血清miR-21、IGFBP-3水平與妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者不良妊娠結(jié)局的相關(guān)性

范海博

[關(guān)鍵詞] 妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥;血清微小RNA-21;胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-3;不良妊娠結(jié)局;相關(guān)性

[中圖分類號(hào)] R714? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2021）17-0120-04

Correlation between serum miR-21 and IGFBP-3 levels and adverse pregnancy outcomes in patients with intrahepatic cholestasis of pregnancy

FAN Haibo

Department of Laboratory Medicine， Jiamusi Maternal and Child Health Hospital in Heilongjiang Province， Jiamusi 154002， China

[Abstract] Objective To explore the correlation between serum levels of microRNA-21 （mir-21）， insulin-like growth factor binding protein-3 （IGFBP-3） and adverse pregnancy outcomes of patients with intrahepatic cholestasis of pregnancy （ICP）. Methods A total of 87 patients with ICP who gave birth in our hospital from February 2018 to February 2020 were selected. The pregnancy outcomes of selected parturient were recorded. Low birth weight and premature rupture of membranes were taken as adverse pregnancy outcomes in the adverse pregnancy outcome group （n=51）， and the rest of normal pregnant women were taken into the normal pregnancy outcome group （n=36）. The levels of miR-21 and IGFBP-3 were detected in all parturient. The relationship between serum miR-21， IGFBP-3 levels and adverse pregnancy outcomes of patients with ICP was analyzed. Results The level of miR-21 was higher and the level of IGFBP-3 BP-3 was lower in the adverse pregnancy outcome group than those in the normal pregnancy outcome group （P<0.05）. Logistics regression analyses showed that the regression equation was Y=-0.348-5.368X1+12.865X2， which suggested that the increase of serum miR-21 level and the decrease of IGFBP-3 level were the influencing factors leading to adverse pregnancy outcome （OR>1， P<0.05）. Receiver operating characteristic curve （ROC） was plotted， and the results showed that the area under the curve （AUC） of the combination of serum miR-21 and IGFBP-3 to predict the adverse pregnancy outcome of patients with ICP was 0.976， which had certain predictive value and obtained the best predictive value. Conclusion Serum levels of miR-21 and IGFBP-3 in patients with ICP are closely related to adverse pregnancy outcomes， which can provide timely and effective preventive measures for these patients.

[Key words] Intrahepatic cholestasis of pregnancy; Serum microRNA-21; Insulin-like growth factor binding protein-3; Adverse pregnancy outcome; Correlation

妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥主要以皮膚瘙癢和膽汁酸升高為主要特征，是造成圍生兒死亡的重要影響因素，且對(duì)孕產(chǎn)婦健康造成不良威脅[1]。隨著現(xiàn)代醫(yī)療的迅猛發(fā)展，抗膽汁淤積類、皮質(zhì)激素類藥物已被廣泛應(yīng)用于該疾病的治療中，可有效控制疾病發(fā)展，但臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，仍有部分孕產(chǎn)婦存在諸多不良妊娠結(jié)局，威脅母嬰安全，因此，早期明確疾病發(fā)展情況，可為臨床及時(shí)實(shí)施有效的預(yù)防措施提供依據(jù)。相關(guān)研究表明，血清微小RNA-21（MicroRNAs-21，miR-21）、胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-3（Insulin-like growth factor binding protein-3，IGFBP-3）是該疾病的敏感指標(biāo)，其中miR-21屬于一種微小RNA，參與多種疾病的發(fā)生與發(fā)展;IGFBP-3主要是由肝臟合成與分泌，其含量在該疾病中變化較為明顯[2]。鑒于此，本研究將選取2018年2月至2020年2月在我院進(jìn)行分娩的87例妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者，旨在探討miR-21、IGFBP-3水平與妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者不良妊娠結(jié)局的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年2月至2020年2月在我院進(jìn)行分娩的87例妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者，統(tǒng)計(jì)入選產(chǎn)婦妊娠結(jié)局，將新生兒低體重、胎膜早破等情況作為不良妊娠結(jié)局，共計(jì)51例，將其設(shè)為不良妊娠結(jié)局組（n=51），其余正常妊娠產(chǎn)婦將其設(shè)為正常妊娠結(jié)局組（n=36）。不良妊娠結(jié)局組年齡23～36歲，平均（29.24±4.07）歲;孕齡34～42周，平均（38.20±1.54）周;正常妊娠結(jié)局組年齡22～37歲，平均（29.30±4.11）歲;孕齡33～41周，平均（38.19±1.51）周。兩組年齡、孕齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《婦產(chǎn)科學(xué)》[3]中妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥診斷標(biāo)準(zhǔn);②單胎妊娠;③均知曉本研究?jī)?nèi)容，且與本院簽署相關(guān)知曉同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①胎位異常、頭盆不稱、宮頸機(jī)能不全等者;②精神狀態(tài)異常，無法正常溝通交流者。

1.3 方法

1.3.1 儀器? ?賽默飛世爾科技公司提供的B960型號(hào)的PCR擴(kuò)增儀、RT-PCR檢測(cè)儀器;濟(jì)南鑫貝西生物科技有限公司提供的超凈工作臺(tái);廣東佛衡儀器有限公司提供的信號(hào)為DT5-4自動(dòng)脫蓋離心機(jī);杭州瑞誠儀器有限公司提供旋渦振蕩器等。上述儀器均可正常使用。

1.3.2? 試劑? 北京百奧萊博科技有限公司提供的離心柱型提取分離試劑盒;合肥博美生物科技有限公司提供的RNA酶抑制劑;上海哈靈生物科技有限公司提供的PCR檢測(cè)試劑盒;北京歐普特科技有限公司提供的PBS洗滌液。本研究所使用的試劑均在保質(zhì)期范圍內(nèi)，使用時(shí)按照操作說明嚴(yán)格進(jìn)行。

1.3.3 檢測(cè)方法? 分別收集兩組患者產(chǎn)前清晨空腹靜脈血3 mL，以3500 r/min速度離心10 min后，取上層血清，并將其置于-20℃環(huán)境中保存、待檢，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)法檢測(cè)血清微小RNA-21水平，具體方式如下：PCR以let-7amiRNA作為內(nèi)參基因，應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（PCR）擴(kuò)增基因組RNA，首先取400 μL的血清，在其中加入同體積的裂解液，充分混合后，使RNA蛋白復(fù)合物充分分離，完成后，加入miR-21、let-7amiRNA頸環(huán)作為引物進(jìn)行RNA逆轉(zhuǎn)錄，加入引物后，先將其置于恒溫箱中，首先將溫度設(shè)置為42℃環(huán)境下逆轉(zhuǎn)錄30 min，在將溫度分別升高至55℃、72℃、95℃環(huán)境下進(jìn)行反復(fù)擴(kuò)增，隨著溫度的的變化進(jìn)行熒光信號(hào)采集，并計(jì)算miR-21水平。采用酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法測(cè)定IGFBP-3水平，具體方式如下：取患者血清置于酶標(biāo)板加上蓋，反應(yīng)120 min后，甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，采用吸水紙輕拍幾下，加入生物素抗人IGFBP-3抗體工作液，反應(yīng)60 min后，37℃反應(yīng)60 min，采用PBS洗滌液洗滌3次后，甩去多余的液體后，加入0.1 mL的顯色液，避光反應(yīng)30 min后，依據(jù)樣品的顯色情況，計(jì)算IGFBP-3水平。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn);全部計(jì)量資料均經(jīng)Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn);采用Logistics回歸分析檢驗(yàn)血清miR-21、IGFBP-3水平與妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者不良妊娠結(jié)局的相關(guān)性;繪制受試者工作曲線（ROC）得到曲線下面積（AUC），檢驗(yàn)血清miR-21、IGFBP-3水平對(duì)妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者不良妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)價(jià)值：AUC值>0.9表示預(yù)測(cè)性能較高，0.71～0.90表示有一定的預(yù)測(cè)性，0.5～0.7表示預(yù)測(cè)性能較差;P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清miR-21、IGFBP-3水平比較

不良妊娠結(jié)局組miR-21水平較正常妊娠結(jié)局組高，IGFBP-3水平較正常妊娠結(jié)局組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2 Logistics回歸分析結(jié)果

將妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者妊娠結(jié)局情況的作為因變量（1=不良妊娠結(jié)局，0=正常妊娠結(jié)局），將血清miR-21、IGFBP-3水平作為協(xié)變量（均為連續(xù)變量），進(jìn)行Logistics回歸分析，得到回歸方程：Y=-0.348-5.368X1+12.865X2，結(jié)果顯示血清miR-21水平升高、IGFBP-3水平降低是導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局的影響因素（OR>1，P<0.05）。見表2。

2.3 血清miR-21、IGFBP-3水平預(yù)測(cè)妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者不良妊娠結(jié)局發(fā)生的價(jià)值

繪制ROC曲線結(jié)果顯示，血清miR-21、IGFBP-3水平聯(lián)合預(yù)測(cè)妊妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者發(fā)生不良妊娠結(jié)局的AUC為0.976，具有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值，可獲得最佳預(yù)測(cè)價(jià)值。見表3。ROC曲線見封三圖7。

3 討論

妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥為臨床婦產(chǎn)科常見的病癥，主要指孕產(chǎn)婦在妊娠期內(nèi)出現(xiàn)膽汁酸顯著升高的現(xiàn)象，為妊娠期中、晚期特有的并發(fā)癥，具有較高的發(fā)病率，臨床主要以皮膚瘙癢、失眠、惡心等為主要表現(xiàn)，如不及時(shí)治療，可導(dǎo)致低體重兒、新生兒窒息、胎膜早破等不良妊娠結(jié)局，對(duì)孕產(chǎn)婦及圍生兒健康安全造成嚴(yán)重威脅[4-6]。目前臨床治療該疾病多采用藥物控制的方式，可有效改善患者各項(xiàng)臨床體征，但應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，仍有部分患者效果不佳，最終導(dǎo)致胎兒出現(xiàn)宮內(nèi)窘迫、羊水糞染、新生兒窒息等嚴(yán)重不良妊娠結(jié)局，威脅母親安全。因此，臨床需盡早明確導(dǎo)致妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者不良妊娠結(jié)局發(fā)生的相關(guān)原因，并積極予以對(duì)癥預(yù)防及治療措施，以改善妊娠結(jié)局。

本研究結(jié)果顯示，不良妊娠結(jié)局組miR-21水平較正常妊娠結(jié)局組高，IGFBP-3水平較正常妊娠結(jié)局組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;將不良妊娠結(jié)局的妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者作為因變量，將血清miR-21、IGFBP-3水平作為協(xié)變量，進(jìn)行Logistics回歸分析，得到回歸方程：Y=-0.348-5.368X1+12.865X2，提示血清miR-21水平升高、IGFBP-3水平降低是導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局的影響因素（OR>1，P<0.05）;繪制ROC曲線結(jié)果顯示，血清miR-21、IGFBP-3水平聯(lián)合預(yù)測(cè)妊妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者發(fā)生不良妊娠結(jié)局的AUC為0.976，具有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值，可獲得最佳預(yù)測(cè)價(jià)值。分析原因在于，miR-21屬于一種微小RNA，參與多種疾病的發(fā)生與發(fā)展，且參與妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥疾病發(fā)生與發(fā)展的全過程，具有高度保守性，可對(duì)人類1/3的蛋白基因合成與表達(dá)進(jìn)行調(diào)控，其存在于該疾病患者機(jī)體內(nèi)，參與疾病發(fā)展，可對(duì)患者膽囊內(nèi)下游靶基因發(fā)揮生物學(xué)作用，促進(jìn)內(nèi)部細(xì)胞增殖、分化及凋亡的全過程，并在血漿中形成結(jié)合度較高的蛋白，隨著孕齡的增加而升高，從而加重疾病發(fā)展，可對(duì)胎兒心率造成不良影響，影響母嬰安全[7-9]。IGFBP-3主要是由肝臟合成與分泌，其含量在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者中變化較為明顯，為妊娠晚期產(chǎn)婦機(jī)體內(nèi)IGF-1的主要結(jié)合蛋白，IGFBP-3含量降低，可導(dǎo)致IGF-1結(jié)合的結(jié)合率顯著降低，減少IGF-1的生物利用度，從而提升胎兒與孕產(chǎn)婦并發(fā)癥的發(fā)生率[10-13]。同時(shí)，IGFBP-3可影響膽汁酸的合成與分泌，并影響維生素K的吸收，導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局的發(fā)生，臨床應(yīng)重點(diǎn)予以關(guān)注[14-16]。但本研究中所納入的樣本量較少，故研究結(jié)果存在一定局限性，為進(jìn)一步證實(shí)該結(jié)果，臨床仍需大樣本量研究進(jìn)一步隨訪證實(shí)結(jié)果真實(shí)性。

綜上所述，妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者血清miR-21、IGFBP-3水平與不良妊娠結(jié)局密切相關(guān)，臨床可加強(qiáng)對(duì)血清miR-21、IGFBP-3水平的檢測(cè)，為臨床實(shí)施合理的預(yù)防與治療方案提供理論基礎(chǔ)，有利于提升患者預(yù)后質(zhì)量，降低不良妊娠結(jié)局發(fā)生率。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 肖靜，葉德華.妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥患者血清總膽汁酸和轉(zhuǎn)氨酶水平與妊娠結(jié)局的相關(guān)性研究[J].中國醫(yī)藥，2016，11（7）：1066-1071.

[2] 謝艷華，高巖，何雪蓮.妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者血清中miR-21和IGFBP-3的表達(dá)及與圍生兒結(jié)局的關(guān)系[J].國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志，2019，46（5）：1134-1136.

[3] 謝幸，茍文麗.婦產(chǎn)科學(xué)[M].8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：64-71.

[4] Uwe P，Lilianna W，Jling A，et al.Safety and efficacy of Nab-paclitaxel plus gemcitabine in patients with advanced pancreatic cancer suffering from cholestatic hyperbilirubinaemia-A retrospective analysis[J].Eur J Cancer，2018， 100（1）：85-93.

[5] Hukkinen M，Mutanen A，Pakarinen M .Small bowel dilation in children with short bowel syndrome is associated with mucosal damage，bowel-derived bloodstream infections，and hepatic injury[J].Surg Endosc，2017，162（3）：670-679.

[6] 陳嘉卿，馬俊如，石秉知，等.妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者血清、臍靜脈血鳶尾素水平變化及相關(guān)性研究[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2019，28（3）：202-205.

[7] 肖鳳蓮，鄭英如.妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥總膽汁酸水平及終止妊娠時(shí)間與圍產(chǎn)兒結(jié)局的關(guān)系[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2018，40（11）：1028-1032.

[8] 徐暉，黃夏冰，伍濤.妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者相關(guān)生化指標(biāo)的檢測(cè)及臨床意義[J].中華全科醫(yī)學(xué)，2017， 15（7）：1192-1193.

[9] 趙軍，許耀輝.血清miR-3614-5p在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥診斷中的價(jià)值[J].安徽醫(yī)藥，2019，24（3）：446-448.

[10] 鄧梅，郭麗，宋元宗.一例進(jìn)行性家族性肝內(nèi)膽汁淤積癥3型患兒的臨床及遺傳學(xué)分析[J].中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，2018，35（5）：686-690.

[11] 曹濤.妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥的生化特點(diǎn)及其圍生結(jié)局[J].中國藥物與臨床，2019，19（9）：1474-1475.

[12] 陳云云，陶瑞雪，王麗娟.子癇前期對(duì)妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者血液生化指標(biāo)及妊娠結(jié)局的影響[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2019，25（13）：1003-1006.

[13] 李陽芳，程群仙，李航，等.妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥孕婦總膽汁酸水平與妊娠不良結(jié)局研究[J].肝臟，2019，24（7）：817-818.

[14] 劉曉媛，姚熒，汪濤，等.妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥不良妊娠結(jié)局與細(xì)胞死亡方式相關(guān)性的研究進(jìn)展[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2018，53（7）：500-503.

[15] 蔣長斌，崔邦平，代文莉，等.血清生物標(biāo)志物水平在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥診斷中的臨床意義[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2017，24（1）：33-36.

[16] Tanay T，Ahmet T， Tolga A，et al.Could first-and second-trimester biochemical markers for Down syndrome have a role in predicting intrahepatic cholestasis of pregnancy？[J].Arch Med Res，2018，14（4）：846-850.

（收稿日期：2020-09-23）