的檢驗方法，參考藥品原料藥諾氟沙星的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)［3］，采用目前藥品檢驗常用的高效液相色譜法測定［4］。本次盲樣考核用曼德爾h／k統(tǒng)計替代通常的離群值檢驗方法，避免冒失地剔除不一致的數(shù)據(jù)導(dǎo)致方法精密度的誤判，幫助考察實驗室檢測人員（QC）對于高效液相色譜法的檢測能力，以及監(jiān)控實驗室的持續(xù)檢測能力，有助于識別實驗室的問題并采取糾正措施，提高質(zhì)量管理水平。

1 樣品與方法

1.1 盲樣考核樣品

本次盲樣考核樣品為諾氟沙星樣品，由南寧金馬制藥廠（有限公司）生產(chǎn)，樣品呈類白色粉末，包裝于棕色瓶內(nèi)。經(jīng)均勻性和穩(wěn)定性評價合格后的樣品，作為盲樣考核用樣品發(fā)送給參加本次盲樣考核的16 家實驗室［5］。

為了更加客觀、公正地評價參加實驗室結(jié)果及防止實驗室間數(shù)據(jù)串通，本次盲樣考核配送給每個實驗室1 個工作對照品、1 個樣品，以及2 個干擾樣品（準(zhǔn)備3 個干擾樣品，每個實驗室隨機(jī)配送2 個，干擾樣品不參與結(jié)果評判）。

1.2 樣品測定方法

1.2.1 儀器工作條件

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：0.025 mol／L 磷酸溶液（用三乙胺調(diào)pH 值至3.0）-乙腈（87∶13）；檢測波長：278 nm；流量：1.0 mL／min；進(jìn)樣體積：20 μL。

1.2.2 樣品處理

（1）供試品溶液的制備。取細(xì)粉樣品100 mg，精密稱定，置于200 mL 容量瓶中，加0.1 mol／L鹽酸溶液4 mL 溶解，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻，精密量取續(xù)濾液5 mL，置于50 mL 容量瓶中，用流動相稀釋至標(biāo)線，搖勻，作為供試品溶液。

（2）對照品溶液的制備。取諾氟沙星工作對照品25 mg，精密稱定，加適量0.1 mol／L 鹽酸溶液溶解，同法操作，用流動相稀釋成諾氟沙星質(zhì)量濃度為25 mg／mL 對照品溶液。

1.2.3 樣品測定

將儀器調(diào)至最佳狀態(tài)，取諾氟沙星供試品溶液和對照品溶液各20 μL 注入液相色譜儀，記錄諾氟沙星色譜峰的保留時間和峰面積，以保留時間作為定性依據(jù)，以色譜峰面積作為定量依據(jù)，按外標(biāo)法-單點校正法計算諾氟沙星樣品的含量。諾氟沙星樣品的含量按照公式(1)計算：

1.2.4 樣品結(jié)果

以百分含量報告測定結(jié)果（按照對照品計算，不扣除水分），保留小數(shù)點后2 位，并將兩次測定的結(jié)果、平均值以及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差填入結(jié)果報告單中。

1.3 評價方法

本次盲樣考核采用安德森-達(dá)林（AD）檢驗和曼德爾（Mandel's）h／k檢驗進(jìn)行統(tǒng)計分析和評價。

1.3.1 安德森-達(dá)林統(tǒng)計檢驗

安德森-達(dá)林（AD）統(tǒng)計檢驗可用于度量數(shù)據(jù)服從特定概率分布的程度。AD 統(tǒng)計檢驗按照公式(2)計算。

1.3.2 曼德爾h／k統(tǒng)計量檢驗

曼德爾h／k統(tǒng)計量檢驗用來評定分析數(shù)據(jù)的一致性，該統(tǒng)計屬于單水平下實施的單因素方差分析。h值是實驗室間一致性的統(tǒng)計量，即水平下某參加實驗室與水平總體之差的度量，反映單個實驗室實驗結(jié)果的均值與所有實驗室結(jié)果均值的偏差。k值是把單個實驗室內(nèi)的重復(fù)性偏差與所有參與盲樣考核實驗室的平均重復(fù)性偏差進(jìn)行對比，反映單個實驗室內(nèi)各實驗結(jié)果與其均值相比，其它實驗室的偏差。h-crit 臨界值和k-crit 臨界值分別按公式(3)和公式(4)計算［6］：

采用曼德爾h／k統(tǒng)計量檢驗，既可以檢驗實驗室間測試結(jié)果的準(zhǔn)確度，又可以檢驗實驗室內(nèi)測試結(jié)果的精密度。一般情況下，某個實驗室的h值越大，表明其測試結(jié)果準(zhǔn)確度越低。當(dāng)h值不大于5%的臨界值時，認(rèn)為該值為可信值；當(dāng)h值大于5%的臨界值且不大于1%的臨界值時，認(rèn)為該值為歧離值；當(dāng)h值大于1%的臨界值時，認(rèn)為該值為離群值。某個實驗室的k值越大，表明其實驗室測試結(jié)果的精密度越低。當(dāng)k值不大于5%的臨界值時，認(rèn)為該值為可信值，當(dāng)k值大于5%的臨界值且不大于1%的臨界值時，認(rèn)為該值為歧離值；當(dāng)k值大于1%的臨界值時，認(rèn)為該值為離群值。

2 結(jié)果與分析

2.1 參加對象

本次盲樣考核的對象為廣西壯族自治區(qū)內(nèi)9 個市的16 家實驗室，其中9 家為自治區(qū)內(nèi)各市級的藥品檢驗實驗室，其余7 家為自治區(qū)內(nèi)有GMP 認(rèn)證的藥品生產(chǎn)企業(yè)QC 實驗室。樣品發(fā)放前，由廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗所負(fù)責(zé)樣品均勻性和穩(wěn)定性評價。

2.2 盲樣考核結(jié)果

參加盲樣考核的16 個實驗室（代碼為i=A01、A02、A03、A04、A05、A06、A07、A08、A09、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16），按照1.2 檢驗方法對盲樣中諾氟沙星的含量進(jìn)行測定，每個樣品進(jìn)行2 次獨立測定(編號為j=1、2)，16 家參加盲樣考核實驗室的檢測結(jié)果見表1。

表1 16 家參加盲樣考核實驗室的檢測結(jié)果 %

2.3 盲樣考核結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

因參加實驗室的數(shù)量未能滿足穩(wěn)健統(tǒng)計［7］的要求，故剔除每家實驗室的干擾樣品值后，固定檢測樣品分別采用安德森-達(dá)林檢驗、曼德爾h／k統(tǒng)計檢驗，對16 家參加實驗室的盲樣考核結(jié)果進(jìn)行單因素方差統(tǒng)計分析。

2.3.1 測定結(jié)果的安德森-達(dá)林統(tǒng)計檢驗

根據(jù)表1 中16 家參加盲樣考核實驗室的檢測結(jié)果數(shù)據(jù)，采用安德森-達(dá)林檢驗統(tǒng)計分析，運用公式(2)計算出16 家實驗室結(jié)果數(shù)據(jù)的安德森-達(dá)林統(tǒng)計檢驗量見表2。

表2 16 家實驗室盲樣考核結(jié)果AD 統(tǒng)計量

2.3.2 測定結(jié)果的曼德爾h／k統(tǒng)計量檢驗

根據(jù)表1 中檢測結(jié)果數(shù)據(jù)，按公式(3)和公式(4)，采用曼德爾h／k檢驗統(tǒng)計分析，計算出16 家實驗室的曼德爾h統(tǒng)計量和k統(tǒng)計量見表3。

表3 實驗室間檢測結(jié)果的曼德爾h／k 統(tǒng)計檢驗表

在95%的概率下，分別繪制各實驗室的曼德爾h值分析柱狀圖（圖1）和k值分析柱狀圖（圖2）。

圖1 水平樣品下的實驗室間檢測結(jié)果h 統(tǒng)計檢驗量柱狀圖

圖2 水平樣品下的實驗室間檢測結(jié)果k 統(tǒng)計檢驗量柱狀圖

結(jié)合表3 數(shù)據(jù)，從h值統(tǒng)計圖中（圖1）可知，在曼德爾h的統(tǒng)計結(jié)果中，實驗室A09、A15 及A14的結(jié)果分別為-1.990、-1.900、1.951，屬于歧離值，其余13 家結(jié)果為正常值。由k值統(tǒng)計圖（圖2）可知，在曼德爾k的統(tǒng)計結(jié)果中，實驗室A05 的結(jié)果分別為2.115，屬于歧離值，其余14 家結(jié)果為正常值。若僅根據(jù)實驗室間曼德爾h／k檢驗統(tǒng)計量判定實驗室結(jié)果可疑，容易導(dǎo)致誤判的可能，需要進(jìn)一步分析。經(jīng)查看上述4 家實驗室盲樣考核原始數(shù)據(jù)的記錄，表明不存在樣品前處理、程序、謄抄等方面的失誤。隨后征詢了A05、A09、A14 及A15 實驗室的意見，這4 家實驗室均認(rèn)為是嚴(yán)格遵守規(guī)范進(jìn)行操作。曼德爾h和k檢驗中的歧離值屬于隨機(jī)誤差，因此16 家實驗室的盲樣考核結(jié)果滿意。

3 技術(shù)分析與建議

3.1 技術(shù)分析

本次盲樣考核共發(fā)放3 個不同濃度的樣品，除1 個固定檢測樣品（A）外，隨機(jī)發(fā)放2 個干擾樣品。采用曼德爾h／k檢驗統(tǒng)計分析方法，對16 家實驗室的所有測定數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，分別計算每個濃度樣品參加實驗室上報數(shù)據(jù)的k值，發(fā)現(xiàn)共有7 家實驗室收到相同的3 個不同濃度樣品（A、C、D）。綜合這7 家實驗的k值數(shù)據(jù)，繪制出3 個濃度樣品的k值分析圖（圖3）并進(jìn)行比較。分析發(fā)現(xiàn)A04 實驗室3 個不同濃度k值均接近0，表明該實驗室提交的檢測數(shù)據(jù)可信度差［14］。從圖3 分析圖中可更直觀的顯示7 家實驗室3 個不同濃度的檢測情況，疑存檢驗人員修改數(shù)據(jù)的情況發(fā)生。該問題應(yīng)引起A04 實驗室管理者的高度注意，應(yīng)對人、機(jī)、料、法、環(huán)等因素進(jìn)行核查［15］。

圖3 3 個濃度樣品數(shù)據(jù)的k 值分析圖

本次盲樣考核的16 家實驗室有9 家為本區(qū)域內(nèi)的藥品檢驗實驗室，其余7 家為藥品生產(chǎn)企業(yè)QC 實驗室，從原始數(shù)據(jù)（表1）分析，采用安德森-達(dá)林檢驗和曼德爾h／k檢驗的各參加實驗室的測試結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，簡單、直觀、有效，且利于比較，及時發(fā)現(xiàn)實驗室存在的不足，了解與其它實驗室的差距，便于進(jìn)行下一步改進(jìn)［16］。

3.2 改進(jìn)建議

基于曼德爾h／k統(tǒng)計法評價這次的盲樣考核結(jié)果，發(fā)現(xiàn)本次參加的A04 實驗室3 個不同濃度k值均接近0，可再組織一次同類型多水平濃度盲樣考核，追蹤該實驗室提交的數(shù)據(jù)，若再次發(fā)現(xiàn)A04實驗室出現(xiàn)此類情況，可以表明該實驗室檢驗人員有修改數(shù)據(jù)的情況存在。實驗室盲樣考核使用曼德爾h／k統(tǒng)計，可及時發(fā)現(xiàn)問題，真正起到發(fā)揮質(zhì)量管理工具的作用。

4 總結(jié)

采用曼德爾h／k檢驗方法評估盲樣考核結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差與準(zhǔn)確度后，各個實驗室技術(shù)表現(xiàn)的優(yōu)劣和誤差可以被確定。每一個參加者可以了解其結(jié)果在本次盲樣考核計劃中所處的水平，對于各自存在的問題可以進(jìn)一步查證原因，及時改正。今后應(yīng)繼續(xù)加強(qiáng)藥品檢測人員的業(yè)務(wù)綜合技能的培訓(xùn)，積極組織多種形式的內(nèi)外部能力驗證，提升QC 檢驗人員的藥品檢測能力水平。建議各實驗室在檢測過程中，確保一切檢測活動可控、可追溯、可重現(xiàn)，保證實驗室質(zhì)量控制措施的落實。